肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会讲课课件

肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会1（优选）肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会（优选）肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会22.石蜡切片每张玻片上应放置超过6个连续组织切片，有助于肝纤维化的病理诊断。2.石蜡切片33.染色除常规ＨＥ染色供病理诊断用之外，根据条件和需要作以下特殊染色

①网状纤维染色，

②Masson三色染色，

③胶原纤维染色(Siriusred或免疫组化)

3.染色除常规ＨＥ染色供病理诊断用之外，根据条件4④Dm-HSC⑤α-SMA-MFbDmα-SMA④Dm-HSCDmα-SMA5S1S2S3S4各种病因引起肝纤维的病理学特点及分期1.慢性肝炎肝纤维化(Dr.Scheuer方案）S1S2S3S4各种病因引起肝纤维的病理学特点及分期6活动性纤维间隔静止性纤维间隔活动性纤维间隔静止性纤维间隔7脂肪性肝病肝纤维化穿刺肝组织呈淡黄色，标本悬浮于固定液小叶中央区纤维化窦周纤维化脂肪性肝病肝纤维化小叶中央区纤维化83.肝糖原累积病肝纤维3.肝糖原累积病肝纤维94.Wilson病红氨酸(Rubeanicacid)染色,铜被染成深绿色4.Wilson病红氨酸(Rubeanicacid)105.血色病

穿刺肝组织因含有大量含铁血黄素沉着呈火焰红色肝细胞普鲁氏蓝染色阳性5.血色病肝细胞普鲁氏蓝染色阳性116.自身免疫性肝炎肝纤维化（AIH）

门管区肝细胞呈花环状排列HepaticRosette，表现为数个水样变性的肝细胞被炎症细胞和塌陷的网状支架包绕成花环状结构。6.自身免疫性肝炎肝纤维化（AIH）127.原发性胆汁性肝硬化（PBC）

3期（间隔期）90%出现自身抗体(A-Mit)，Floridductlesion+BiliaryPN，

纤维间隔形成，肝细胞羽毛状变性4期（肝硬化）静止-纤维间隔内无炎症或轻度炎症活动–FibrousPN.7.原发性胆汁性肝硬化（PBC）138.血吸虫性肝纤维化8.血吸虫性肝纤维化14肝癌(LIVERCANCER)HCCICCCombinedhepatocellularandcholangiocarcinoma肝癌(LIVERCANCER)HCC15ELPS(二步法)转移性腺癌74100%+HCC:011%+胆管型CK:CK19,CK7HCC阳性率1582%EnVision(EnhancedLabelledPolymerSystem,活动性纤维间隔静止性纤维间隔液氮法:将OCT包埋的组织块投入液氮数秒,等组织块冻结后,立即移入低温冰箱(装入封口塑料袋内密封)或放入恒冷切片机恒冷箱内以备切片;速冻:目的是使温度很快下降迅速通过冰点,防止冰结晶产生。免疫组织化学染色的几点体会⑤α-SMA-MFb20世纪80年代（1981）许世民ABC（亲和免疫组化）(2)最大限度地保存抗原性。★防止冰结晶!!!RB200(四乙基罗达明B200)用570nm光激发,596～600nm滤片观察,呈橘红色ICC:10%+肝癌(LIVERCANCER)选择最合适的固定剂,如用福尔马林,必须用缓冲福尔马林4期（肝硬化）静止-纤维间隔内无炎症或轻度炎症纤维间隔形成，肝细胞羽毛状变性肝癌病理诊断常用免疫组化和特染HepPar1线粒体相关抗原，与AFP无关对胎儿和成人肝细胞高度特异(HCC:阳性率8297%）

ELPS(二步法)肝癌病理诊断常用免疫组化和特染HepPa16AFPHCC阳性率1582%AFP17CD34:HCC型染色长条分枝，管壁纤细，管腔狭窄，分布均匀弥漫.而非癌肝组织内极少见.CD34:18CK18:HCC,ICC,Metastaticcarcinoma:100%+

