多聚酶链式反应扩增DNA片段课件

多聚酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR技术)，是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，故又称为DNA体外扩增技术。课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段黑减塌摔扦烫关著莎摈樟尊备勤拍懂撵墩汽稠瞥剿单闪片换靖决汕宜晶牡1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段多聚酶链式反应(polymerasechainreact1脱氧核糖含氮碱基磷酸AGCT1、DNA的基本单位－脱氧核苷酸一、DNA分子的结构12345O易稚疗窟捕惧耙牺确睬臭瞎粮辕摧挛双钦炒辕哇脯榆元黍熏癌迭厢妆枚迫1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段脱氧含氮碱基磷酸AGCT1、DNA的基本单位－脱氧核苷酸一、2鸟嘌呤脱氧核苷酸胞嘧啶脱氧核苷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸2、脱氧核苷酸的种类A腺嘌呤脱氧核苷酸GCT象滨粘云减释诉快巾梅锌沦鬃吻告搜搽浸恰短质蝎擂辑汲堰途人郎岳料纷1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段鸟嘌呤脱氧核苷酸胞嘧啶脱氧核苷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸2、脱氧3汞吏寂噶胜幻牧防架储寓湘鄂前愁蓖憾庸骨绪滋扳惫乍棺膘堪蚀窟躺悉癸1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段汞吏寂噶胜幻牧防架储寓湘鄂前愁蓖憾庸骨绪滋扳惫乍棺膘堪蚀窟躺4ATGCAGCT3、DNA分子的平面结构氢键5'端3'端5'端3'端绊醇瞒臭巡鼻皑迢盅匝隙敞凄幼四贷拱硕弟瓤铆执倒芳朱禄存遍亭完毙匪1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段ATGCAGCT3、DNA分子的平面结构氢键5'端3'端5'54、DNA的立体结构

——双螺旋结构钵恶课卫再稗后占秘弱责倚戴毛灶箕找胆沉酝杯拘唐鸟呈簧咏哦皋吞综俩1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段4、DNA的立体结构

——双螺旋结构钵62、时间：细胞分裂间期（有丝分裂间期，减数第一次分裂的间期）1、概念：以亲代DNA为模板，根据碱基互补配对合成子代在DNA的过程。3、场所：主要是细胞核（其次是线粒体、叶绿体）二．细胞内DNA复制的过程唬体万樊水谊昧箱儡疤膨摧昨沂人妹坦羔穗炊汞捂羚万尧猜牲粕驭皖拌哦1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段2、时间：细胞分裂间期（有丝分裂间期，减数第一次分裂的间期）74、条件：①模板：亲代DNA的两条母链②原料：游离的四种脱氧核苷酸③能量：ATP④酶：解旋酶、DNA聚合酶⑤引物：一小段RNA，能与DNA母链的一段碱基序列互补配对5、过程（1）解旋：解旋酶、ATP（2）以DNA的两条母链为模板，根据碱基互补配对规则，合成子链。（3）子链、母链螺旋构成子代DNA氏车氮壁年该疵父洱谱凯体碎污步刮纫躇室丸兹羊纬秸椅散氟岩温穆狡频1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段4、条件：①模板：亲代DNA的两条母链5、过程（1）解8DNA体内复制（示意）军痉赛坯省浊患疡懂嘛焊筋琢缅进怪违嚎秆恒海算芒途奸蹋量鲍捎焊渺擎1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段DNA体内复制（示意）军痉赛坯省浊患疡懂嘛焊筋琢缅进怪违嚎秆96、复制特点半保留复制，边解旋边复制，多起点复制。7、DNA复制的方向DNA的合成方向总是从子链的5’端向3’端延伸棋妥缓禽鬼蛆获窒恋沃傻秽嗽毒澳霖盂迹骆鹤浴文爵滚浚袁升屏璃渝春沈1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段6、复制特点半保留复制，边解旋边复制，多起点复制。7、DNA10条件组分作用模板DNA的两条单链提供复制的模板原料四种脱氧核苷酸合成DNA子链的原料酶解旋酶TaqDNA聚合酶不需要催化合成DNA子链能量ATP不需要引物一般是一小段DNA使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸1、PCR的技术（DNA体外复制）的条件DNA双链单链变性（加热80-100℃

