基因工程的工具1课件

基因工程基因工程的诞生和发展基因工程的概念

又叫做基因拼接技术或DNA重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。基本原理:基因重组基因工程的概念基因工程的别名操作环境操作对象操作水平基本过程结果DNA重组技术生物体外基因DNA分子水平人类需要的新生物类型和产品剪切→拼接→导入→表达T磷酸二酯键1234512345A具有特异性。一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子，④作用特点：大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成少数的识别序列由4、5或8个核苷酸组成⑤限制酶的识别序列：（一）限制性核酸内切酶——“分子手术刀”例如：大肠杆菌的一种限制酶EcoRI,能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。EcoRI限制酶的切割：中轴线黏性末端黏性末端在G与A之间切割大肠杆菌的一种限制酶(EcoRⅠ)只能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。什么叫黏性末端？

被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。CCCG

GGGGGCCC中轴线SmaI限制酶的切割：CCCG

GGG

GGCCC平末端平末端只能识别CCCGGG序列，并在C和G之间切开。产生黏性末端或平末端。⑥限制酶的作用结果：要想从一段DNA中获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？会产生相同的黏性(平)末端，然后让两者的黏性(平)末端黏合起来，就可以合成重组的DNA分子了。思考?思考？限制酶、DNA水解酶DNA解旋酶的区别？（二）“分子缝合针”——DNA连接酶①作用:②作用原理：催化磷酸二酯键形成把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来.③类型：类型E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶来源功能大肠杆菌T4噬菌体恢复磷酸二酯键只能连接黏性末端能连接黏性末端和平末端(效率较低)相同点差别（二）“分子缝合针”——DNA连接酶DNA聚合酶DNA连接酶作用对象作用结果相同点寻根问底DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗?为什么?单个的脱氧核苷酸形成磷酸二酯键游离的DNA片段形成DNA的一条链形成完整的DNA分子质粒：能复制并带着插入的目的基因一起复制有切割位点有标记基因的存在，可用含氨苄青霉素的培养基鉴别。(三)基因进入受体细胞的载体

——“分子运输车”是一类存在于细菌和真菌细胞中的环状DNA分子。③作为载体的必要条件：有多个限制酶切割位点——供外源DNA片段(目的基因)插入。能在宿主细胞内稳定保存并大量复制——提供大量的目的基因。有标记基因——供重组DNA的鉴定和筛选。载体DNA必需是安全的——不会对受体细胞有害，或不能进入到除受体细胞外的其他生物细胞中去。载体DNA分子大小应适合——以便提取和在体外进行操作，太大就不便操作。1）不属于质粒被选为基因载体的理由是（

）

A、能复制

B、有多个限制酶切点C、具有标记基因D、它是环状DNAD练习3．依据下图DNA分子片段，有关酶作用机制的说法正确的是()A．限制性核酸内切酶可作用于①、②处B．解旋酶作用于③处C．DNA连接酶作用于③处D．获取目的基因要同时使用解旋酶和限制性核酸内切酶B4．(2011年南京高三第一次测试)科学家在某种植物中找到了抗枯萎的基因，并以质粒为载体，采用转基因方法培育出了抗枯萎病的金茶花新品种，下列有关说法正确的是()A．质粒是最常用的载体之一，它仅存在于原核细胞中B．将抗枯萎基因连接到质粒上，用到的工具酶仅是DNA连接酶C．用叶肉细胞作为受体细胞培育出的植株不能表现出抗枯萎性状D．通过该方法获得的抗枯萎病金茶花，产生的配子不一定含抗枯萎病基因D3.已知标记基因有抗四环素基因和抗氨苄青霉素的基因，现探讨某细菌的质粒中有无标记基因或标记基因是什么？请设计实验、预期实验结果，并得出相应的实验结论。对照组：不添加抗生素实验组1：添加一定浓度的四环素实验组2：添加一定浓度的氨苄青霉素实验组3：添加一定浓度的四环素和氨苄青霉素对照组实验组1实验组2实验组3结论预期一＋＋＋＋预期二＋＋－－预期三＋－＋－预期四＋－－－对照组：不添加抗生素实验组1：添加一定浓度的四环素实