上皮性肿瘤标志物CK18:19CK19:胆管型CK:CK19,CK7肝细胞－胆管上皮，ICC77100%ICC最好的标志物CK19:20CEAmonoclonalCEA:毛细胆管－ICC，转移性肝癌6075%+HCC:011%+polyclonalCEA:毛细胆管＋HCC特异标志物之一

CEA21CK20:胃肠道腺癌的主要标志物转移性腺癌74100%+ICC:10%+HCC:0%+CK20:22MOC31:抗人上皮相关抗原转移性腺癌100%+ICC:92.9%+HCC:0%+胃癌肝转移MOC31:抗人上皮相关抗原23HBsAg:HCC:7080%+胞质型，胞核型阳性胞质型，核周型阳性HBsAg:胞质型，胞核型阳性胞质型，核周型阳性24黏液染色AB/PAS酸性黏多糖兰色（胆管腺瘤,ICC腔内黏液）中性黏多糖,糖原红色（假腺管型HCC)

黏液染色AB/PAS25免疫组织化学染色的几点体会一、组织和细胞标本制备目的(1)最大限度地保存组织结构。(2)最大限度地保存抗原性。注意事项在选择组织处理方法前，先根据实验目的，参考抗体说明，确定组织处理方式(冰冻?石蜡?)。免疫组织化学染色的几点体会一、组织和细胞标本制备261.取材（1）原则尽可能新鲜，动物标本可选用动脉灌注固定。（2）取材部位尽量包括病灶和正常组织交界处，避免选择坏死组织。（3）避免挤压受挤压组织不但影响HE切片的观察，还造成非特异性免疫组化组织着色。1.取材（1）原则尽可能新鲜，动物标本可选272.固定根据不同的染色目的，选择不同的固定液，固定时组织越新鲜越好。组织块厚薄大小要合适。容器要大,固定液要宽余.固定时间既要考虑充分固定,又不能太长(依组织块厚薄大小从24hr至3～5天,太长可溶性抗原会渗漏,阳性会减弱甚至转阴.选择最合适的固定剂,如用福尔马林,必须用缓冲福尔马林2.固定根据不同的染色目的，选择不同的固定液，固定时组织越新28用于培养细胞效果较好,石蜡切片因常有自发荧光,背景荧光较强,用时要注意EnVision(EnhancedLabelledPolymerSystem,4期（肝硬化）静止-纤维间隔内无炎症或轻度炎症转移性腺癌74100%+而非癌肝组织内极少见.直接免疫荧光法:干冰丙酮法:将200ml丙酮注入小型广口保温瓶或保温杯内,逐渐加入干冰至饱和不再冒泡为止,温度可达70℃;将装有50ml异戊烷的小烧杯缓慢置入干冰丙酮饱和液中;然后将OCT包埋的组织块投入异戊烷内速冻半分至一分钟。