第3节薄层色谱分离检测技术一课件

第3节薄层色谱分离检测技术一、分离原理

薄层色谱是一种开放性色谱，是将混合组分样品溶液点在薄层板一端的起始线上，点样处称为原点，在密闭容器中用适宜的流动相（薄层色谱法中又称为展开剂）展开。因吸附剂对不同组分的吸附能力不同，展开剂对不同组分的解吸能力也不完全相同，造成各组分在薄层析上移动的速度有快有慢，经过一段时间展开后，不同的组分彼此分开，最终形成相互分离的斑点

薄层色谱法(thinlayerchromatography，TLC)

将固定相均匀平铺在光洁表面的玻璃、塑料或金属板上形成薄层，在此薄层上进行色谱分离的方法可分为吸附、分配、分子排阻色谱法等第3节薄层色谱分离检测技术一、分离原理薄层色谱法(thi1二、薄层色谱参数1．比移值(1）定义

组分迁移的距离与展开剂迁移的距离之比(2)计算方法二、薄层色谱参数1．比移值(2)计算方法22．相对比移值(1）定义

指被测组分的比移值与参照组分的比移值之比(2）计算方法(3）特点消除系统误差，值的重复性和可靠性都比好2．相对比移值(1）定义(2）计算方法(3）特点33．分离度（1)定义衡量薄层色谱分离效果的重要指标，是指相邻两斑点中心至原点的距离之差与两斑点平均径向宽度（径向宽度是指斑点沿着展开方向的宽度）的比值

(2）计算方法3．分离度（1)定义(2）计算方法4三、仪器与材料1．吸附剂粒径5~40硅胶聚酰胺微晶纤维素氧化铝硅藻土常用硅胶H硅胶G硅胶GF254硅胶HF254

想一想

H、G、F各代表何种意思？试解释硅胶HF365？三、仪器与材料1．吸附剂粒径5~40硅胶聚酰胺微52．载板玻璃板塑料膜金属箔厚度2mm规格5cm×20cm10cm×10cm10cm×15cm10cm×20cm

种类要求

表面光滑、平整清洁玻板处理措施清洁剂或铬酸洗液浸泡洗涤，用清水充分清洗，再用蒸馏水或去离子水冲洗，表面应不附水珠，晾干备用2．载板玻璃板塑料膜金属箔厚度2mm规格5cm×2063．点样器手动全自动点样仪定量毛细管

平口微量注射器

3．点样器手动全自动点样仪定量毛细管平口微量注射器73．展开容器平底色谱专用展开缸双槽薄层色谱专用展开缸3．展开容器平底色谱专用展开缸双槽薄层色谱专用展开缸84．显色剂显色剂适用范围显色方法斑点颜色浓硫酸乙醇溶液多数有机化合物喷雾加热多数加热后呈黑色碘多数有机化合物薰蒸多数显黄棕色磷钼酸乙醇溶液醛等还原性物质喷雾烘干蓝色茚三酮试液氨基酸类喷雾或浸渍紫色或黄色三氯化铁-铁氰化钾试液含酚羟基化合物喷雾或浸渍红褐色或棕红色4．显色剂显色剂适用范围显色方法斑点颜色浓硫酸乙醇溶液多数有95．显色装置喷雾瓶浸渍槽蒸气熏蒸----双槽展开缸

5．显色装置喷雾瓶浸渍槽蒸气熏蒸----双槽展开缸106．检视装置紫外分析仪(三用)摄像设备薄层色谱扫描仪(CS9301型）6．检视装置紫外分析仪(三用)摄像设备薄层色谱扫描仪(CS11四、操作技术1．薄层板制备自制薄层板

市售薄层板无黏合剂分类含黏合剂10%～15%煅石膏0.2%～0.5%羧甲基纤维素钠水溶液

操作方法普通薄层板(玻璃、聚酰胺薄膜和铝基)高效薄层板（固定相粒径为5~7）分类操作方法临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板和聚酰胺薄膜可根据需要剪裁四、操作技术1．薄层板制备自制薄层板市售薄层板无黏合剂分12操作方法将1份固定相和3份水（或羧甲基纤维素钠水溶液）在研钵中沿同一方向研磨混匀，去除表面的气泡后，置玻璃板上使涂布均匀，或倒入涂布器（见图8-14）中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(涂层厚度为0.2mm～0.3mm)，取涂好的薄层板，置水平台上于室温下晾干后，在110℃活化30分钟，立即置于有干燥剂的干燥器中备用。手动涂布器

