第15章甾体激素类药物的分析课件

第十五章甾体激素类药物的分析第十五章甾体激素类药物的分析基本结构：环戊烷并多氢菲ABCD12345678910111213141516171819一、基本结构及分类基本结构：环戊烷并多氢菲ABCD12345678910111分类：甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素分类：甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激二、结构与性质1.肾上腺皮质激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应C17

–

α–醇酮基还原性二、结构与性质1.肾上腺皮质激素主要活性基团性2.雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应

C17–

β–羟基可成酯2.雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团性质△43.孕激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应C17–甲酮基与亚硝基铁氰化纳反应C17–乙酰氧基C17–乙炔基水解鉴定乙酸与硝酸银沉淀3.孕激素主要活性基团性质△4–3–酮U4.雌激素主要活性基团性质A环为3–OH苯环UV、与重氮苯磺酸盐反应C17–乙炔基与AgNO3反应C17–羟基可成酯4.雌激素主要活性基团性质A环为3–OH苯环二、鉴别试验（一）与强酸的呈色反应甾体激素类药物呈色H2SO4H3PO4HClO4HCl（母核）二、鉴别试验（一）与强酸的呈色反应甾体激素类药物呈色H2SO与硫酸显色反应

显色荧光加水稀泼尼松龙深红

絮状↓灰泼尼松橙黄→蓝绿炔雌醚橙红黄绿↓红色

炔雌醇橙红黄绿絮状↓玫红醋酸可的松黄或微褪色并澄带橙清与硫酸显色反应(二)官能团的反应肾上腺皮质激素药物呈色四氮唑盐费林试液多伦试液OHˉ1C17

–

α–醇酮基还原性A.呈色反应(二)官能团的反应肾上腺皮质激素药物呈色四氮唑盐1肾上腺皮质激素药物Cu2O↓橙红色碱性酒石酸铜B.沉淀反应Ag↓黑色氨制硝酸银肾上腺皮质激素药物Cu2O↓橙红色碱性B.沉淀反应Ag↓甾体类激素药物黄色的腙羰基试剂2.C3–酮基和C20–酮基＃常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼甾体类激素药物黄色的腙羰基试剂2.C3–酮基和C20–黄体酮蓝紫色亚硝基铁氰化纳其他甾体淡橙色不显色3.甲酮基呈色反应黄体酮蓝紫色亚硝基铁氰化纳其他甾体淡橙色3.甲酮雌激素类药物红色偶氮染料重氮苯磺酸4.酚羟基雌激素类药物红色偶氮染料重氮苯磺酸4.酚羟基含炔基的甾体激素白色银盐沉淀硝酸银5.乙炔基↓含炔基的甾体激素白色银盐沉淀硝酸银5.乙炔基↓有机氟Fˉ有机破坏有机氯Clˉ6.有机卤素茜素氟蓝硝酸亚铈硝酸—硝酸银AgCl↓蓝色配合物

有机氟Fˉ有机破坏有机氯Clˉ6.有机卤素茜素氟蓝△４-3-酮240nm苯环280nm（三）UV法△４-3-酮240nm苯环（四）IR法（四）IR法（五）TLC法

主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（五）TLC法主要用于甾体激素类药物制剂的（六）HPLC法

主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）（六）HPLC法主要用于甾体激素类药物制剂三、杂质检查（一）有关物质检查定义与标示药物结构不同的甾体化合物都称为“有关物质”三、杂质检查（一）有关物质检查定义（1）TLC法（高低浓度对比法）判定方法：规定杂质斑点数目规定杂质斑点颜色（1）TLC法（高低浓度对比法）判定方法：（2）HPLC法（高低浓度对比法）判定方法：规定杂质峰数目规定杂质峰面积（2）HPLC法（高低浓度对比法）判定方法：（二）游离磷酸的检查地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠对照品法（二）游离磷酸的检查地塞米松磷酸钠对照品法（三）有机溶剂残留量的检查甲醇和丙酮甲醇≤0.3%丙酮≤0.5%

GC法（三）有机溶剂残留量的检查甲醇≤0.3%丙酮≤0.（一）HPLC法USP、BP、JP均采用RP－HPLC（大多内标法）特点用样量少，灵敏度高，分离效果好，测定速度快例：黄体酮的含量测定：ODS柱；甲醇-水（65：35）；254nm内标：己烯雌酚（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）四、含量测定（一）HPLC法USP、BP、JP均采用RP－HPLC（大多（二）UV法△４-3-酮240nm（±）肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素苯环280nm（±）雌激素（二）UV法△４-3-酮240nm（±）肾上腺皮质激（三）比色法弱、非分光光度活性药物强分光光度活性药物化学反应（三）比色法弱、非分光光度活性药物强分光光度活性药物化学反应