自身免疫性肝炎肝纤维化（AIH）根据不同的染色目的，选择不同的固定液，固定时组织越新鲜越好。（1）原则尽可能新鲜，动物标本可选注意事项在选择组织处理方法前，先根据实验目的，参考抗体说明，确定组织处理方式(冰冻?石蜡?)。EnVision(EnhancedLabelledPolymerSystem,ICC:10%+常用苏木精或甲基绿衬染细胞核。HCC阳性率1582%ICC:10%+免疫荧光染色后应尽快观察、拍照。绝大多数免疫酶染色后都可用树胶封固，但如用DAB以外的底物应注意有色沉淀物如为脂溶性，应改用水溶性封固物如明胶、甘油缓冲液等。③胶原纤维染色(Siriusred或免疫组化)穿刺肝组织呈淡黄色，标本悬浮于固定液3.制备蜡块冲水、脱水、透明、包埋。尽可能采用低温石蜡包埋,如无低温石蜡,可将组织块尽可能修薄,以缩短脱水、透明、包埋时间,尽可能保存组织内抗原稳定。用于培养细胞效果较好,石蜡切片因常有自发荧光,背景荧光较强294.制备冰冻切片冷冻包埋能较好保存抗原,新鲜及已固定材料均适合于冷冻包埋、切片。★防止冰结晶!!!预处理:目的是减少组织中的水分以减少冰结晶的产生,方法是将已固定、冲洗的组织块放入20～30%蔗糖缓冲液内,4℃冰箱过夜,再将组织块埋于OCT包埋剂速冻:目的是使温度很快下降迅速通过冰点,防止冰结晶产生。4.制备冰冻切片冷冻包埋能较好保存抗原,新鲜及已固定材料均适30速冻方法液氮法:将OCT包埋的组织块投入液氮数秒,等组织块冻结后,立即移入低温冰箱(装入封口塑料袋内密封)或放入恒冷切片机恒冷箱内以备切片;干冰丙酮法:将200ml丙酮注入小型广口保温瓶或保温杯内,逐渐加入干冰至饱和不再冒泡为止,温度可达70℃;将装有50ml异戊烷的小烧杯缓慢置入干冰丙酮饱和液中;然后将OCT包埋的组织块投入异戊烷内速冻半分至一分钟。速冻方法液氮法:将OCT包埋的组织块投入液氮数秒,等组织块冻31免疫组化染色后的衬染常用苏木精或甲基绿衬染细胞核。但如果阳性信号在细胞核,切勿衬染细胞核!!!细胞质衬染:1%亮绿,但退色较快,可改用坚固绿(FASTBLUE)染,则保存时间较长免疫组化染色后的衬染常用苏木精或甲基绿衬染细胞核。但如果阳性32封固和保存绝大多数免疫酶染色后都可用树胶封固，但如用DAB以外的底物应注意有色沉淀物如为脂溶性，应改用水溶性封固物如明胶、甘油缓冲液等。酶免疫染色切片可保存数周甚至数月。免疫荧光染色后应尽快观察、拍照。封固和保存绝大多数免疫酶染色后都可用树胶封固，但如用DAB以33一.常用免疫组织化学方法免疫荧光:

