Vc含量测定课件

实验五芦笋中Vc的提取及含量测定实验目的实验原理试剂仪器实验步骤结果计算注意事项一、实验目的1、了解Vc的结构、性质、作用及测定方法。2、熟悉样品预处理、定容、分光光度计的使用。4、掌握2，4–二硝基苯肼法测Vc的原理与方法。3、掌握芦笋中Vc的提取方法。维生素C脱氢维生素CVc又称抗坏血酸（ascorbicacid）维生素的结构C可以解离出两个H+烯二醇结构具有强还原性脱氢形式不稳定易降解二酮古乐糖酸+H2O-H2O（还原型）（氧化型）有活性还原型与氧化型可相互转化[O]草酸+苏阿糖酸易溶于水，溶于乙醇，不溶于乙醚、苯。酸性溶液(pH＜4)较稳定，中性以上极不稳定。对光、热、金属离子（铁、铜）敏感。容易被氧化。维生素C的特性用活性炭把样品中的还原型抗坏血酸氧化为脱氢型抗坏血酸，继续氧化为二酮古乐糖酸。二酮古乐糖酸与2，4-二硝基苯肼偶联生成红色的脎。根据脎在硫酸溶液中的含量与总抗坏血酸含量成正比进行比色测定。实验原理三、试剂与仪器（1）1％草酸、2％草酸（2）活性炭（经HCl处理无铁离子）（4）2％2,4-二硝基苯肼（5）4.5mol·L-1硫酸溶液（3）1%硫脲、2%硫脲（6）抗坏血酸标准溶液（1mg·

mL-1）提取Vc氧化处理控制氧化显色四、实验步骤1、样品中Vc的提取100g芦笋样品+100mL2%草酸捣碎机捣成匀浆转移至烧杯，1%草酸洗涤捣碎机杯、杯盖及刀数次，洗涤液一并转移1%草酸洗涤布氏漏斗数次抽滤至残渣无色滤液移至500mL容量瓶，1%草酸洗涤抽滤瓶数次，洗涤液一并转移，定容。减压过滤提取液比色管编号：123氧化稀释液4.00mL二硝基苯肼2.00mL37℃恒温水浴3h冰水冷却室温冷却，滴加硝基苯肼2.00mL，15min后置于冰水滴加5mL85%硫酸520nm，1cm比色皿测A取出，室温置30min3、显色测A容量瓶编号：1472356Vc标准使用液1.002.004.006.008.009.0010.001%硫脲定容二硝基苯肼2.00mL37℃恒温水浴3h冰水冷却，滴加5.00mL85%硫酸取出，室温置30min520nm，1cm比色皿测A五、结果计算每百克食品中含抗坏血酸的毫克数

C--------×100

W

C：相当于标准溶液的量(mg)W：测定时所取得样品溶液相当于样品的量(g)式中：X---样品中总抗坏血酸含量，mg/100gc---从标准曲线查得“样品氧化液”中总Vc的浓度，ug/mlV---试样用1%草酸定容的体积，mlm---样品质量，gF---样品氧化处理过程中的稀释倍数5、计算：①从标准曲线查出氧化稀释液的维生素C的浓度。ρ

ug/mL②计算从提取到氧化处理过程中稀释的倍数。F：对于干样，F＝2；对于鲜样，F＝取浆量/2样品量×2③按教材P202公式计算总抗坏血酸含量。mg/100g五、注意事项说明：(1)

加入85％硫酸后，将试管从水中取出。溶液的颜色会继续变深所以必须计算好，加入硫酸后准于30分钟内比色。(2)硫酸可防止抗坏血酸被氧化，且可帮助准于的形成，最终溶液中硫酸的浓度均需一致，否则影响色度。还原型抗坏血酸脱氢型抗坏血酸氧化二酮古乐糖酸氧化二酮古乐糖酸2，4-二硝基苯肼＋脎浓硫酸双-2，4-二硝基苯520nm比色3、测定步骤样品的制备显色硫酸处理比色氧化称一定样（100g)鲜样→加等量1%草酸→于高速捣碎机捣碎→取匀浆1—40g→用1%草酸定容100ml→过滤→滤液待用取滤液25ml→加2g活性炭→摇1分钟→静置过滤→弃去初滤液，取滤液10ml→加入2%硫脲溶液→混匀→得样品氧化液取上述氧化液各4ml于三支试管中→向其中两支管加入2%2，4-二硝基苯肼1.0ml,另一管作空白→将三支管加盖→于37℃保温箱3小时→取出后样品管放入冰水中→样品空白管取出后冷至室温→在样品空白管加入2，4-二硝基苯肼1ml→置于室温下放置10-15min→样品管和空白管都于冰浴中向上述已放入冰水中的三支试管各加入（9+1）H2SO45ml于各管中（边加边摇）→将试管从冰浴中取出→室温下放置30分钟后立即比色，在520nm测吸光度，从标准曲线上查出相应的含量THEEND①所有试剂最好用重蒸馏水配制。②样品采取后，应浸泡在已知量的2%草酸溶液中，以防止维生素C氧化损失。测定时整个操作过程要迅速，防止抗坏血酸被氧化。③若测动物性样品，须用10%三氯乙酸代替2%草酸溶液提取。④若样品滤液颜色较深，影响滴定终点观察，可加入白陶土再过滤。白陶土使用前应测定回收率。⑤若样品中含有Fe2+、Cu2+、Sn2+、亚硫酸盐、硫代硫酸