FISH检测标本要求课件

FISH技术在肿瘤病理诊断及肿瘤分子靶点治疗中的应用中山大学肿瘤防治中心分子病理诊断实验室王芳邵建永FISH技术在肿瘤病理诊断及肿瘤分子靶点治疗中的应用中山大学1细胞遗传学技术原理：通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交观察：荧光显微镜原位观察（细胞、组织）细胞核彩色探针信号目的：获得细胞内多条染色体(或染色体片段)或多种基因状态的信息。

Fluorescenceinsituhybridization（FISH）细胞遗传学技术Fluorescenceinsituh2用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位荧光标记探针探针变性样本DNA变性杂交原理用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中3FISH技术的特点操作简便，探针标记后稳定，可与多种技术结合，可成功地帮助细胞遗传学家做出回顾性分析方法敏感，能迅速得到结果，24小时就可以完成检测标本来源丰富，间期细胞，分裂中期细胞、分化或未分化细胞及死亡或存活的细胞皆可以被检测FISH技术的特点操作简便，探针标记后稳定，可与多种技术结合4centromeretelomeresubtelomerelocusspecificwholechromosomepaintCSP探针：染色体着丝粒探针GLP探针：位点特异性探针WPP探针：全染色体或染色体区域特异性探针FISH探针的种类centromeretelomeresubtelomer5操作流程简图制片预处理FISH结果分析破坏细胞膜利于探针杂交。蛋白酶消化、HCl处理变性杂交洗涤复染操作流程简图制片预处理FISH结果分析破坏细胞膜利6FISH技术在乳腺癌检测中的应用FISH技术在乳腺癌检测中的应用7乳腺癌

Her-2基因致癌基因：Her-2基因；位点：17q11.2-q12；编码蛋白：跨膜蛋白（与表皮生长因子受体部分同源）；25-30%乳腺癌病人都有HER-2的扩增；HER-2基因扩增是决定Herceptin治疗是否有效的关键性指标。乳腺癌Her-2基因致癌基因：Her-2基因；8Her-2基因的检测方法检测方法检测指标优点缺点IHCHer-2蛋白费用低光镜即可观察结果准确性差，主观性强，假阳性率高CISHHer-2DNA光镜即可观察结果对低度扩增及染色体非整倍扩增检测灵敏度下降FISHHer-2DNA对于低倍、高倍染色体非整倍性扩增检测准确性高，灵敏度特异性好，结果判断客观相对费用较高Her-2基因的检测方法检测方法检测指标优点缺点IHCHer9疾病名称检测探针标记颜色探针定位探针名称乳腺癌GLPHer2/CSP17

红/绿Her2：17q11.2-q12CSP17:17p11.1q11.1

CSP17:17号染色体着丝粒正常:2红/2绿异常:红信号大于2为异常细胞(绿色信号不少于2个的细胞)Her-2基因FISH

探针组疾病检测探针标记颜色探针定位探针名称乳腺癌GLPHer210DAPI染色后与HE切片对比图观察浸润部分导管内癌DAPI染色后与HE切片对比图观察浸润部分导管内癌11结果判断统计Ratio值（计数浸润性部分的20个细胞）

Ratio值＝20个细胞核中红信号总数/绿信号总数

Ratio＜1.8为阴性结果

Ratio＞2.2或众多信号连接成簇时可不计算为阳性结果

比值2～4为低度扩增4～10为中度扩增>10为高度扩增Ratio在1.8-2.2之间时，则需要再计数20个细胞核中的信号。如仍为临界值，则应在FISH检测报告中注明。结果判断统计Ratio值（计数浸润性部分的20个细胞）12A.无须计数的大簇团信号（高度扩增）B.颗粒状信号（R>10，高度扩增）C.须计数的颗粒状信号（R=3.5，低度扩增）ACBHer-2基因扩增状况A.无须计数的大簇团信号（高度扩增）B.颗粒状信号（R13Her-2基因无扩增情况红信号数>2，同时绿信号非整倍体R<1.8，无扩增红信号与绿信号均为两点，R=1Her-2基因无扩增情况红信号数>2，同时绿信号非整倍体R<14荧光原位杂交与免疫组化检测Her-2结果比较荧光原位杂交与免疫组化检测Her-2结果比较15我实验室已完成病例小结IHC01+2+3+FISH无扩增

