免疫组化结果判断及常见问题的分析课件

免疫组化结果判断及常见问题的分析56、死去何所道，托体同山阿。57、春秋多佳日，登高赋新诗。58、种豆南山下，草盛豆苗稀。晨兴理荒秽，带月荷锄归。道狭草木长，夕露沾我衣。衣沾不足惜，但使愿无违。59、相见无杂言，但道桑麻长。60、迢迢新秋夕，亭亭月将圆。免疫组化结果判断及常见问题的分析免疫组化结果判断及常见问题的分析56、死去何所道，托体同山阿。57、春秋多佳日，登高赋新诗。58、种豆南山下，草盛豆苗稀。晨兴理荒秽，带月荷锄归。道狭草木长，夕露沾我衣。衣沾不足惜，但使愿无违。59、相见无杂言，但道桑麻长。60、迢迢新秋夕，亭亭月将圆。免疫组化结果判断

及常见问题分析武汉大学病理学教研室杨飞免疫组化结果判断及常见问题的分析56、死去何所道，托体同山阿1免疫组化结果判断及常见问题的分析课件2免疫组化结果判断及常见问题的分析课件3免疫组化结果判断及常见问题的分析课件4免疫组化结果判断及常见问题的分析课件5一、特异性染色的判断1.特定的定位

细胞阳性——根据靶抗原不同而呈现胞膜型、胞浆型或胞核型间质阳性——表现为细胞外着色，局限性或弥散性2.染色的不均一性阳性细胞的染色分布不均，片状或点状散在分布染色强弱不等，颜色深浅反映抗原量的多少3.排除人为造成的非特异性染色

切片的折叠、刀痕，色素沉着，组织细胞坏死。4.颗粒性显色

DAB显色在高倍镜下呈颗粒状而非均匀着色。一、特异性染色的判断1.特定的定位6免疫组化标准化照片CK10CD44v6ER免疫组化标准化照片CK10CD44v6ER7免疫组化结果判断及常见问题的分析课件8免疫组化结果判断及常见问题的分析课件9免疫组化结果判断及常见问题的分析课件10免疫组化结果判断及常见问题的分析课件11免疫组化结果判断及常见问题的分析课件12合格的免疫组化染色切片

是正确判断染色结果的基础和前提

不合格的免疫组化染色切片

容易导致误判合格的免疫组化染色切片

是正确判断染色结果的基础和前提

不13C-erbB-2优良中差C-erbB-2优良中差144321ER4321ER15子宫内膜PR染色，修复不足子宫内膜PR染色，修复良好

PR子宫内膜PR染色，修复不足子宫内膜PR16编号阳性片待检片阴性对照结论12345－＋－＋＋－＋＋－＋－＋－－－操作失误，抗体失效非特异性着色阳性片不含靶抗原待检片不含定位抗原待检片含定位抗原二、染色结果的判断编号阳性片待检片阴性对照结论1－－－操作失误，抗体失效二、17PCNAS-P×400S-P×4001-dayCM4-dayCM阳性强度20×10视野下，随机选取5个视野，测100个阳性细胞的平均光密度即为此片的阳性强度。三、结果分析PCNAS-P×400S-P×4001-dayCM4-18P53阳性细胞百分比计数100个瘤细胞，其中阳性细胞的比例：＜5%（－）5%~30%（＋）30%~50%（＋＋）＞50%（＋＋＋）P53阳性细胞百分比19PCNABarnes法A：瘤细胞显色有无及深浅0（不着色）1（浅黄色）2（棕黄色）3（棕褐色）B：显色细胞的比例1（1%~10%）2（11%~50%）3（51%~80%）4（＞80%）评分=A×B0分：阴性1~4分：弱阳性＞4分：强阳性PCNABarnes法20胶原染色阳性面积百分比40×10视野，选取5个视野，计算阳性区域面积占整个参考面积的百分率。胶原染色阳性面积百分比21CD34Weidner法（MVD计数）孤立的棕黄色细胞族代表一条微血管。低倍镜下找到组织内密度最高区域。40×10视野下计数微血管数目。CD34Weidner法（MVD计数）22K-rasVEGFK-rasVEGF23附：定量分析——图象处理系统