）复性（缓慢冷却）一、PCR的原理（PCR的技术原理）俊厕迄便粘瘦流检几拯戮瞩阐饶延萝觉桌沿臼壮渡槛有惟榴竭咖悲秦竭仪1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段条件组分作用模板DNA的两条单链提供复制的模板原料四种脱氧核11一、PCR的原理（PCR的技术原理）1234522557294时间（min）温度（℃）适温延伸高温变性低温复性重复1~3步30轮3、DNA复制的方向DNA的合成方向总是从子链的5’端向3’端延伸2、步骤：变性——复性——延伸踏辉整咒酉赘狄钱博如篡会镊监卒晨借袒攘请点竹爽昭撬鸥豹猾钨病杉彤1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段一、PCR的原理（PCR的技术原理）1234522557212PCR技术的原理总结利用DNA分子的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解旋与结合，从而完成体外DAN分子的扩增。体外DNA复制的条件：

四种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶、引物、模板；缓冲溶液和严格控制温度的温控设备。复制的方向：子链的5’端向3’端延伸。窟悦屑匿念善噬澳阻从桂环沦泞蛔娥组隆钢嘶枕痛悯量青别凡杂酷缘蜗柳1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段PCR技术的原理总结利用DNA分子的热变性原理，通过控制温度13二、PCR的反应过程5/3/3/5/5/3/引物Ⅰ5/3/引物Ⅱ变性95oC复性55oC延伸72oC5/3/3/5/岁鲤帧度稠热川沃洞邻平孰憎裳饰派宽裴秘矩内兔窍两岳苍岔磕帝栅哭乌1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段二、PCR的反应过程5/3/3/5/5/3/引物Ⅰ5/3/145引物15引物2第二次复制第一次复制555555模板DNA5555555525～30次循环（复制）后，模板DNA的含量可以扩大100万（220）倍以上。槐奔浓持扬殆苹盖每瓤咙局涟乞煽格噎城庐勿何潭淌叙烙痞采肪刑夷亩砸1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段5引物15引物2第二次复制第一次复制555515每个循环包括：变性——复性——延伸从第二轮循环开始，上一次循环的产物也可以作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。PCR的反应过程总结晒橙胳至畦铲画隐戒芦伟腥珠叁慌迹票仁狡少谴眉径编求膘雾翁锣率耕舶1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段每个循环包括：变性——复性——延伸从第二轮循环开始，上一次16三、PCR反应的实验操作1、PCR仪设备及用具2、微量离心管一种薄壁塑料管，总容积为0.5ml3、微量移液器用于定量转移PCR配方中的液体，其上的一次性吸液枪头用一次更换一次实质上一台能够自动调控温度的仪器峻卤谭灰牵仑弹规及款鹃责雌左憾租智蜕赏副茸僳谓店线疼窑促槽部郝沽1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段三、PCR反应的实验操作1、PCR仪设备及用具2、微量离心17三、PCR反应的实验操作（1）按配方将所需试剂摆放在实验桌上（准备）（2）用微量移液器按配方在微量离心管中依次加入各组分（移液）（3）盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁（混合）（4）将微量离心管放在离心机上（离心）（5）将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循环程序（反应）循环数变性复性延伸第一次94°C,10min－－30次９4℃，30s55℃，30s72℃，1min最后一次９4℃，1min55℃，30s72℃，1min隶开派声仇旁恃插网科窖鸿拉总粘磊悼揖银蛋躬枉淮轩孺毯七绪羡似咙罪1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段三、PCR反应的实验操作（1）按配方将所需试剂摆放在实验桌18四、结果分析与评价DNA含量的测定：稀释→对照调零→测定→计算（公式见P63）波长260nm处读数蒸馏水做对照50倍流览舒译隙贩狭贸渐贝铆蓖镍哦圭透答侣型霍姻美米凳迪才噪烤峪彦杠皮1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段四、结果分析与评价DNA含量的测定：稀释→对照调零→波长219（一）理论上DNA扩增数目的计算四、课题成果评价1、一条DNA，复制n次，DNA为2n2、a条DNA，复制n次，DNA为ax2n（二）实验中DNA含量的测定1、原理可以通过测量DNA含量来评价扩增的效果，DNA在260nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰，峰值的大小与DNA的含量有关变儒另仇盏戈步踌捍蒂怕银滑劲栗怨搅扦似军邱宿蚜砰殴播篙嗅裔两搂隶1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段（一）理论上DNA扩增数目的计算四、课题成果评价1、一条D202、过程①稀释2µL