1334020扩增

22102943总数(n=15)(n=5)(n=14)(n=29)（n=63）Her2表达IHC（2+）标本中，基因扩增率为71.41%Her2表达IHC（3+）标本中，基因扩增率为100%（文献报道：90-95%）我实验室已完成病例小结IHC01+16>30%的肿瘤细胞全部的细胞膜高强度着色免疫组化（3+）与FISH对比图×40×100住院号：177319浸润性导管癌Ⅱ级IHC：+++FISH：呈簇团状高度扩增×100>30%的肿瘤细胞全部免疫组化（3+）与FISH对比图×417免疫组化（2+）与FISH对比图1.>30%的肿瘤细胞全部的细胞膜弱至中等着色×40住院号：175465浸润性导管癌Ⅱ级IHC：++FISH：Ratio>5，中度扩增×100免疫组化（2+）与FISH对比图1.>30%的肿瘤细胞全部18免疫组化（2+）与FISH对比图2.>30%的肿瘤细胞全部的细胞膜弱至中等着色×40×100住院号：176921浸润性导管癌Ⅱ级IHC：++FISH：Ratio＝1.45，无扩增免疫组化（2+）与FISH对比图2.>30%的肿瘤细胞全部19>30%的肿瘤细胞弱的着色免疫组化（1+）与FISH对比图1×40×100住院号：175689浸润性导管癌Ⅱ级IHC：+FISH：Ratio＝1.62，无扩增>30%的肿瘤细胞弱的着色免疫组化（1+）与FISH对比图120免疫组化（1+）与FISH对比图2×40×100住院号：175895浸润性导管癌Ⅲ级IHC：+FISH：簇状扩增>30%的肿瘤细胞弱的着色免疫组化（1+）与FISH对比图2×40×100住院号：1721免疫组化（－）与FISH对比图1×100×40住院号：176846浸润性导管癌Ⅱ级IHC：－FISH：Ratio＝1.02，Her2基因无扩增<30%的肿瘤细胞弱的着色或不着色免疫组化（－）与FISH对比图1×100×40住院号：17622免疫组化（－）与FISH对比图2住院号：175472浸润性导管癌Ⅱ级IHC：－FISH：呈簇状扩增肿瘤细胞不着色×40×100免疫组化（－）与FISH对比图2住院号：175472肿瘤细胞23评价17号染色体的意义

17号染色体非整倍性：每个细胞中17号染色体多于或少于2个；乳腺癌遗传学特征之一，可能预示预后不良；

17号染色体多体性是导致IHC3+但FISH检测为阴性的主要原因；我实验室完成病例中17号染色体非整倍性发生率为33.3%。评价Her-2基因状态的同时应考虑

17号染色体数目的变化评价17号染色体的意义

评价Her-2基因状态的同时应考虑24IHC与FISH结果不一致原因分析IHC判断标准的主观性

内对照探针——17号染色体着丝粒探针的建立，排除IHC假阴性

IHC2+及3+的基因检测结果分离，无法控制由于17号染色体多体性造成假性扩增

IHC自身无法克服的缺陷基因扩增是Herceptin使用的关键性指标IHC与FISH结果不一致原因分析IHC判断标准的主观性基25Her2基因检测流程石蜡组织标本IHC检测再用FISH方法检测—1+3+2+—+Herceptin治疗+再用FISH方法检测Herceptin治疗FISH检测+—再用FISH方法检测+Her2基因检测流程石蜡组织标本IHC检测再用FISH—1+26乳腺癌HER2FISH检测报告模板乳腺癌HER2FISH检测报告模板27FISH技术检测染色体易位在淋巴瘤分型中的应用FISH技术检测染色体易位在淋巴瘤分型中的应用28淋巴瘤的诊断与分型难HE＋IHC+cytogenesis=