用于培养细胞效果较好,石蜡切片因常有自发荧光,背景荧光较强,用时要注意

FITC(异硫氰酸荧光素)用450～490nm光激发,515nm滤片观察,呈翠绿色

RB200(四乙基罗达明B200)用570nm光激发,596～600nm滤片观察,呈橘红色

TRITC(四甲基异硫氰酸罗达明)用530～560nm光激发,580nm滤片观察,呈红色

Texasred

用595nm光激发,615nm滤片观察,呈红色直接免疫荧光法:

间接免疫荧光法双重荧光染色一.常用免疫组织化学方法342.免疫组织化学常用方法:PAPABC或LSABELPS(二步法)2.免疫组织化学常用方法:3520世纪70年（1970）SternbergPeroxidase-anti-Peroxidase(PAP)肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会讲课课件3620世纪80年代（1981）许世民ABC（亲和免疫组化）

Avidin-Biotin-PeroxidaseComplex20世纪80年代（1981）许世民ABC（亲和免疫组37（3）避免挤压受挤压组织不但影响4期（肝硬化）静止-纤维间隔内无炎症或轻度炎症肝细胞普鲁氏蓝染色阳性肝细胞普鲁氏蓝染色阳性一、组织和细胞标本制备TRITC(四甲基异硫氰酸罗达明)用530～560nm光激发,580nm滤片观察,呈红色固定时间既要考虑充分固定,又不能太长(依组织块厚薄大小从24hr至3～5天,太长可溶性抗原会渗漏,阳性会减弱甚至转阴.③胶原纤维染色(Siriusred或免疫组化)织交界处，避免选择坏死组织。TRITC(四甲基异硫氰酸罗达明)用530～560nm光激发,580nm滤片观察,呈红色干冰丙酮法:将200ml丙酮注入小型广口保温瓶或保温杯内,逐渐加入干冰至饱和不再冒泡为止,温度可达70℃;将装有50ml异戊烷的小烧杯缓慢置入干冰丙酮饱和液中;然后将OCT包埋的组织块投入异戊烷内速冻半分至一分钟。干冰丙酮法:将200ml丙酮注入小型广口保温瓶或保温杯内,逐渐加入干冰至饱和不再冒泡为止,温度可达70℃;将装有50ml异戊烷的小烧杯缓慢置入干冰丙酮饱和液中;然后将OCT包埋的组织块投入异戊烷内速冻半分至一分钟。活动性纤维间隔静止性纤维间隔干冰丙酮法:将200ml丙酮注入小型广口保温瓶或保温杯内,逐渐加入干冰至饱和不再冒泡为止,温度可达70℃;将装有50ml异戊烷的小烧杯缓慢置入干冰丙酮饱和液中;然后将OCT包埋的组织块投入异戊烷内速冻半分至一分钟。(1)最大限度地保存组织结构。ICC最好的标志物对胎儿和成人肝细胞高度特异90年代中期：EnhancedPolymerOneStep(EPOS)EnVision(EnhancedLabelledPolymerSystem,ELPS)简称二步法

1mol含70molHRP+10molAB（3）避免挤压受挤压组织不但影响90年代中期：Enhance38肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会39（优选）肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会（优选）肝病的病理形态特点及免疫组化染色体会402.石蜡切片每张玻片上应放置超过6个连续组织切片，有助于肝纤维化的病理诊断。2.石蜡切片413.染色除常规ＨＥ染色供病理诊断用之外，根据条件和需要作以下特殊染色

①网状纤维染色，

②Masson三色染色，

③胶原纤维染色(Siriusred或免疫组化)

3.染色除常规ＨＥ染色供病理诊断用之外，根据条件42④Dm-HSC⑤α-SMA-MFbDmα-SMA④Dm-HSCDmα-SMA43S1S2S3S4各种病因引起肝纤维的病理学特点及分期1.慢性肝炎肝纤维化(Dr.Scheuer方案）S1S2S3S4各种病因引起肝纤维的病理学特点及分期44活动性纤维间隔静止性纤维间隔活动性纤维间隔静止性纤维间隔45脂肪性肝病肝纤维化穿刺肝组织呈淡黄色，标本悬浮于固定液小叶中央区纤维化窦周纤维化脂肪性肝病肝纤维化小叶中央区纤维化463.肝糖原累积病肝纤维3.肝糖原累积病肝纤维474.Wilson病红氨酸(Rubeanicacid)染色,铜被染成深绿色4.Wilson病红氨酸(Rubeanicacid)485.血色病

穿刺肝组织因含有大量含铁血黄素沉着呈火焰红色肝细胞普鲁氏蓝染色阳性5.血色病肝细胞普鲁氏蓝染色阳性496.自身免疫性肝炎肝纤维化（AIH）

门管区肝细胞呈花环状排列HepaticRosette，表现为数个水样变性的肝细胞被炎症细胞和塌陷的网状支架包绕成花环状结构。6.自身免疫性肝炎肝纤维化（AIH）507.原发性胆汁性肝硬化（PBC）