肾上腺皮质激素类C17-α－醇酮基强还原性1.原理OH-[还原]四氮唑比色法肾上腺皮质激素类C17-α－醇酮基强还原性1.原理

制备对照液制备供试液加入四氮唑盐有色产物484nmAX×

CXAR标示量（%）=AXAR×V×标示量×100%2、方法：以醋酸地塞米松为例制备对照液加入四氮唑盐有色产物484nmAX×CXA3.讨论（1）基团对反应速度的影响C11=O＞C11－OHC21－OH＞C21-酯3.讨论（1）基团对反应速度的影响C11=O＞C1（2）溶剂、水分的影响含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓10%含水30%→几无反应—无醛无水乙醇醛→A↑—无水乙醇（2）溶剂、水分的影响含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓1（3）O2与光线的影响反应过程反应产物怕光→避光、快速O2影响颜色强度和稳定性→隔绝空气、快速、充N2（3）O2与光线的影响反应过程怕光→避光、快速O2影响颜色（4）碱的种类及加入顺序反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行以氢氧化四甲基铵的结果最佳加入顺序：（4）碱的种类及加入顺序反应应在强碱性（pH13.75）加入（5）温度与时间t℃↑→ν↑→甲瓒分解↑ChP25℃40～45′（5）温度与时间t℃↑→ν↑→甲瓒分解↑ChP2肾上腺皮质激素、雄性激素和蛋白同化激素、孕激素C3－酮基1.原理HCl（缩合）异烟肼比色法肾上腺皮质激素、C3－酮基1.原理HCl（缩合）异烟肼比2.测定方法2.测定方法3.讨论反应速度（1）C3=O＞C17=O、C20=OC11=O不反应反应专属性C3－酮基3.讨论反应速度（1）C3=O＞C17=O、C2（2）溶剂的选择异烟肼盐酸盐→甲醇、乙醇无水甲醇无水乙醇（2）溶剂的选择异烟肼盐酸盐→甲醇、乙醇无水甲醇

原理λmax=515雌激素Kober反应比色法原理λmax=515雌激素Kober反应比色法1、熟悉本类药物的分类，掌握其结构特征与分析方法的关系2、熟悉某些官能团的呈色反应，了解其他鉴别方法3、掌握本类药物中其他甾体的检查方法，了解其他特殊杂质的检查第十章复习内容1、熟悉本类药物的分类，掌握其结构第十章复习内容4、掌握四氮唑比色法、异烟肼比色法的原理、方法及测定条件。了解

UV法、Kober反应比色法及HPLC

法在其含量测定中的应用4、掌握四氮唑比色法、异烟肼比色法.Kober反应是指雌激素类药物与_______共热呈色。()A.硫酸－甲醇B.硫酸－乙醇

C.硫酸－甲醛D.硫酸－醋酐.Kober反应是指雌激素类药物与_______共热呈色。(

用四氮唑比色法测定皮质激素类药物，是利用C17–α醇酮基的何种性质

A．氧化性

B．还原性

C．可加成性

D．酸性

E．碱性用四氮唑比色法测定皮质激素类第十五章甾体激素类药物的分析第十五章甾体激素类药物的分析基本结构：环戊烷并多氢菲ABCD12345678910111213141516171819一、基本结构及分类基本结构：环戊烷并多氢菲ABCD12345678910111分类：甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素分类：甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激二、结构与性质1.肾上腺皮质激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应C17

–

α–醇酮基还原性二、结构与性质1.肾上腺皮质激素主要活性基团性2.雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应

C17–

β–羟基可成酯2.雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团性质△43.孕激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应C17–甲酮基与亚硝基铁氰化纳反应C17–乙酰氧基C17–乙炔基水解鉴定乙酸与硝酸银沉淀3.孕激素主要活性基团性质△4–3–酮U4.雌激素主要活性基团性质A环为3–OH苯环UV、与重氮苯磺酸盐反应C17–乙炔基与AgNO3反应C17–羟基可成酯4.雌激素主要活性基团性质A环为3–OH苯环二、鉴别试验（一）与强酸的呈色反应甾体激素类药物呈色H2SO4H3PO4HClO4HCl（母核）二、鉴别试验（一）与强酸的呈色反应甾体激素类药物呈色H2SO与硫酸显色反应