解决!淋巴瘤的诊断与分型难HE＋IHC+cytogenesis29

不同类型的淋巴瘤有各自不同的染色体易位使控制细胞发育分化过程中的关键蛋白失活与淋巴瘤的发生密切相关不同类型的淋巴瘤有各自不同的染色体易位使控制细胞发育分化过30IGH/BCL2t(14;18)(q32;q21)染色体易位IGH/MYCt(8;14)(q24;q32)染色体易位IGH/CCND1t(11;14)(q13;

q32)

染色体易位API2/MALT1t(11;18)(q21;q21)染色体易位IGH/MALT1t(14;18)(q32;q21)染色体易位BCR/ABLt(9;22)染色体易位【费城染色体】目前开展的染色体易位检测（6种）：IGH/BCL2t(14;18)(q32;q21)31

t(14;18)(q32;q21)

染色体易位意义：

t(14;18)易位后形成的IGH/BCL2基因能编码完整BCL2蛋白，IGH基因附近的增强子使BCL2过表达

t(14;18)为FL的标志（低级别更易出现）,检出率达93%～100%DLBCL20%～

30%出现易位影响检出率的原因：

石蜡标本中DNA的降解

FL3b接近DLBCL，其易位率低，影响总体检出率t(14;18)(q32;q21)染色体易位意义：3253CregionVregionJregion14q32region3MCRMBR18q21regionIGH/BCL2DualColor,DualFusionTranslocationProbe

53CregionVregionJregion14q33探针杂交示意图肿瘤细胞核IGH/BCL2双色双融合易位探针杂交后显示1O1G2F信号细胞核IGH/BCL2双色双融合易位探针杂交后显示2O2G信号检测探针标记颜色探针定位

IGH

/BCL2green/orange

IGH:

14q32

BCL2:

18q21

正常:2O/2G异常:1O/1G/1F阳性标准:>7%的细胞出现黄色融合信号探针杂交示意图肿瘤细胞核IGH/BCL2双色双融合细胞核I34病例1：会诊84363，男，74y腹腔肿物；FISH：54%的细胞可见融合信号；

诊断：FLⅡ~Ⅲ。4×40×100×病例1：会诊84363，男，74y4×40×100×35病例2：会诊84362，女、36颈部肿物抗炎治疗后（出现变性坏死）诊断：DLBCLFISH：阳性，10%的细胞可见融合信号

40×IHC:BCL2100×病例2：会诊84362，女、3640×IHC:BCL210036

t(8;14)(q24;q32)

染色体易位意义：

t(8;14)易位后形成的IGH/MYC基因能编码完整MYC蛋白，IGH基因附近的增强子使MYC过表达应用范围：所有Burkitt淋巴瘤都有t(8;14)易位诊断不典型Burkitt淋巴瘤须有t(8;14)易位的MYC异常可见于继发于滤泡性淋巴瘤的前驱B淋巴母细胞白血病/淋巴瘤t(8;14)(q24;q32)染色体易位意义：37MYC8q24region14q32regionCregionVregionVregionCregionIGH/MYC,CEP8TriColor,DualFusionTranslocationProbe

MYC8q24region14q32regionCre38探针杂交示意图正常细胞核IGH/MYC,CEP8

三色双融合易位探针杂交后显示2R2G2A信号检测探针标记颜色探针定位LSIIGH

green14q32

LSIMYC

orange8q24CEP8

aqua8p11.1-q11.1正常:2G/2O/2A异常:1G/1R/2F/1A或>2A肿瘤细胞核IGH/MYC双色双融合易位探针杂交后显示1O1G2F信号探针杂交示意图正常细胞核IGH/MYC,CEP8三色双融3910×40×病例3:399318，女、5y颈淋巴结活检；