3期（间隔期）90%出现自身抗体(A-Mit)，Floridductlesion+BiliaryPN，

纤维间隔形成，肝细胞羽毛状变性4期（肝硬化）静止-纤维间隔内无炎症或轻度炎症活动–FibrousPN.7.原发性胆汁性肝硬化（PBC）518.血吸虫性肝纤维化8.血吸虫性肝纤维化52肝癌(LIVERCANCER)HCCICCCombinedhepatocellularandcholangiocarcinoma肝癌(LIVERCANCER)HCC53ELPS(二步法)转移性腺癌74100%+HCC:011%+胆管型CK:CK19,CK7HCC阳性率1582%EnVision(EnhancedLabelledPolymerSystem,活动性纤维间隔静止性纤维间隔液氮法:将OCT包埋的组织块投入液氮数秒,等组织块冻结后,立即移入低温冰箱(装入封口塑料袋内密封)或放入恒冷切片机恒冷箱内以备切片;速冻:目的是使温度很快下降迅速通过冰点,防止冰结晶产生。免疫组织化学染色的几点体会⑤α-SMA-MFb20世纪80年代（1981）许世民ABC（亲和免疫组化）(2)最大限度地保存抗原性。★防止冰结晶!!!RB200(四乙基罗达明B200)用570nm光激发,596～600nm滤片观察,呈橘红色ICC:10%+肝癌(LIVERCANCER)选择最合适的固定剂,如用福尔马林,必须用缓冲福尔马林4期（肝硬化）静止-纤维间隔内无炎症或轻度炎症纤维间隔形成，肝细胞羽毛状变性肝癌病理诊断常用免疫组化和特染HepPar1线粒体相关抗原，与AFP无关对胎儿和成人肝细胞高度特异(HCC:阳性率8297%）

ELPS(二步法)肝癌病理诊断常用免疫组化和特染HepPa54AFPHCC阳性率1582%AFP55CD34:HCC型染色长条分枝，管壁纤细，管腔狭窄，分布均匀弥漫.而非癌肝组织内极少见.CD34:56CK18:HCC,ICC,Metastaticcarcinoma:100%+

上皮性肿瘤标志物CK18:57CK19:胆管型CK:CK19,CK7肝细胞－胆管上皮，ICC77100%ICC最好的标志物CK19:58CEAmonoclonalCEA:毛细胆管－ICC，转移性肝癌6075%+HCC:011%+polyclonalCEA:毛细胆管＋HCC特异标志物之一

CEA59CK20:胃肠道腺癌的主要标志物转移性腺癌74100%+ICC:10%+HCC:0%+CK20:60MOC31:抗人上皮相关抗原转移性腺癌100%+ICC:92.9%+HCC:0%+胃癌肝转移MOC31:抗人上皮相关抗原61HBsAg:HCC:7080%+胞质型，胞核型阳性胞质型，核周型阳性HBsAg:胞质型，胞核型阳性胞质型，核周型阳性62黏液染色AB/PAS酸性黏多糖兰色（胆管腺瘤,ICC腔内黏液）中性黏多糖,糖原红色（假腺管型HCC)

