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文档简介

基因工程法生产乙肝疫苗主讲人：生物工程（1）班学号：201230141主讲内容

乙肝疫苗研制的发展目的基因的获取DNA的重组基因的克隆目的基因克隆的筛选目的基因克隆的鉴定基因的表达综述乙肝疫苗研制的发展

国际上先后研制出了第一代血源性乙肝疫苗和第二代基因工程乙肝疫苗。

第一代血源性乙肝疫苗主要运用乙肝病毒携带者血清中提取纯化出的的乙肝病毒表面抗原，先后经过减毒处理和添加佐剂后注入人体预防接种。但是由于对血源性疫苗安全性存在顾虑，人们进一步着手开发第二代乙肝疫苗，也就是基因重组疫苗。DNA的重组

将乙肝疫苗的DNA片段和载体在体外连接重组，成为重组DNA分子，多采用连接酶的方法连接。DNA的克隆

即将乙肝疫苗重组体DNA分子，引进合适的宿主细胞(大肠杆菌、酵母)中增殖。根据所用载体的不同，可选用转化、转染、转导。转染是以质粒作载体时，重组体DNA分子以此种方式进入感受态的宿主细胞，以获得转化子菌落。转染是以λ噬菌体作载体时，构成的重组体DNA分子，以此种方式进入宿主细胞，可转染得到噬菌斑。转导是λ噬菌体DNA与外源DNA组成的重组体DNA分子，与噬菌体蛋白组装成具有感染力的噬菌体颗粒，即人工包装的噬菌体颗粒，引入宿主细胞的方法，往宿主细胞引入重组体DNA分子。目的基因克隆的筛选

即从大量携带有乙肝疫苗的重组体DNA分子的细胞中分离出带目的基因的细胞。因为不是所有的细胞都能获得重组体DNA分子，为了获得摄取了重组体DNA分子细胞，需经筛选，才能将其与未摄取重组体DNA分子的细胞区别开来，并作进一步鉴定。筛选含有重组体DNA分子细胞的方法，一般都是以载体DNA及目的基因的遗传标记及分子特征为依据，并结合受体细胞的基因表型而建立起来的。由于许多质粒都具有抗生素等药物的抗性标记，因此，在含有一定浓度抗生素的选择培养基上，可以很容易地把摄取了重组体DNA分子，因同时也获得了抗生素抗性的细胞辨认出来。但药物筛选只是一个方面，依据它只能判断质粒载体是否进入了受体细胞，还不能确定受体细胞是否摄取了含有目的基因的重组体DNA分子。目的基因克隆鉴定

对于乙肝疫苗的重组体DNA分子的鉴别，通常是在抽提出重组质粒DNA后，用凝胶电泳法或电镜观察其分子大小，用限制酶酶解，观察其酶切图谱进行。还可采用菌落原位杂交法来进行鉴定，即将菌落从最初生长的平板上转移到硝酸纤维素滤膜上，用碱裂解滤膜上的菌落，使DNA分子游离，变性，并固定在滤膜上，随即用同位素标记的与目的基因互补的DNA或RNA探针杂交，最后通过滤膜的放射自显影鉴定菌落，并从最初生长的平皿上挑选出放射自显影呈阳性的菌落。综述

综上所述，用基因工程法生产乙肝疫苗要先经过乙肝疫苗目的基因的获取、DNA的重组基因的克隆、目的基因克隆的筛选、目的基因克隆的鉴定、基因的表达。最后还需通过培养工程菌、乙肝病毒表面抗原的分离纯化、产品多

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