ISH:EBERs（+）；

FISH:45%的细胞可见融合信号；

诊断：散发性经典型BL。10×40×病例3:399318，女、5y40病例4:405618，女，21y盆腔肿物穿刺；

ISH:EBERs（+）；

FISH:23%的细胞可见融合信号；

诊断：考虑为散发性经典型BL。4×40×

活检穿刺标本病例4:405618，女，21y4×40×活检穿刺标本41病例5:399625，男、42yISH:EBERs（-）；

经多学科大会诊；诊断：较符合散发性非典型BL；FISH:25%的细胞可见融合信号；

4×40×

活检穿刺标本病例5:399625，男、42y4×40×活检穿刺标本42t(11;14)(q13;

q32)

染色体易位意义

t(11;14)易位后形成IGH/CCND1基因，IgH基因附近的增强子使CyclinD1过表达应用范围套细胞淋巴瘤的诊断性指标也出现过零星其它淋巴瘤t(11;14)易位的检出t(11;14)(q13;

q32)

染色体易位意义43IGH/CCND1DualColor,DualFusionTranslocationProbe

11q13region14q32regionCregionVregionJchainIGH/CCND1DualColor,DualFusi44简洁示意图简洁示意图45探针杂交示意图肿瘤细胞核IGH/CCND1双色双融合易位探针杂交后显示1R1G2F信号细胞核IGH/CCND1双色双融合易位探针杂交后显示2R2G信号检测探针标记颜色探针定位

IGH/CCND1green/orange

IGH:14q32

CCND1:

11q13

正常:2O/2G异常:1O/1G/2F探针杂交示意图肿瘤细胞核IGH/CCND1双色双融细胞核IG4610×40×IHC:CyclinD1病例6:393301，男，40y；肘部肿物；

IHC：CyclinD1弱阳性；经科内会诊；

FISH:21%的细胞可见融合信号；诊断：MCL10×40×IHC:CyclinD1病例6:393301，47所示箭头为染色体易位产生的融合信号（×100）所示箭头为染色体易位4810×CyclinD140×病例7:386766，女，67y扁桃体活检2块，直径0.3CM