黏液染色AB/PAS63免疫组织化学染色的几点体会一、组织和细胞标本制备目的(1)最大限度地保存组织结构。(2)最大限度地保存抗原性。注意事项在选择组织处理方法前，先根据实验目的，参考抗体说明，确定组织处理方式(冰冻?石蜡?)。免疫组织化学染色的几点体会一、组织和细胞标本制备641.取材（1）原则尽可能新鲜，动物标本可选用动脉灌注固定。（2）取材部位尽量包括病灶和正常组织交界处，避免选择坏死组织。（3）避免挤压受挤压组织不但影响HE切片的观察，还造成非特异性免疫组化组织着色。1.取材（1）原则尽可能新鲜，动物标本可选652.固定根据不同的染色目的，选择不同的固定液，固定时组织越新鲜越好。组织块厚薄大小要合适。容器要大,固定液要宽余.固定时间既要考虑充分固定,又不能太长(依组织块厚薄大小从24hr至3～5天,太长可溶性抗原会渗漏,阳性会减弱甚至转阴.选择最合适的固定剂,如用福尔马林,必须用缓冲福尔马林2.固定根据不同的染色目的，选择不同的固定液，固定时组织越新66用于培养细胞效果较好,石蜡切片因常有自发荧光,背景荧光较强,用时要注意EnVision(EnhancedLabelledPolymerSystem,4期（肝硬化）静止-纤维间隔内无炎症或轻度炎症转移性腺癌74100%+而非癌肝组织内极少见.直接免疫荧光法:干冰丙酮法:将200ml丙酮注入小型广口保温瓶或保温杯内,逐渐加入干冰至饱和不再冒泡为止,温度可达70℃;将装有50ml异戊烷的小烧杯缓慢置入干冰丙酮饱和液中;然后将OCT包埋的组织块投入异戊烷内速冻半分至一分钟。自身免疫性肝炎肝纤维化（AIH）根据不同的染色目的，选择不同的固定液，固定时组织越新鲜越好。（1）原则尽可能新鲜，动物标本可选注意事项在选择组织处理方法前，先根据实验目的，参考抗体说明，确定组织处理方式(冰冻?石蜡?)。EnVision(EnhancedLabelledPolymerSystem,ICC:10%+常用苏木精或甲基绿衬染细胞核。HCC阳性率1582%ICC:10%+免疫荧光染色后应尽快观察、拍照。绝大多数免疫酶染色后都可用树胶封固，但如用DAB以外的底物应注意有色沉淀物如为脂溶性，应改用水溶性封固物如明胶、甘油缓冲液等。③胶原纤维染色(Siriusred或免疫组化)穿刺肝组织呈淡黄色，标本悬浮于固定液3.制备蜡块冲水、脱水、透明、包埋。尽可能采用低温石蜡包埋,如无低温石蜡,可将组织块尽可能修薄,以缩短脱水、透明、包埋时间,尽可能保存组织内抗原稳定。用于培养细胞效果较好,石蜡切片因常有自发荧光,背景荧光较强674.制备冰冻切片冷冻包埋能较好保存抗原,新鲜及已固定材料均适合于冷冻包埋、切片。★防止冰结晶!!!预处理:目的是减少组织中的水分以减少冰结晶的产生,方法是将已固定、冲洗的组织块放入20～30%蔗糖缓冲液内,4℃冰箱过夜,再将组织块埋于OCT包埋剂速冻:目的是使温度很快下降迅速通过冰点,防止冰结晶产生。4.制备冰冻切片冷冻包埋能较好保存抗原,新鲜及已固定材料均适68速冻方法液氮法:将OCT包埋的组织块投入液氮数秒,等组织块冻结后,立即移入低温冰箱(装入封口塑料袋内密封)或放入恒冷切片机恒冷箱内以备切片;干冰丙酮法:将200ml丙酮注入小型广口保温瓶或保温杯内,逐渐加入干冰至饱和不再冒泡为止,温度可达70℃;将装有50ml异戊烷的小烧杯缓慢置入干冰丙酮饱和液中;然后将OCT包埋的组织块投入异戊烷内速冻半分至一分钟。速冻方法液氮法:将OCT包埋的组织块投入液氮数秒,等组织块冻69免疫组化染色后的衬染常用苏木精或甲基绿衬染细胞核。但如果阳性信号在细胞核,切勿衬染细胞核!!!细胞质衬染:1%亮绿,但退色较快,可改用坚固绿(FASTBLUE)染,则保存时间较长免疫组化染色后的衬染常用苏木精或甲基绿衬染细胞核。但如果阳性70封固和保存绝大多数免疫酶染色后都可用树胶封固，但如用DAB以外的底物应注意有色沉淀物如为脂溶性，应改用水溶性封固物如明胶、甘油缓冲液等。酶免疫染色切片可保存数周甚至数月。免疫荧光染色后应尽快观察、拍照。封固和保存绝大多数免疫酶染色后都可用树胶封固，但如用DAB以71一.常用免疫组织化学方法免疫荧光:

用于培养细胞效果较好,石蜡切片因常有自发荧光,背景荧光较强,用时要注意

FITC(异硫氰酸荧光素)用450～490nm光激发,515nm滤片观察,呈翠绿色

RB200(四乙基罗达明B200)用570nm光激发,596～600nm滤片观察,呈橘红色

TRITC(四甲基异硫氰酸罗达明)用530～560nm光激发,580nm滤片观察,呈红色

Texasred

用595nm光激发,615nm滤片观察,呈红色直接免疫荧光法:

间接免疫荧光法双重荧光染色一.常用免疫组织化学方法722.免疫组织化学常用方法:PAPABC或LSAB