操作方法将1份固定相和3份水（或羧甲基纤维素钠水溶液）在研钵132．点样

普通板点样基线----距底边2.0cm

圆点状----

R≤3mm条带状-----宽度5～10mm

点或条带间距----＜8mm

点样量----＜10高效板点样基线----距底边0.8~1cm

圆点状----

R≤2mm条带状-----宽度4～8mm

点或条带间距----＜5mm

点样量----＜52．点样普通板高效板143.展开（1）展开要求

查阅A.何为边缘效应?何因？如何防止?B.展开剂加入量?展开剂展开距离？（2）展开方式上行近水平双向多次3.展开（1）展开要求查阅A.何为边缘效应?15上行展开近水平展开上行展开近水平展开164．检视有色物质斑点----目光检视无色物质斑点荧光检出法化学检出法

五、检测技术1．系统适用性试验检测灵敏度比移值

分离效能

4．检视有色物质斑点----目光检视无色物质斑点荧光检出法172．鉴别等浓度对照法----同板---大致同位、同大、同色泽等体积混合法----斑点单一、紧密结构相似对比法-----Rf不同或两斑点3．杂质检查

杂质对照品法

样品溶液的自身稀释对照法

二者合用法2．鉴别等浓度对照法----同板---大致同位、同大、同色泽184．定量方法（1）目视比色法-----半定量法（精度±10%）（2）斑点洗脱法（3）薄层扫描法(正在减小使用)

4．定量方法（1）目视比色法-----半定量法（精度±1019第4节纸色谱分离技术一、分离原理(液-液萃取)利用样品中不同组分在两相溶剂中溶解性（或分配系数）不同，当流动相携带样品流经固定相（被吸附或固定在惰性材料上的液体）时，各组分在两相间不断进行溶解、萃取、再溶解、再萃取，……，样品经过多次反复分配后，造成分配系数稍有差异的组分移行的距离不同面实现分离.二、仪器与材料

1．色谱滤纸想一想:色谱滤纸如何选择?第4节纸色谱分离技术一、分离原理(液-液萃取)二、仪器202．展开剂（1）纸色谱一般固定相是什么?（2）纸色谱展开剂如何选择?3．展开容器圆形或长方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃盖且能密闭下行纸色谱展开缸2．展开剂（1）纸色谱一般固定相是什么?（2）纸色谱展开剂如21三、操作技术1．色谱滤纸的准备（1）用于下行法的色谱滤纸（2）用于上行法的色谱滤纸2．点样样品溶解于适宜的溶剂中制成一定浓度的溶液。用定量毛细管或微量注射器吸取溶液，点于点样基线上，溶液宜分次点加，每次点加后，俟其自然干燥、低温烘干或经温热气流吹干，点样直径为2mm～4mm，点样量取决于色谱滤纸的薄厚程度和显色剂的灵敏度，一般几到几十微克。点间距离约为1.5cm～2.0cm，样点通常为圆形，也可点成条形。三、操作技术1．色谱滤纸的准备（1）用于下行法的色谱滤纸（223．展开纸色谱下行展开纸色谱上行展开3．展开纸色谱下行展开纸色谱上行展开234．斑点定位纸色谱法斑点的定位基本和薄层色谱法相似，但纸色谱法不能使用腐蚀性显色剂，也不能在高温下显色。运用纸色谱进行药物的鉴别、检查和含量测定的方法、要求与薄层色谱法一致4．斑点定位纸色谱法斑点的定位基本和薄层色谱法相似，但纸色谱24第5节应用案例一、柱色谱法的应用案例