显色荧光加水稀泼尼松龙深红

絮状↓灰泼尼松橙黄→蓝绿炔雌醚橙红黄绿↓红色

炔雌醇橙红黄绿絮状↓玫红醋酸可的松黄或微褪色并澄带橙清与硫酸显色反应(二)官能团的反应肾上腺皮质激素药物呈色四氮唑盐费林试液多伦试液OHˉ1C17

–

α–醇酮基还原性A.呈色反应(二)官能团的反应肾上腺皮质激素药物呈色四氮唑盐1肾上腺皮质激素药物Cu2O↓橙红色碱性酒石酸铜B.沉淀反应Ag↓黑色氨制硝酸银肾上腺皮质激素药物Cu2O↓橙红色碱性B.沉淀反应Ag↓甾体类激素药物黄色的腙羰基试剂2.C3–酮基和C20–酮基＃常用的羰基试剂：2,4-二硝基苯肼、异烟肼、硫酸苯肼甾体类激素药物黄色的腙羰基试剂2.C3–酮基和C20–黄体酮蓝紫色亚硝基铁氰化纳其他甾体淡橙色不显色3.甲酮基呈色反应黄体酮蓝紫色亚硝基铁氰化纳其他甾体淡橙色3.甲酮雌激素类药物红色偶氮染料重氮苯磺酸4.酚羟基雌激素类药物红色偶氮染料重氮苯磺酸4.酚羟基含炔基的甾体激素白色银盐沉淀硝酸银5.乙炔基↓含炔基的甾体激素白色银盐沉淀硝酸银5.乙炔基↓有机氟Fˉ有机破坏有机氯Clˉ6.有机卤素茜素氟蓝硝酸亚铈硝酸—硝酸银AgCl↓蓝色配合物

有机氟Fˉ有机破坏有机氯Clˉ6.有机卤素茜素氟蓝△４-3-酮240nm苯环280nm（三）UV法△４-3-酮240nm苯环（四）IR法（四）IR法（五）TLC法

主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（五）TLC法主要用于甾体激素类药物制剂的（六）HPLC法

主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）（六）HPLC法主要用于甾体激素类药物制剂三、杂质检查（一）有关物质检查定义与标示药物结构不同的甾体化合物都称为“有关物质”三、杂质检查（一）有关物质检查定义（1）TLC法（高低浓度对比法）判定方法：规定杂质斑点数目规定杂质斑点颜色（1）TLC法（高低浓度对比法）判定方法：（2）HPLC法（高低浓度对比法）判定方法：规定杂质峰数目规定杂质峰面积（2）HPLC法（高低浓度对比法）判定方法：（二）游离磷酸的检查地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠对照品法（二）游离磷酸的检查地塞米松磷酸钠对照品法（三）有机溶剂残留量的检查甲醇和丙酮甲醇≤0.3%丙酮≤0.5%

GC法（三）有机溶剂残留量的检查甲醇≤0.3%丙酮≤0.（一）HPLC法USP、BP、JP均采用RP－HPLC（大多内标法）特点用样量少，灵敏度高，分离效果好，测定速度快例：黄体酮的含量测定：ODS柱；甲醇-水（65：35）；254nm内标：己烯雌酚（甾体激素类药物常含有结构相似的其他甾体杂质，对利用结构特征设计的比色法有干扰）四、含量测定（一）HPLC法USP、BP、JP均采用RP－HPLC（大多（二）UV法△４-3-酮240nm（±）肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素苯环280nm（±）雌激素（二）UV法△４-3-酮240nm（±）肾上腺皮质激（三）比色法弱、非分光光度活性药物强分光光度活性药物化学反应（三）比色法弱、非分光光度活性药物强分光光度活性药物化学反应

肾上腺皮质激素类C17-α－醇酮基强还原性1.原理OH-[还原]四氮唑比色法肾上腺皮质激素类C17-α－醇酮基强还原性1.原理

制备对照液制备供试液加入四氮唑盐有色产物484nmAX×

CXAR标示量（%）=AXAR×V×标示量×100%2、方法：以醋酸地塞米松为例制备对照液加入四氮唑盐有色产物484nmAX×CXA3.讨论（1）基团对反应速度的影响C11=O＞C11－OHC21－OH＞C21-酯3.讨论（1）基团对反应速度的影响C11=O＞C1（2）溶剂、水分的影响含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓10%含水30%→几无反应—无醛无水乙醇醛→A↑—无水乙醇（2）溶剂、水分的影响含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓1（3）O2与光线的影响反应过程反应产物怕光→避光、快速O2影响颜色强度和稳定性→隔绝空气、快速、充N2（3）O2与光线的影响反应过程怕光→避光、快速O2影响颜色（4）碱的种类及加入顺序反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行以氢氧化四甲基铵的结果最佳加入顺序：（4）碱的种类及加入顺序反应应在强碱性（pH13.75）加入（5）温度与时间t℃↑→ν↑→甲瓒分解↑ChP25℃40～45′（5）温度与时间t℃↑→ν↑→甲瓒分解↑ChP2肾上腺