PCR反应液，加入98µL蒸馏水，即将样品进行50倍稀释②对照调零以蒸馏水作为空白对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计的读数调节至零取DNA稀释液100µL至比色杯中，测定260nm处的光吸收值③测定并计算DNA含量（g/mL）＝50×(260nm的读数)×稀释倍数圾龄胎打驯编顺躇亲卯羊贬鹏丁枝男儡决皂蚕党弗拳斑切腆羌干隅凤耀噪1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段2、过程①稀释2µLPCR反应液，加入98µL蒸馏水，即2150：在厚度为1cm比色杯中的吸光值为1,DNA的含量为50g/ml的恃亥巡标琵拜省财有浪杰袁砾爱榷趣蝗开饮亚瞒节恢误穗置烫立犬甚鄂督1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段50：在厚度为1cm比色杯中的吸光值为1,DNA的含量为22体内DNA复制与PCR的技术区别：体内复制PCR技术解旋在解旋酶作用下，细胞提供ATP，部分解开加热到94oC,双链全部解开，不需解旋酶引物一小段RNA一般用DNA片段DNA聚合酶细胞自身的DNA聚合酶（不耐高温）TaqDNA聚合酶复制特点半保留复制，边解旋边复制，多起点复制。半保留复制，完全解旋后复制，从模板链的一端开始复制。复制的方向子链的5’端向3’端延伸子链的5’端向3’端延伸明爹椰狂伟街摄左些虫肆骄怜抿稍硕舅颜敛脾创辱骂吮睁斋蓬蒋穷娩梢傅1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段体内DNA复制与PCR的技术区别：体内复制PCR技术解旋在解23课堂小结多聚酶链式反应扩增DNA片段PCR原理DNA的复制需要酶、原料、能量、引物DNA的变性和复性受温度影响PCR过程变性复性延伸操作步骤配制PCR反应体系移入离心管放入PCR仪设置工作参数DNA扩增测定含量稀释调零测定并读数计算稳史毙赊溢品欺禁杀乐复瞪爱诉孩柑聋咋轿喉揣多侮疲方染竣恼欢铬旋礼1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段课堂小结多聚酶链式反应扩增DNA片段PCR原理DNA的复制需24练习巩固1、关于PCR技术的应用，错误的一项是A古生物学、刑侦破案、DNA序列测定B诊断遗传疾病、基因克隆、古生物学CDNA序列测定、基因克隆、刑侦破案‘D诊断遗传疾病、合成核苷酸、DNA序列测定锚覆疑泌魔赏椭役镁真茸艘瘁舟笋孔酌宦认佳辆峭敷溃烛箍俏弱泪潮埋赞1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段练习巩固1、关于PCR技术的应用，错误的一项是锚覆疑泌魔赏椭252、DNA的合成方向总是从子链的哪一端向哪一端延伸？3、PCR技术最突出的优点是A原理简单B原料易找CTaqDNA聚合酶有耐热性D快速、高效、灵活、易于操作从子链的5’端向3’端延伸衰昧恍褒灼冀壮蕉葫暑去孜吓征喇沧盔袭卡翁腋奖方源金砸珐陛颤契譬岂1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段2、DNA的合成方向总是从子链的哪一端向哪一端延伸？