1、图象处理：利用仪器按照不同的目的进行图象的修正、变换、特征提取和测量。1）“狭义”指消除图象的模糊不清部分，校正畸变。2）“广义”包括对图象的结构分析，提取特征进行测量。

附：定量分析——图象处理系统242、图象处理系统组成图象输入（显微镜、扫描仪）图象处理运算（病理图文分析软件）图象、数据输出

2、图象处理系统组成25

3、图象处理系统功能

几何形态学定量分析细胞核、浆的大小、面积、核浆比；细胞分布密度、个数；血管、腺体的面积、密度；间质的面积

免疫组织化学分析按着色灰度分类，计算阳性、阴性细胞的面积含量DNA倍体分析计算正常细胞及肿瘤细胞DNA含量，给出倍体参数、DNA参数分布直方图

AgNOR分析颗粒分析：数目、大小、面积、比例

免疫组化结果判断及常见问题的分析课件26免疫组化结果判断及常见问题的分析课件27四、免疫组化异常着色及对策1.非特异性着色及其对策非特异性着色原因对策操作过程冲洗不充分每步冲洗3×5min内源性过氧化物酶3％H2O2封闭内源性生物素使用生物素阻断试剂盒阻断电荷吸附非免疫动物血清封闭抗体不纯采用单克隆抗体切片制片不当改善取材和制片加试剂后切片干燥防止切片干燥四、免疫组化异常着色及对策1.非特异性着色及其对策非特异性着28内源性生物素—肾小管内源性生物素—肾小管29内源性生物素—淋巴结转移性甲状腺腺癌内源性生物素—淋巴结转移性甲状腺腺癌30蜕膜组织部分胞核PR阳性，血管内红细胞过氧化物酶显色蜕膜组织部分胞核PR阳性，血管内红细胞过氧化物酶显色31嗜酸性粒细胞中细胞色素显色嗜酸性粒细胞中细胞色素显色32吞噬细胞内

含铁血黄素

吞噬细胞内含铁血黄素33坏死组织着色：AE1/AE3坏死组织着色：AE1/AE334坏死组织着色坏死组织着色35交叉反应：乳腺ki-67组织细胞胞浆着色交叉反应：乳腺ki-67组织细胞胞浆着色36黑色素瘤，细胞内含黑色素，呈紫黑色，HE染色黑色素瘤，细胞内含黑色素，呈紫黑色，HE染色37灶状着色：机械原因着色灶状着色：机械原因着色38CyclinD1套细胞淋巴瘤全片着色CyclinD1套细胞淋巴瘤全片着色39全片着色全片着色40边缘着色边缘着色41“阴阳脸”着色“阴阳脸”着色42气泡气泡43非特异性着色原因对策操作过程冲洗不充分每步冲洗3×5min内源性过氧化物酶3％H2O2封闭内源性生物素使用生物素阻断试剂盒阻断电荷吸附非免疫动物血清封闭抗体不纯采用单克隆抗体切片制片不当改善取材和制片加试剂后切片干燥防止切片干燥非特异性着色及其对策非特异性着色原因对策操作过程冲洗不充分每步冲洗3×5min内44无信号片CD30无信号片CD30452.染色的假阴性及其对策染色假阴性原因对策组织处理不当（固定、浸蜡）改善条件，重取材一抗与二抗种属连接错误确定抗体种属无误抗体失效不得使用过期的试剂盒显色系统不相适配更换适配的显色系统操作不当，遗漏重要步骤严格遵守操作规程2.染色的假阴性及其对策染色假阴性原因对策组织处理不当（固46无色或浅色片MCL理想的CD5着色。所有的瘤细胞都着色很强。散在的T细胞着色比瘤细胞深。MCL的CD5染色不足(一抗浓度太低)。MCL瘤细胞几乎都没有着色。无色或浅色片MCL理想的CD5着色。所有的瘤细胞都着色很强473.染色过弱原因及其对策染色过弱原因对策抗体浓度过低，孵育时间过短提高浓度，延长时间滴加试剂时缓冲液未沥干滴加试剂前沥干多余水分过度蛋白封闭缩短封闭时间抗原被破坏新鲜组织及时固定，固定时间不要超过24小时室温太低，<15℃适当延长孵育时间3.染色过弱原因及其对策染色过弱原因对策抗体浓度过低，孵育486、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺莎

7、自知之明是最难得的知识。——西班牙

8、勇气通往天堂，怯懦通往地狱。——塞内加

9、有时候读书是一种巧妙地避开思考的方法。——赫尔普斯

10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。——笛卡儿Thankyou拯畏怖汾关炉烹霉躲渠早膘岸缅兰辆坐蔬光膊列板哮瞥疹傻俘源拯割宜跟三叉神经痛-治疗三叉神经痛-治疗6、最大的骄傲于最大的自卑都表示心灵的最软弱无力。——斯宾诺49免疫组化结果判断及常见问题的分析56、死去何所道，托体同山阿。57、春秋多佳日，登高赋新诗。58、种豆南山下，草盛豆苗稀。晨兴理荒秽，带月荷锄归。道狭草木长，夕露沾我衣。衣沾不足惜，但使愿无违。59、相见无杂言，但道桑麻长。60、迢迢新秋夕，亭亭月将圆。免疫组化结果判断及常见问题的分析免疫组化结果判断及常见问题的分析56、死去何所道，托体同山阿。57、春秋多佳日，登高赋新诗。58、种豆南山下，草盛豆苗稀。晨兴理荒秽，带月荷锄归。道狭草木长，夕露沾我衣。衣沾不足惜，但使愿无违。59、相见无杂言，但道桑麻长。60、迢迢新秋夕，亭亭月将圆。免疫组化结果判断

及常见问题分析武汉大学病理学教研室杨飞免疫组化结果判断及常见问题的分析56、死去何所道，托体同山阿50免疫组化结果判断及常见问题的分析课件51免疫组化结果判断及常见问题的分析课件52免疫组化结果判断及常见问题的分析课件53免疫组化结果判断及常见问题的分析课件54一、特异性染色的判断1.特定的定位

细胞阳性——根据靶抗原不同而呈现胞膜型、胞浆型或胞核型间质阳性——表现为细胞外着色，局限性或弥散性2.染色的不均一性阳性细胞的染色分布不均，片状或点状散在分布染色强弱不等，颜色深浅反映抗原量的多少3.排除人为造成的非特异性染色

切片的折叠、刀痕，色素沉着，组织细胞坏死。4.颗粒性显色

DAB显色在高倍镜下呈颗粒状而非均匀着色。一、特异性染色的判断1.特定的定位55免疫组化标准化照片CK10CD44v6ER免疫组化标准化照片CK10CD44v6ER56免疫组化结果判断及常见问题的分析课件57免疫组化结果判断及常见问题的分析课件58免疫组化结果判断及常见问题的分析课件59免疫组化结果判断及常见问题的分析课件60免疫组化结果判断及常见问题的分析课件61合格的免疫组化染色切片

