溶出度的方法学验证

关于溶出度的方法学验证第一页，共三十八页，2022年，8月28日1.方法学验证定义：方法验证就是根据检测项目的要求，预先设置一定的验证内容，并通过设计合理的试验来验证所采用的分析方法能否符合检测项目的要求。第二页，共三十八页，2022年，8月28日方法验证的目的是判断采用的分析方法是否科学、合理，是否能有效控制药品的内在质量。方法验证在分析方法建立过程中具有重要的作用，并成为质量研究和质量控制的组成部分只有经过验证的分析方法才能用于控制药品质量，因此方法验证是制订质量标准的基础。方法验证是药物研究过程中的重要内容。为什么要进行方法学验证？第三页，共三十八页，2022年，8月28日第四页，共三十八页，2022年，8月28日2.溶出度方法验证具体内容溶出度方法验证与含量测定基本相同：

专属性回收率精密度线性方法验证溶液稳定性耐用性第五页，共三十八页，2022年，8月28日值得注意：在方法学验证中，试验所用的溶媒应为溶出介质，即应考查辅料、胶囊壳在溶出介质中的干扰，药物在溶出介质中的线性、回收率及稳定性等。含量测定回收率一般选用测试浓度的80～120％，高、中、低浓度规定为80%、100%、120%；对于溶出度范围则规定为限度的20%，高、中、低三浓度设为：50%、限度规定、100%。第六页，共三十八页，2022年，8月28日干扰试验：测定干扰性试验在2%以下可忽略不计，2-5%之间可适当将限度提高，超过5%则测定方法不可取，如果是空胶囊产生的应进行胶囊的消除试验（不大于标示量2%可忽略不计，大于标示量25%，试验无效）。空胶囊测定：UVHPLC第七页，共三十八页，2022年，8月28日3.溶出介质选择pH值溶出介质1.02.2盐酸溶液3.8、4.0醋酸盐缓冲液4.55.8醋酸盐或磷酸盐缓冲液6.88.0磷酸盐缓冲液第八页，共三十八页，2022年，8月28日1．盐酸溶液

取下表中规定量的盐酸，加水稀释至1000ml，摇匀，即得。

pH值1.01.21.31.41.51.61.71.81.92.02.12.2盐酸(ml)9.007.656.054.793.732.922.341.841.461.170.920.70第九页，共三十八页，2022年，8月28日2．醋酸盐缓冲液

2mol/L醋酸溶液：取120.0g（114ml）冰醋酸用水稀释至1000ml，即得。取下表中规定物质的取样量，加水溶解并稀释至1000ml，摇匀，即得。pH值3.84.04.55.55.8醋酸钠取样量(g)0.671.222.995.986.232mol/L醋酸溶液取样量(ml)22.620.514.03.02.1第十页，共三十八页，2022年，8月28日3．磷酸盐缓冲液

0.2mol/L磷酸二氢钾溶液：取27.22g磷酸二氢钾，用水溶解并稀释至1000ml。0.2mol/L氢氧化钠溶液：取8.00g氢氧化钠，用水溶解并稀释至1000ml。取250ml0.2mol/L磷酸二氢钾溶液与下表中规定量的0.2mol/L氢氧化钠溶液混合后，再加水稀释至1000ml，摇匀，即得。pH值4.55.55.86.06.26.46.60.2mol/L氢氧化钠溶液（ml）09.018.028.040.558.082.0pH值6.87.07.27.47.67.88.00.2mol/L氢氧化钠溶液（ml）112.0145.5173.5195.5212.0222.5230.5第十一页，共三十八页，2022年，8月28日3.4注释溶出曲线一般要考察至少3种介质，对于仿制药，在标准介质中的溶出曲线必做，如果标准介质与上述常用介质不一致，与标准介质最接近的介质不再做。溶出介质第一次配制时，要测定pH值，与标准值的差值应不超过0.1。溶出介质使用前要加热或超声脱气。测定溶出曲线时取样点不宜过多，通常为5～6个点，例如：5、10、15、30、45、60分钟；小规格的制剂因采用100～250

ml溶出介质，所以溶出曲线一般可选3～4个时间点。第十二页，共三十八页，2022年，8月28日4.溶出方法（转篮法与桨法）及其转速的选择

桨法——片剂，以50转/分为主转篮法——胶囊剂，以100转/分为主。一般认为桨法50转/分相当于转篮法100转/分第十三页，共三十八页，2022年，8月28日5.溶出度测定方法的验证第十四页，共三十八页，2022年，8月28日溶出度测定取本品6粒，采用2010版药典附录ⅩC第二法。以0.1M

