免疫学检验室内质量控制的标准操作程序

PAGEPAGE4/41.0目的：室内质量控制〔IQC〕是由实验室的工作人员采用一系列的方法,连续的评价实验室工作的可靠程度,分析前质控:ELISA临床意义；熟悉检测技巧,了解易出差错的环节与难点；熟悉检测仪器的原理与性能；掌握数据处理的能力和质量控制知识.某些特殊项目的检测如抗HIV等需经有关部门组织的专门培训班,考试合格后持证上岗.室内质控血清：采用卫生部或省临床检验中心制备的质控血清试剂盒选择Panel根据该试剂生物制品鉴定所的批批检定报告,了解其质量水平,按照质量计划选择灵敏度高的或特异性高的试剂；2.4.2参考室间质评报告中对试剂的评价结果,了解不同试剂的质控成绩.根据权威部门发布的试剂评价结果,了解市场上试剂的质量优劣.：ELISA加样量小〔5-100ｕl洗板机：每个厂家设置洗板后的残留液有各自的规定一般不超过2ul孔是否堵塞；0.0010.5%.标本的采集和保存标本采集时应尽量避免溶血,因红细胞破裂可释放过氧化物酶活性物质干扰立可读方法的结果,以HRP为标记的ELISA测定中,溶血标本会增加非特异性显色造成假阳性.长菌的标本同样的道理也易产生假阳性,因菌体中可能含有内源性HRP也会产生假阳性反应.标本在冰箱中保存时间过长易导致血清IgG4℃5成测试.如需保存一周以上则要-20℃冰冻保存,冻结血清融解后,蛋白质局部浓缩,分布不均,融解时应上下颠倒充分混匀,同时避免气泡.可上下颠倒混和,不要在混匀器上强烈振荡.反复冻融会使抗体效价跌落,如需保存作多次检测,宜少量分装冰存.ELISA的灵敏度>1ng/ml水平上,标本间的污染要尽量避免,尤其不应与生化试验用同一管标本.分析中质控：ELISA实验的结果受操作影响很大,每个步骤包括加样,温育,洗涤,显色,酶标仪读数均应认真负责才能充分发挥ELISA的高灵敏,强特异的优点.因此,应建立实验项目的标准操作程序<SOP>.加样30如用滴瓶滴加试剂应先将滴瓶摇匀并挤去第一滴有气泡的试剂后加样.温育抗原抗体反应需要在一定温度下〔37°C〕,经过一定的时间才能达到反应的平衡点3.2.2ELISA1/3反应板不宜叠放,注意温育的温度和时间应按规定控制,一个人操作时,一次不宜多于两块板同时测定.洗涤手工洗涤一般采用浸泡方法：1〕甩去孔内反应液；2〕用洗涤液过洗一遍〔即注满孔后即甩去〕；3〕微孔重新注满洗液后浸泡2-3分钟,间歇摇动；4〕甩去孔内液体,拍板,用纸吸干.重复以上操作至少5次.注意各种试剂盒的洗涤液尽量不要混用.洗板机洗板一定要预先把板架放平,使洗板机上的每个放液和吸液纤孔都能一致地插入孔底,将孔内液体全部吸干,同时要设置一定的浸泡时间.如出现机洗后拍板有较多残留液时应再用手工洗2次以上.关机前要用蒸溜水冲洗管道,避免堵孔.显色HRP一定要按照说明书规定的时间温度〔一般为37°C,10-15分钟〕恒定反应后终止或根据临界值质控血清吸光度值达0.2左右使的时间而恒定反应时间.酶标仪判读结果显色反应终止后应立刻比色〔30分钟内〕.常见的显色系统有OPD和TMB二种,以后者最为常见,而TMB酸不易终止因此必须尽快比色以免影响结果.OPD终止后显棕色,测定波长为490nm；TMB终止后显黄色,测定波长为450nm,二种底物的校正波长均用630nm..分析后质控：报告方式定性试验：国内外为便于统一计算,一律按S/COV方式报告,S为标本A值,COV即CutOff值〔或COV〕夹心法和间接法以S/COV≥1S/COV﹤1COVA〕COV=2.1×N〔当N0.050.05计〕,此公式由P/N>2.1COV=0.5×NC〕COV=N+C〔C为常数〕,用于间接法.D)COV=C×P+NC定量分析：严禁用定性试剂盒做定量分析.用已知量的系列标准品,绘制标准曲线,结果以绝对量或单位表示.ELISA的标准曲线每次都要和待现有的ELISA记录如试验结果对临床诊断有决定意义,其样本应保留,至少与病历保存期一致定性试验ELISAQC要保证试验的灵敏度和特异性.生化的质控图方法仅能观察灵敏度而无法监控特异性.建议使用临界值血清界定法：将试剂盒所设的测,临界值S/C.O≥1,高值质控血清S/C.O≥10,正常人血清A0.05~0.07"HOOKQC定量试验ELISA定量试验常见于肿瘤因子〔如AFP,CEA,CA系列〕,激素类,免疫球蛋白类,这些物质在体内有一定的量〔正常范围〕,超出这个量才呈病理情况,故需定量测定.定量试验的质控方法可参考生