IHC：CyclinD1弱阳性；

FISH:45%的细胞可见融合信号；诊断：不排除MCL的可能，重取活检；形态不典型+IHC不理想10×CyclinD140×病例7:386766，女，6749所示箭头为染色体易位产生的融合信号（×100）所示箭头为染色体易位产生的融合信号（×100）50FISH检测标本要求课件51FISH检测标本要求新鲜活检或手术切除标本；石蜡包埋组织或石蜡切片（3－5um）；肿瘤穿刺活检组织或细胞涂片；骨髓穿刺组织尽量送涂片，不用活检组织（因为脱钙需要使用盐酸，破坏DNA）；肿瘤细胞阳性的胸腹水涂片；一般在3个工作日后可以发出检测报告；FISH检测标本要求新鲜活检或手术切除标本；52EBV-DNA定量PCR结果的稳定性分析EBV-DNA定量PCR结果的稳定性分析53EBV-DNA定量PCR标准样品扩增曲线107106105104EBV-DNA定量PCR标准样品扩增曲线107106105154鼻咽癌检测结果比较5个不同样品重复检测；扩增可靠性99.4%；每个样品同时进行5次重复，结果重复性很好；同时扩增，结果存在显著差异的为8％；不同时间扩增，结果存在显著差异的为6.7％。鼻咽癌检测结果比较5个不同样品重复检测；555个样品，每个样品分5管抽提DNA后，同时进行定量PCR检测结果86987±21134(24%)62902.67786.2834080716EB0782113.151026.4144080716EB0788629.721107.8715080716EB0780556.481006.95605080716EB07120732.721509.159080716EB076579±2729(41%)7632.0595.40062080716EB061822.5322.78165080716EB068748.75109.359375080716EB067055.7888.19726080716EB067633.7695.42204080716EB06138±370(268%)0.000080716EB050.000080716EB050.000080716EB05827.3410.341734080716EB050.000080716EB05FinalresultsQuantitySampleName3335827±485146(14%)3038537.2037981.715080716EB093244077.6040550.97080716EB093300465.2841255.816080716EB094161768.8052022.11080716EB092934283.7636678.547080716EB09489681±47968(10%)497186.246214.828080716EB08498939.186236.7397080716EB08458680.945733.5117080716EB08433556.405419.455080716EB08560041.807000.5225080716EB085个样品，每个样品分5管抽提DNA后，同时进行定量PCR检测56×10²×103×104×105×106×10²×103×104×105×106575个样品，每个样品分3管，在不同时间（相隔一个星期）分别抽提DNA后，进行定量PCR检测结果5个样品，每个样品分3管，在不同时间（相隔一个星期）分别抽提58×103×103×104×105×1065个样品，每个样品分3管，在不同时间（相隔一个星期）分别抽提DNA后，进行定量PCR检测结果×103×103×104×105×1065个样品，59Thankyouforyourattention!!Thankyouforyourattention!!60FISH技术在肿瘤病理诊断及肿瘤分子靶点治疗中的应用中山大学肿瘤防治中心分子病理诊断实验室王芳邵建永FISH技术在肿瘤病理诊断及肿瘤分子靶点治疗中的应用中山大学61细胞遗传学技术原理：通过荧光标记的DNA探针与细胞核内的DNA靶序列杂交观察：荧光显微镜原位观察（细胞、组织）细胞核彩色探针信号目的：获得细胞内多条染色体(或染色体片段)或多种基因状态的信息。

Fluorescenceinsituhybridization（FISH）细胞遗传学技术Fluorescenceinsituh62用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。由于DNA分子在染色体上是沿着染色体纵轴呈线性排列，因而可以探针直接与染色体进行杂交从而将特定的基因在染色体上定位荧光标记探针探针变性样本DNA变性杂交原理用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中63FISH技术的特点操作简便，探针标记后稳定，可与多种技术结合，可成功地帮助细胞遗传学家做出回顾性分析方法敏感，能迅速得到结果，24小时就可以完成检测标本来源丰富，间期细胞，分裂中期细胞、分化或未分化细胞及死亡或存活的细胞皆可以被检测FISH技术的特点操作简便，探针标记后稳定，可与多种技术结合64centromeretelomeresubtelomerelocusspecificwholechromosomepaintCSP探针：染色体着丝粒探针GLP探针：位点特异性探针WPP探针：全染色体或染色体区域特异性探针FISH探针的种类centromeretelomeresubtelomer65操作流程简图制片预处理FISH结果分析破坏细胞膜利于探针杂交。蛋白酶消化、HCl处理变性杂交洗涤复染操作流程简图制片预处理FISH结果分析破坏细胞膜利66FISH技术在乳腺癌检测中的应用FISH技术在乳腺癌检测中的应用67乳腺癌

Her-2基因致癌基因：Her-2基因；位点：17q11.2-q12；编码蛋白：跨膜蛋白（与表皮生长因子受体部分同源）；25-30%乳腺癌病人都有HER-2的扩增；HER-2基因扩增是决定Herceptin治疗是否有效的关键性指标。乳腺癌Her-2基因致癌基因：Her-2基因；68Her-2基因的检测方法检测方法检测指标优点缺点IHCHer-2蛋白费用低光镜即可观察结果准确性差，主观性强，假阳性率高CISHHer-2DNA光镜即可观察结果对低度扩增及染色体非整倍扩增检测灵敏度下降FISHHer-2DNA对于低倍、高倍染色体非整倍性扩增检测准确性高，灵敏度特异性好，结果判断客观相对费用较高Her-2基因的检测方法检测方法检测指标优点缺点IHCHer69疾病名称检测探针标记颜色探针定位探针名称乳腺癌GLPHer2/CSP17