盐酸溶液500ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经30分钟时，取溶液10ml，0.22μmPES滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。照紫外分光光度法，必要时对溶液稀释，以溶出介质为参比，在286nm测定吸收度。以0.002%w/v的ABC标准液的吸光度作对照，计算每粒的溶出量。例：ABC溶出度的方法学验证第十五页，共三十八页，2022年，8月28日1

专属性专属性试验的目的是考察辅料和胶囊壳对溶出度测定有没有干扰。HPLC法判断标准：空白溶液在主成分的位置不出峰；供试品溶液色谱峰的理论板数、拖尾因子要符合要求；对照品溶液和供试品溶液的峰面积相差不超过10%。空白溶液供试品溶液对照品溶液第十六页，共三十八页，2022年，8月28日UV法：

溶出度-待测溶液的制备空白溶剂0.1MHCl溶液阴性对照取处方量的空白辅料适量（29.59mg），置100ml量瓶中，用0.1MHCl溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液。空胶囊壳取6粒胶囊，尽可能除尽内容物，置同一溶出杯中，按溶出度项下方法溶出，经30分钟时取样10ml，用0.22μmPES滤膜过滤，取续滤液。对照品溶液称取ABC标准物质约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，取1ml至50ml量瓶中，用0.1MHCl溶解并稀释至刻度，摇匀供试品溶液取本品1粒，照溶出度测定法（中国药典2010年版二部附录ⅩC第二法），以0.1MHCl500ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经30分钟时，取溶液10ml滤过，取续滤液。第十七页，共三十八页，2022年，8月28日分别取上述溶液适量，做紫外检测，记录紫外吸收值，结果如下：专属性-阴性对照试验浓度（mg/ml)吸光度平均标示吸光度干扰量(%)对照品溶液-10.0200.5650.5550.54对照品溶液-20.0200.555辅料0.003专属性-空胶囊壳干扰试验胶囊壳-1胶囊壳-2胶囊壳-3胶囊壳-4胶囊壳-5胶囊壳-6校正值(%)A0.0100.0090.0080.0080.0080.0101.5平均吸光度0.01第十八页，共三十八页，2022年，8月28日结果表明空白溶剂、空胶囊壳、空白辅料及本品中其他组分对本品中ABC的测定无干扰，该法专属性较强，可用于本品中ABC的溶出度检查。第十九页，共三十八页，2022年，8月28日2系统精密度HPLC法：取专属性项下的对照品溶液，连续进样6次。结果见下表。要求：峰面积RSD不超过2.0%；保留时间RSD不超过1.0%。进样次数123456RSD(%)峰面积

保留时间

第二十页，共三十八页，2022年，8月28日UV法取20120206批供试品，照溶出度测定项下方法溶出并测定，按紫外吸收值计算RSD，结果见下表：溶出度-进样精密度试验结果

进样次数123456吸光度0.5470.5470.5470.5470.5470.547平均值0.547RSD(%)0进样精密度的RSD<2%，符合规定。第二十一页，共三十八页，2022年，8月28日3线性与范围取对照品适量，按标准方法配制一系列浓度的溶液，通常不少于6份，例如：10%、25%、50%、75%、100%（标准浓度）、150%。HPLC法要求：最低浓度样品的色谱图中，信噪比要不低于10:1；以峰面积对浓度浓度进行线性回归，线性相关系数r（保留4位有效数字）不小于0.999或R2不小于0.998；y轴截距的绝对值应不超过100%浓度样品峰面积的2%。第二十二页，共三十八页，2022年，8月28日UV法取ABC对照品，精密称定10.17mg，置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，得1mg/ml的储备液。取5ml，至50ml量瓶中，0.1MHCl定容，得到ABC浓度为101.7ug/ml的母液。分别精密量取上述母液5ml、4ml、3ml、2ml、1ml、0.5ml置10ml量瓶中，用0.1MHCl稀释到刻度，摇匀，得到浓度为50.85μg/ml、40.68μg/ml、30.51μg/m、20.34μg/ml、10.17μg/ml、5.09μg/ml的溶液。分别取上述溶液适量，照溶出度测定项下方法测定，记录紫外吸收。将所测得的吸收值(A)与对应浓度(C)进行线性回归，得到回归方程和相关系数，结果如下：第二十三页，共三十八页，2022年，8月28日溶出度-标准曲线数据浓度（ug/ml)5.0910.1720.3430.5140.6850.85吸光度0.1460.2930.5820.8611.1471.432线性方程y=0.028x+0.0068相关系数R2=1结果表明：ABC的0.1MHCl溶液在5～50μg/ml范围内线性良好。第二十四页，共三十八页，2022年，8月28日取胶囊1粒置量瓶中加标准中规定的溶剂适量超声溶解，定量稀释至标准规定浓度4滤膜吸附（此项试验要在准确度和精密度之前做）