是正确判断染色结果的基础和前提

不合格的免疫组化染色切片

容易导致误判合格的免疫组化染色切片

是正确判断染色结果的基础和前提

不62C-erbB-2优良中差C-erbB-2优良中差634321ER4321ER64子宫内膜PR染色，修复不足子宫内膜PR染色，修复良好

PR子宫内膜PR染色，修复不足子宫内膜PR65编号阳性片待检片阴性对照结论12345－＋－＋＋－＋＋－＋－＋－－－操作失误，抗体失效非特异性着色阳性片不含靶抗原待检片不含定位抗原待检片含定位抗原二、染色结果的判断编号阳性片待检片阴性对照结论1－－－操作失误，抗体失效二、66PCNAS-P×400S-P×4001-dayCM4-dayCM阳性强度20×10视野下，随机选取5个视野，测100个阳性细胞的平均光密度即为此片的阳性强度。三、结果分析PCNAS-P×400S-P×4001-dayCM4-67P53阳性细胞百分比计数100个瘤细胞，其中阳性细胞的比例：＜5%（－）5%~30%（＋）30%~50%（＋＋）＞50%（＋＋＋）P53阳性细胞百分比68PCNABarnes法A：瘤细胞显色有无及深浅0（不着色）1（浅黄色）2（棕黄色）3（棕褐色）B：显色细胞的比例1（1%~10%）2（11%~50%）3（51%~80%）4（＞80%）评分=A×B0分：阴性1~4分：弱阳性＞4分：强阳性PCNABarnes法69胶原染色阳性面积百分比40×10视野，选取5个视野，计算阳性区域面积占整个参考面积的百分率。胶原染色阳性面积百分比70CD34Weidner法（MVD计数）孤立的棕黄色细胞族代表一条微血管。低倍镜下找到组织内密度最高区域。40×10视野下计数微血管数目。CD34Weidner法（MVD计数）71K-rasVEGFK-rasVEGF72附：定量分析——图象处理系统

1、图象处理：利用仪器按照不同的目的进行图象的修正、变换、特征提取和测量。1）“狭义”指消除图象的模糊不清部分，校正畸变。2）“广义”包括对图象的结构分析，提取特征进行测量。

附：定量分析——图象处理系统732、图象处理系统组成图象输入（显微镜、扫描仪）图象处理运算（病理图文分析软件）图象、数据输出

2、图象处理系统组成74

3、图象处理系统功能

几何形态学定量分析细胞核、浆的大小、面积、核浆比；细胞分布密度、个数；血管、腺体的面积、密度；间质的面积

免疫组织化学分析按着色灰度分类，计算阳性、阴性细胞的面积含量DNA倍体分析计算正常细胞及肿瘤细胞DNA含量，给出倍体参数、DNA参数分布直方图

AgNOR分析颗粒分析：数目、大小、面积、比例

免疫组化结果判断及常见问题的分析课件75免疫组化结果判断及常见问题的分析课件76四、免疫组化异常着色及对策1.非特异性着色及其对策非特异性着色原因对策操作过程冲洗不充分每步冲洗3×5min内源性过氧化物酶3％H2O2封闭内源性生物素使用生物素阻断试剂盒阻断电荷吸附非免疫动物血清封闭抗体不纯采用单克隆抗体切片制片不当改善取材和制片加试剂后切片干燥防止切片干燥四、免疫组化异常着色及对策1.非特异性着色及其对策非特异性着77内源性生物素—肾小管内源性生物素—肾小管78内源性生物素—淋巴结转移性甲状腺腺癌内源性生物素—淋巴结转移性甲状腺腺癌79蜕膜组织部分胞核PR阳性，血管内红细胞过氧化物酶显色蜕膜组织部分胞核PR阳性，血管内红细胞过氧化物酶显色80嗜酸性粒细胞中细胞色素显色嗜酸性粒细胞中细胞色素显色81吞噬细胞内

含铁血黄素

吞噬细胞内含铁血黄素82坏死组织着色：AE1/AE3坏死组织着色：AE1/AE383坏死组织着色坏死组织着色84交叉反应：乳腺ki-67组织细胞胞浆着色交叉反应：乳腺ki-67组织细胞胞浆着色85黑色素瘤，细胞内含黑色素，呈紫黑色，HE染色黑色素瘤，细胞内含黑色素，呈紫黑色，HE染色86灶状着色：机械原因着色灶状着色：机械原因着色87CyclinD1套细胞淋巴瘤全片着色CyclinD1套细胞淋巴瘤全片着色88全片着色全片着色89边缘着色边缘着色90“阴阳脸”着色“阴阳脸”着色91气泡气泡92非特异性着色原因对策操作过程冲洗不充分每步冲洗3×5min内源性过氧化物酶3％H2O2封闭内源性生物素使用生物素阻断试剂盒阻断电荷吸附非免疫动物血清封闭抗体不纯采用单克隆抗体切片制片不