红/绿Her2：17q11.2-q12CSP17:17p11.1q11.1

CSP17:17号染色体着丝粒正常:2红/2绿异常:红信号大于2为异常细胞(绿色信号不少于2个的细胞)Her-2基因FISH

探针组疾病检测探针标记颜色探针定位探针名称乳腺癌GLPHer270DAPI染色后与HE切片对比图观察浸润部分导管内癌DAPI染色后与HE切片对比图观察浸润部分导管内癌71结果判断统计Ratio值（计数浸润性部分的20个细胞）

Ratio值＝20个细胞核中红信号总数/绿信号总数

Ratio＜1.8为阴性结果

Ratio＞2.2或众多信号连接成簇时可不计算为阳性结果

比值2～4为低度扩增4～10为中度扩增>10为高度扩增Ratio在1.8-2.2之间时，则需要再计数20个细胞核中的信号。如仍为临界值，则应在FISH检测报告中注明。结果判断统计Ratio值（计数浸润性部分的20个细胞）72A.无须计数的大簇团信号（高度扩增）B.颗粒状信号（R>10，高度扩增）C.须计数的颗粒状信号（R=3.5，低度扩增）ACBHer-2基因扩增状况A.无须计数的大簇团信号（高度扩增）B.颗粒状信号（R73Her-2基因无扩增情况红信号数>2，同时绿信号非整倍体R<1.8，无扩增红信号与绿信号均为两点，R=1Her-2基因无扩增情况红信号数>2，同时绿信号非整倍体R<74荧光原位杂交与免疫组化检测Her-2结果比较荧光原位杂交与免疫组化检测Her-2结果比较75我实验室已完成病例小结IHC01+2+3+FISH无扩增

1334020扩增

22102943总数(n=15)(n=5)(n=14)(n=29)（n=63）Her2表达IHC（2+）标本中，基因扩增率为71.41%Her2表达IHC（3+）标本中，基因扩增率为100%（文献报道：90-95%）我实验室已完成病例小结IHC01+76>30%的肿瘤细胞全部的细胞膜高强度着色免疫组化（3+）与FISH对比图×40×100住院号：177319浸润性导管癌Ⅱ级IHC：+++FISH：呈簇团状高度扩增×100>30%的肿瘤细胞全部免疫组化（3+）与FISH对比图×477免疫组化（2+）与FISH对比图1.>30%的肿瘤细胞全部的细胞膜弱至中等着色×40住院号：175465浸润性导管癌Ⅱ级IHC：++FISH：Ratio>5，中度扩增×100免疫组化（2+）与FISH对比图1.>30%的肿瘤细胞全部78免疫组化（2+）与FISH对比图2.>30%的肿瘤细胞全部的细胞膜弱至中等着色×40×100住院号：176921浸润性导管癌Ⅱ级IHC：++FISH：Ratio＝1.45，无扩增免疫组化（2+）与FISH对比图2.>30%的肿瘤细胞全部79>30%的肿瘤细胞弱的着色免疫组化（1+）与FISH对比图1×40×100住院号：175689浸润性导管癌Ⅱ级IHC：+FISH：Ratio＝1.62，无扩增>30%的肿瘤细胞弱的着色免疫组化（1+）与FISH对比图180免疫组化（1+）与FISH对比图2×40×100住院号：175895浸润性导管癌Ⅲ级IHC：+FISH：簇状扩增>30%的肿瘤细胞弱的着色免疫组化（1+）与FISH对比图2×40×100住院号：1781免疫组化（－）与FISH对比图1×100×40住院号：176846浸润性导管癌Ⅱ级IHC：－FISH：Ratio＝1.02，Her2基因无扩增<30%的肿瘤细胞弱的着色或不着色免疫组化（－）与FISH对比图1×100×40住院号：17682免疫组化（－）与FISH对比图2住院号：175472浸润性导管癌Ⅱ级IHC：－FISH：呈簇状扩增肿瘤细胞不着色×40×100免疫组化（－）与FISH对比图2住院号：175472肿瘤细胞83评价17号染色体的意义