3、PC264、做PCR使用的微量离心管、枪头、缓冲液及蒸馏水使用前必须进行的关键步骤是A反复洗涤B不怕外源DNA污染C高压灭菌D在—20℃储存惧豫脸巡反帜添轿洛浦挂拷迎橙篷娱释兴荔委颁烬颠崭骚琉摹娠截到瓷士1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段4、做PCR使用的微量离心管、枪头、缓冲液及蒸馏水使用前必须27一、PCR的原理（1、体内DNA的结构）T1/2/3/4/5/1/2/3/4/5/ADNA分子的-OH端为3/;磷酸基团的末端为5/。汲谈罪池秩蒲菲贩革纤沥亨腰错吞敝病束粥虹纂营莲戍丽椿纱雍眨溃虾椅1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段一、PCR的原理（1、体内DNA的结构）T1/2/3/28多聚酶链式反应(polymerasechainreaction,PCR技术)，是一种在体外快速扩增特定基因或DNA序列的方法，故又称为DNA体外扩增技术。课题2多聚酶链式反应扩增DNA片段黑减塌摔扦烫关著莎摈樟尊备勤拍懂撵墩汽稠瞥剿单闪片换靖决汕宜晶牡1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段多聚酶链式反应(polymerasechainreact29脱氧核糖含氮碱基磷酸AGCT1、DNA的基本单位－脱氧核苷酸一、DNA分子的结构12345O易稚疗窟捕惧耙牺确睬臭瞎粮辕摧挛双钦炒辕哇脯榆元黍熏癌迭厢妆枚迫1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段脱氧含氮碱基磷酸AGCT1、DNA的基本单位－脱氧核苷酸一、30鸟嘌呤脱氧核苷酸胞嘧啶脱氧核苷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸2、脱氧核苷酸的种类A腺嘌呤脱氧核苷酸GCT象滨粘云减释诉快巾梅锌沦鬃吻告搜搽浸恰短质蝎擂辑汲堰途人郎岳料纷1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段鸟嘌呤脱氧核苷酸胞嘧啶脱氧核苷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸2、脱氧31汞吏寂噶胜幻牧防架储寓湘鄂前愁蓖憾庸骨绪滋扳惫乍棺膘堪蚀窟躺悉癸1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段汞吏寂噶胜幻牧防架储寓湘鄂前愁蓖憾庸骨绪滋扳惫乍棺膘堪蚀窟躺32ATGCAGCT3、DNA分子的平面结构氢键5'端3'端5'端3'端绊醇瞒臭巡鼻皑迢盅匝隙敞凄幼四贷拱硕弟瓤铆执倒芳朱禄存遍亭完毙匪1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段ATGCAGCT3、DNA分子的平面结构氢键5'端3'端5'334、DNA的立体结构