案例8-1黄芪含量测定中样品溶液的制备1．黄芪中主要活性成分是什么?如何提取和纯化?2.提取液用氨试液洗涤的目的是什么?3.D101水洗和40%乙醇液洗脱液为何弃去?二、薄层色谱法应用案例案例8-2六味地黄丸中牡丹皮的鉴别1.牡丹皮的鉴别指标是什么?鉴别原理是什么?2.为何选择环己烷-乙酸乙酯（3:1）为展开剂?显色方式是什么?第5节应用案例一、柱色谱法的应用案例案例8-1黄芪含253．鉴别结果六味地黄丸薄层色谱图（1.丹皮酚；2~5.六味地黄丸）3．鉴别结果六味地黄丸薄层色谱图（1.丹皮酚；2~5.六味26案例8-3甲苯咪唑中有关物质检查

1.TLC法检查杂质常用有哪些方法?2.检查中为何采用硅胶GF254?3.甲苯咪唑中有关物质的限度是多少？案例8-3甲苯咪唑中有关物质检查1.TLC法检查杂质常27第3节薄层色谱分离检测技术一、分离原理

薄层色谱是一种开放性色谱，是将混合组分样品溶液点在薄层板一端的起始线上，点样处称为原点，在密闭容器中用适宜的流动相（薄层色谱法中又称为展开剂）展开。因吸附剂对不同组分的吸附能力不同，展开剂对不同组分的解吸能力也不完全相同，造成各组分在薄层析上移动的速度有快有慢，经过一段时间展开后，不同的组分彼此分开，最终形成相互分离的斑点

薄层色谱法(thinlayerchromatography，TLC)

将固定相均匀平铺在光洁表面的玻璃、塑料或金属板上形成薄层，在此薄层上进行色谱分离的方法可分为吸附、分配、分子排阻色谱法等第3节薄层色谱分离检测技术一、分离原理薄层色谱法(thi28二、薄层色谱参数1．比移值(1）定义

组分迁移的距离与展开剂迁移的距离之比(2)计算方法二、薄层色谱参数1．比移值(2)计算方法292．相对比移值(1）定义

指被测组分的比移值与参照组分的比移值之比(2）计算方法(3）特点消除系统误差，值的重复性和可靠性都比好2．相对比移值(1）定义(2）计算方法(3）特点303．分离度（1)定义衡量薄层色谱分离效果的重要指标，是指相邻两斑点中心至原点的距离之差与两斑点平均径向宽度（径向宽度是指斑点沿着展开方向的宽度）的比值

(2）计算方法3．分离度（1)定义(2）计算方法31三、仪器与材料1．吸附剂粒径5~40硅胶聚酰胺微晶纤维素氧化铝硅藻土常用硅胶H硅胶G硅胶GF254硅胶HF254

想一想

H、G、F各代表何种意思？试解释硅胶HF365？三、仪器与材料1．吸附剂粒径5~40硅胶聚酰胺微322．载板玻璃板塑料膜金属箔厚度2mm规格5cm×20cm10cm×10cm10cm×15cm10cm×20cm

种类要求

表面光滑、平整清洁玻板处理措施清洁剂或铬酸洗液浸泡洗涤，用清水充分清洗，再用蒸馏水或去离子水冲洗，表面应不附水珠，晾干备用2．载板玻璃板塑料膜金属箔厚度2mm规格5cm×20333．点样器手动全自动点样仪定量毛细管

平口微量注射器

3．点样器手动全自动点样仪定量毛细管平口微量注射器343．展开容器平底色谱专用展开缸双槽薄层色谱专用展开缸3．展开容器平底色谱专用展开缸双槽薄层色谱专用展开缸354．显色剂显色剂适用范围显色方法斑点颜色浓硫酸乙醇溶液多数有机化合物喷雾加热多数加热后呈黑色碘多数有机化合物薰蒸多数显黄棕色磷钼酸乙醇溶液醛等还原性物质喷雾烘干蓝色茚三酮试液氨基酸类喷雾或浸渍紫色或黄色三氯化铁-铁氰化钾试液含酚羟基化合物喷雾或浸渍红褐色或棕红色4．显色剂显色剂适用范围显色方法斑点颜色浓硫酸乙醇溶液多数有365．显色装置喷雾瓶浸渍槽蒸气熏蒸----双槽展开缸