17号染色体非整倍性：每个细胞中17号染色体多于或少于2个；乳腺癌遗传学特征之一，可能预示预后不良；

17号染色体多体性是导致IHC3+但FISH检测为阴性的主要原因；我实验室完成病例中17号染色体非整倍性发生率为33.3%。评价Her-2基因状态的同时应考虑

17号染色体数目的变化评价17号染色体的意义

评价Her-2基因状态的同时应考虑84IHC与FISH结果不一致原因分析IHC判断标准的主观性

内对照探针——17号染色体着丝粒探针的建立，排除IHC假阴性

IHC2+及3+的基因检测结果分离，无法控制由于17号染色体多体性造成假性扩增

IHC自身无法克服的缺陷基因扩增是Herceptin使用的关键性指标IHC与FISH结果不一致原因分析IHC判断标准的主观性基85Her2基因检测流程石蜡组织标本IHC检测再用FISH方法检测—1+3+2+—+Herceptin治疗+再用FISH方法检测Herceptin治疗FISH检测+—再用FISH方法检测+Her2基因检测流程石蜡组织标本IHC检测再用FISH—1+86乳腺癌HER2FISH检测报告模板乳腺癌HER2FISH检测报告模板87FISH技术检测染色体易位在淋巴瘤分型中的应用FISH技术检测染色体易位在淋巴瘤分型中的应用88淋巴瘤的诊断与分型难HE＋IHC+cytogenesis=

解决!淋巴瘤的诊断与分型难HE＋IHC+cytogenesis89

不同类型的淋巴瘤有各自不同的染色体易位使控制细胞发育分化过程中的关键蛋白失活与淋巴瘤的发生密切相关不同类型的淋巴瘤有各自不同的染色体易位使控制细胞发育分化过90IGH/BCL2t(14;18)(q32;q21)染色体易位IGH/MYCt(8;14)(q24;q32)染色体易位IGH/CCND1t(11;14)(q13;

q32)

染色体易位API2/MALT1t(11;18)(q21;q21)染色体易位IGH/MALT1t(14;18)(q32;q21)染色体易位BCR/ABLt(9;22)染色体易位【费城染色体】目前开展的染色体易位检测（6种）：IGH/BCL2t(14;18)(q32;q21)91

t(14;18)(q32;q21)

染色体易位意义：

t(14;18)易位后形成的IGH/BCL2基因能编码完整BCL2蛋白，IGH基因附近的增强子使BCL2过表达

t(14;18)为FL的标志（低级别更易出现）,检出率达93%～100%DLBCL20%～

30%出现易位影响检出率的原因：

石蜡标本中DNA的降解

FL3b接近DLBCL，其易位率低，影响总体检出率t(14;18)(q32;q21)染色体易位意义：9253CregionVregionJregion14q32region3MCRMBR18q21regionIGH/BCL2DualColor,DualFusionTranslocationProbe

53CregionVregionJregion14q93探针杂交示意图肿瘤细胞核IGH/BCL2双色双融合易位探针杂交后显示1O1G2F信号细胞核IGH/BCL2双色双融合易位探针杂交后显示2O2G信号检测探针标记颜色探针定位

IGH

/BCL2green/orange

IGH:

14q32

BCL2:

18q21

正常:2O/2G异常:1O/1G/1F阳性标准:>7%的细胞出现黄色融合信号探针杂交示意图肿瘤细胞核IGH/BCL2双色双融合细胞核I94病例1：会诊84363，男，74y腹腔肿物；FISH：54%的细胞可见融合信号；