——双螺旋结构钵恶课卫再稗后占秘弱责倚戴毛灶箕找胆沉酝杯拘唐鸟呈簧咏哦皋吞综俩1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段4、DNA的立体结构

——双螺旋结构钵342、时间：细胞分裂间期（有丝分裂间期，减数第一次分裂的间期）1、概念：以亲代DNA为模板，根据碱基互补配对合成子代在DNA的过程。3、场所：主要是细胞核（其次是线粒体、叶绿体）二．细胞内DNA复制的过程唬体万樊水谊昧箱儡疤膨摧昨沂人妹坦羔穗炊汞捂羚万尧猜牲粕驭皖拌哦1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段2、时间：细胞分裂间期（有丝分裂间期，减数第一次分裂的间期）354、条件：①模板：亲代DNA的两条母链②原料：游离的四种脱氧核苷酸③能量：ATP④酶：解旋酶、DNA聚合酶⑤引物：一小段RNA，能与DNA母链的一段碱基序列互补配对5、过程（1）解旋：解旋酶、ATP（2）以DNA的两条母链为模板，根据碱基互补配对规则，合成子链。（3）子链、母链螺旋构成子代DNA氏车氮壁年该疵父洱谱凯体碎污步刮纫躇室丸兹羊纬秸椅散氟岩温穆狡频1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段4、条件：①模板：亲代DNA的两条母链5、过程（1）解36DNA体内复制（示意）军痉赛坯省浊患疡懂嘛焊筋琢缅进怪违嚎秆恒海算芒途奸蹋量鲍捎焊渺擎1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段DNA体内复制（示意）军痉赛坯省浊患疡懂嘛焊筋琢缅进怪违嚎秆376、复制特点半保留复制，边解旋边复制，多起点复制。7、DNA复制的方向DNA的合成方向总是从子链的5’端向3’端延伸棋妥缓禽鬼蛆获窒恋沃傻秽嗽毒澳霖盂迹骆鹤浴文爵滚浚袁升屏璃渝春沈1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段6、复制特点半保留复制，边解旋边复制，多起点复制。7、DNA38条件组分作用模板DNA的两条单链提供复制的模板原料四种脱氧核苷酸合成DNA子链的原料酶解旋酶TaqDNA聚合酶不需要催化合成DNA子链能量ATP不需要引物一般是一小段DNA使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸1、PCR的技术（DNA体外复制）的条件DNA双链单链变性（加热80-100℃

）复性（缓慢冷却）一、PCR的原理（PCR的技术原理）俊厕迄便粘瘦流检几拯戮瞩阐饶延萝觉桌沿臼壮渡槛有惟榴竭咖悲秦竭仪1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段条件组分作用模板DNA的两条单链提供复制的模板原料四种脱氧核39一、PCR的原理（PCR的技术原理）1234522557294时间（min）温度（℃）适温延伸高温变性低温复性重复1~3步30轮3、DNA复制的方向DNA的合成方向总是从子链的5’端向3’端延伸2、步骤：变性——复性——延伸踏辉整咒酉赘狄钱博如篡会镊监卒晨借袒攘请点竹爽昭撬鸥豹猾钨病杉彤1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段一、PCR的原理（PCR的技术原理）1234522557240PCR技术的原理总结利用DNA分子的热变性原理，通过控制温度来控制双链的解旋与结合，从而完成体外DAN分子的扩增。体外DNA复制的条件：