5．显色装置喷雾瓶浸渍槽蒸气熏蒸----双槽展开缸376．检视装置紫外分析仪(三用)摄像设备薄层色谱扫描仪(CS9301型）6．检视装置紫外分析仪(三用)摄像设备薄层色谱扫描仪(CS38四、操作技术1．薄层板制备自制薄层板

市售薄层板无黏合剂分类含黏合剂10%～15%煅石膏0.2%～0.5%羧甲基纤维素钠水溶液

操作方法普通薄层板(玻璃、聚酰胺薄膜和铝基)高效薄层板（固定相粒径为5~7）分类操作方法临用前一般应在110℃活化30分钟。聚酰胺薄膜不需活化。铝基片薄层板和聚酰胺薄膜可根据需要剪裁四、操作技术1．薄层板制备自制薄层板市售薄层板无黏合剂分39操作方法将1份固定相和3份水（或羧甲基纤维素钠水溶液）在研钵中沿同一方向研磨混匀，去除表面的气泡后，置玻璃板上使涂布均匀，或倒入涂布器（见图8-14）中，在玻板上平稳地移动涂布器进行涂布(涂层厚度为0.2mm～0.3mm)，取涂好的薄层板，置水平台上于室温下晾干后，在110℃活化30分钟，立即置于有干燥剂的干燥器中备用。手动涂布器

操作方法将1份固定相和3份水（或羧甲基纤维素钠水溶液）在研钵402．点样

普通板点样基线----距底边2.0cm

圆点状----

R≤3mm条带状-----宽度5～10mm

点或条带间距----＜8mm

点样量----＜10高效板点样基线----距底边0.8~1cm

圆点状----

R≤2mm条带状-----宽度4～8mm

点或条带间距----＜5mm

点样量----＜52．点样普通板高效板413.展开（1）展开要求

查阅A.何为边缘效应?何因？如何防止?B.展开剂加入量?展开剂展开距离？（2）展开方式上行近水平双向多次3.展开（1）展开要求查阅A.何为边缘效应?42上行展开近水平展开上行展开近水平展开434．检视有色物质斑点----目光检视无色物质斑点荧光检出法化学检出法

五、检测技术1．系统适用性试验检测灵敏度比移值

分离效能

4．检视有色物质斑点----目光检视无色物质斑点荧光检出法442．鉴别等浓度对照法----同板---大致同位、同大、同色泽等体积混合法----斑点单一、紧密结构相似对比法-----Rf不同或两斑点3．杂质检查

杂质对照品法

样品溶液的自身稀释对照法

二者合用法2．鉴别等浓度对照法----同板---大致同位、同大、同色泽454．定量方法（1）目视比色法-----半定量法（精度±10%）（2）斑点洗脱法（3）薄层扫描法(正在减小使用)

4．定量方法（1）目视比色法-----半定量法（精度±1046第4节纸色谱分离技术一、分离原理(液-液萃取)利用样品中不同组分在两相溶剂中溶解性（或分配系数）不同，当流动相携带样品流经固定相（被吸附或固定在惰性材料上的液体）时，各组分在两相间不断进行溶解、萃取、再溶解、再萃取，……，样品经过多次反复分配后，造成分配系数稍有差异的组分移行的距离不同面实现分离.二、仪器与材料

1．色谱滤纸想一想:色谱滤纸如何选择?第4节纸色谱分离技术一、分离原理(液-液萃取)二、仪器472．展开剂（1）纸色谱一般固定相是什么?（2）纸色谱展开剂如何选择?3．展开容器圆形或长方形玻璃缸，缸上具有磨口玻璃盖且能密闭下行纸色谱展开缸2．展开剂（1）纸色谱一般固定相是什么?（2）纸色谱展开剂如48三、操作技术1．色谱滤纸的准备（1）用于下行法的色谱滤纸（2）用于上行法的色谱滤纸2．点样样品溶解于适宜的溶剂中制成一定浓度的溶液。用定量毛细管或微量注射器吸取溶液，点于点样基