诊断：FLⅡ~Ⅲ。4×40×100×病例1：会诊84363，男，74y4×40×100×95病例2：会诊84362，女、36颈部肿物抗炎治疗后（出现变性坏死）诊断：DLBCLFISH：阳性，10%的细胞可见融合信号

40×IHC:BCL2100×病例2：会诊84362，女、3640×IHC:BCL210096

t(8;14)(q24;q32)

染色体易位意义：

t(8;14)易位后形成的IGH/MYC基因能编码完整MYC蛋白，IGH基因附近的增强子使MYC过表达应用范围：所有Burkitt淋巴瘤都有t(8;14)易位诊断不典型Burkitt淋巴瘤须有t(8;14)易位的MYC异常可见于继发于滤泡性淋巴瘤的前驱B淋巴母细胞白血病/淋巴瘤t(8;14)(q24;q32)染色体易位意义：97MYC8q24region14q32regionCregionVregionVregionCregionIGH/MYC,CEP8TriColor,DualFusionTranslocationProbe

MYC8q24region14q32regionCre98探针杂交示意图正常细胞核IGH/MYC,CEP8

三色双融合易位探针杂交后显示2R2G2A信号检测探针标记颜色探针定位LSIIGH

green14q32

LSIMYC

orange8q24CEP8

aqua8p11.1-q11.1正常:2G/2O/2A异常:1G/1R/2F/1A或>2A肿瘤细胞核IGH/MYC双色双融合易位探针杂交后显示1O1G2F信号探针杂交示意图正常细胞核IGH/MYC,CEP8三色双融9910×40×病例3:399318，女、5y颈淋巴结活检；

ISH:EBERs（+）；

FISH:45%的细胞可见融合信号；

诊断：散发性经典型BL。10×40×病例3:399318，女、5y100病例4:405618，女，21y盆腔肿物穿刺；

ISH:EBERs（+）；

FISH:23%的细胞可见融合信号；

诊断：考虑为散发性经典型BL。4×40×

活检穿刺标本病例4:405618，女，21y4×40×活检穿刺标本101病例5:399625，男、42yISH:EBERs（-）；

经多学科大会诊；诊断：较符合散发性非典型BL；FISH:25%的细胞可见融合信号；

4×40×

活检穿刺标本病例5:399625，男、42y4×40×活检穿刺标本102t(11;14)(q13;

q32)

染色体易位意义

t(11;14)易位后形成IGH/CCND1基因，IgH基因附近的增强子使CyclinD1过表达应用范围套细胞淋巴瘤的诊断性指标也出现过零星其它淋巴瘤t(11;14)易位的检出t(11;14)(q13;

q32)

染色体易位意义103IGH/CCND1DualColor,DualFusionTranslocationProbe

11q13region14q32regionCregionVregionJchainIGH/CCND1DualColor,DualFusi104简洁示意图简洁示意图105探针杂交示意图肿瘤细胞核IGH/CCND1双色双融合易位探针杂交后显示1R1G2F信号细胞核IGH/CCND1双色双融合易位探针杂交后显示2R2G信号检测探针标记颜色探针定位

IGH/CCND1green/orange

IGH:14q32

CCND1:

11q13

正常:2O/2G异常:1O/1G/2F探针杂交示意图肿瘤细胞核IGH/CCND1双色双融细胞核IG10610×40×IHC:CyclinD1病例6:393301，男，40y；肘部肿物；

IHC：CyclinD1弱阳性；经科内会诊；

FISH:21%的细胞可见融合信号；诊断：MCL10×40×IHC:CyclinD1病例6:393301，107所示箭头为染色体易位产生的融合信号（×100）所示箭头为染色体易位10810×CyclinD140×病例7:386766，女，67y扁桃体活检2