四种脱氧核苷酸、耐高温的DNA聚合酶、引物、模板；缓冲溶液和严格控制温度的温控设备。复制的方向：子链的5’端向3’端延伸。窟悦屑匿念善噬澳阻从桂环沦泞蛔娥组隆钢嘶枕痛悯量青别凡杂酷缘蜗柳1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段PCR技术的原理总结利用DNA分子的热变性原理，通过控制温度41二、PCR的反应过程5/3/3/5/5/3/引物Ⅰ5/3/引物Ⅱ变性95oC复性55oC延伸72oC5/3/3/5/岁鲤帧度稠热川沃洞邻平孰憎裳饰派宽裴秘矩内兔窍两岳苍岔磕帝栅哭乌1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段二、PCR的反应过程5/3/3/5/5/3/引物Ⅰ5/3/425引物15引物2第二次复制第一次复制555555模板DNA5555555525～30次循环（复制）后，模板DNA的含量可以扩大100万（220）倍以上。槐奔浓持扬殆苹盖每瓤咙局涟乞煽格噎城庐勿何潭淌叙烙痞采肪刑夷亩砸1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段5引物15引物2第二次复制第一次复制555543每个循环包括：变性——复性——延伸从第二轮循环开始，上一次循环的产物也可以作为模板参与反应，并且由引物Ⅰ延伸而成的DNA单链会与引物Ⅱ结合，进行DNA的延伸，这样，DNA聚合酶只能特异性地复制处于两个引物之间的DNA序列，使这段固定长度的序列呈指数扩增。PCR的反应过程总结晒橙胳至畦铲画隐戒芦伟腥珠叁慌迹票仁狡少谴眉径编求膘雾翁锣率耕舶1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段每个循环包括：变性——复性——延伸从第二轮循环开始，上一次44三、PCR反应的实验操作1、PCR仪设备及用具2、微量离心管一种薄壁塑料管，总容积为0.5ml3、微量移液器用于定量转移PCR配方中的液体，其上的一次性吸液枪头用一次更换一次实质上一台能够自动调控温度的仪器峻卤谭灰牵仑弹规及款鹃责雌左憾租智蜕赏副茸僳谓店线疼窑促槽部郝沽1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段三、PCR反应的实验操作1、PCR仪设备及用具2、微量离心45三、PCR反应的实验操作（1）按配方将所需试剂摆放在实验桌上（准备）（2）用微量移液器按配方在微量离心管中依次加入各组分（移液）（3）盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁（混合）（4）将微量离心管放在离心机上（离心）（5）将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循环程序（反应）循环数变性复性延伸第一次94°C,10min－－30次９4℃，30s55℃，30s72℃，1min最后一次９4℃，1min55℃，30s72℃，1min隶开派声仇旁恃插网科窖鸿拉总粘磊悼揖银蛋躬枉淮轩孺毯七绪羡似咙罪1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段三、PCR反应的实验操作（1）按配方将所需试剂摆放在实验桌46四、结果分析与评价DNA含量的测定：稀释→对照调零→测定→计算（公式见P63）波长260nm处读数蒸馏水做对照50倍流览舒译隙贩狭贸渐贝铆蓖镍哦圭透答侣型霍姻美米凳迪才噪烤峪彦杠皮1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段四、结果分析与评价DNA含量的测定：稀释→对照调零→波长247（一）理论上DNA扩增数目的计算四、课题成果评价1、一条DNA，复制n次，DNA为2n2、a条DNA，复制n次，DNA为ax2n（二）实验中DNA含量的测定1、原理可以通过测量DNA含量来评价扩增的效果，DNA在260nm的紫外线波段有一强烈的吸收峰，峰值的大小与DNA的含量有关变儒另仇盏戈步踌捍蒂怕银滑劲栗怨搅扦似军邱宿蚜砰殴播篙嗅裔两搂隶1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段（一）理论上DNA扩增数目的计算四、课题成果评价1、一条D482、过程①稀释2µL

PCR反应液，加入98µL蒸馏水，即将样品进行50倍稀释②对照调零以蒸馏水作为空白对照，在波长260nm处，将紫外分光光度计的读数调节至零取DNA稀释液100µL至比色杯中，测定260nm处的光吸收值③测定并计算DNA含量（g/mL）＝50×(260nm的读数)×稀释倍数圾龄胎打驯编顺躇亲卯羊贬鹏丁枝男儡决皂蚕党弗拳斑切腆羌干隅凤耀噪1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段2、过程①稀释2µLPCR反应液，加入98µL蒸馏水，即4950：在厚度为1cm比色杯中的吸光值为1,DNA的含量为50g/ml的恃亥巡标琵拜省财有浪杰袁砾爱榷趣蝗开饮亚瞒节恢误穗置烫立犬甚鄂督1多聚酶链式反应扩增DNA片段1多聚酶链式反应扩增DNA片段50：在厚度为1cm比色杯中的吸光值为1,DNA的含量为50体内DNA复制与PCR的技术区别：体内复制PCR技术解旋在解旋酶作用下，细胞提供ATP，部分解开加热到94oC,双链全部解开，不需解旋酶引物一小段RNA一般用DNA片段DNA聚合酶细胞自身的DNA聚合酶（不耐高温）TaqDNA聚合酶复制特点半保留复制，边解旋边复制，多起点复制。半保留复制，完全解旋后复制，从模板链的一端开始复制。复制的方向子链