供试品溶液配制：摇匀分为两份滤过，弃去不同的体积，分别取续滤液测定离心，取上清液测定第二十五页，共三十八页，2022年，8月28日比较峰面积的变化，结果见下表。

样品峰面积吸附量（%）离心

弃3ml

弃5ml

弃7ml

吸附量应不大于标示量的2%。滤膜对样品基本无吸附作用，即对实验结果的测定无干扰。第二十六页，共三十八页，2022年，8月28日

5准确度（要保证主成分能够完全溶解）方法１：取对照品适量，依法配制成相当于标示量50%、80%（一般为标准限度）和100%的供试品溶液，均加入处方量的辅料（包括胶囊壳），必要时超声使主成分溶解，每个浓度平行配制三份，依法测定含量。结果见下表。第二十七页，共三十八页，2022年，8月28日溶出度回收率试验结果

样品加入量（mg）测得量（mg）回收率（%）平均值（%）５０％１２３８０％１２３１００％１２３判断标准：3个浓度的平均回收率均为98.0%～102.0%；RSD≤2.0%（n=9）。第二十八页，共三十八页，2022年，8月28日精密称取ABC对照品10mg，置100ml量瓶中，加0.1MHCl溶解并稀释到刻度，摇匀，得到100μg/ml的对照品储备液。另取处方量的空白混合辅料适量，分别置9个50ml的量瓶中，分别向其中3份精密加入ABC对照品储备液5.0ml（加入空白辅料73.99mg），另外3份精密加入ABC对照品储备液8.0ml（加入空白辅料118.38mg）和另外3份精密加入ABC对照品储备液10.0ml（加入空白辅料147.98mg），加0.1MHCl稀释至刻度，振摇滤过，取续滤液照溶出度测定，计算回收率，以以下式计算回收率：第二十九页，共三十八页，2022年，8月28日结果如下溶出度-回收率试验浓度水平加入量(mg)测得量(mg)回收率（%）平均值SDRSD(%)50%0.5040.49798.6099.200.010.950.4970.49599.640.4970.499100.3480%0.8060.79199.460.7950.78298.360.7950.78098.14100%0.9941.003100.870.9940.98098.580.9940.98298.76溶出度测定的各浓度回收率均在98～102%之间，RSD小于2%，符合规定第三十页，共三十八页，2022年，8月28日只能说明用方法１，测定的准确度良好，不能说明将样品加入溶出仪中，溶出后的溶液的测定准确度是良好的啊，因为两种方法可能溶出的辅料量都不一样，怎么办？方法２：空白制剂（不含主药）＋对照品溶出，测定回收率。称取阿莫西林对照品３０.０ｍｇ各６份，分别加至已装有1粒不含阿莫西林的辅料胶囊的溶出杯中，按溶出度测定方法测定，计算回收率。第三十一页，共三十八页，2022年，8月28日6稳定性(并非对照品溶液的稳定性）

（可以同时做四种介质）

取胶囊1粒，置量瓶中，加质量标准中规定的溶剂适量，超声使充分溶解后定量稀释至标准规定浓度，摇匀，滤过，取续滤液室温放置，分别于0、2、4、6、8、12小时进样。要求：峰面积RSD不超过2.0%

第三十二页，共三十八页，2022年，8月28日稳定性取溶出度测定3.2.P.5.2.7项下的供试品溶液适量，用0.22μmPES滤膜滤过，取续滤液于室温下放置，分别于0、2、4、6、8和10小时照溶出度测定项下方法测定，记录吸光度，结果见下表：溶出度-溶液稳定性试验结果时间0h2h4h6h8h10h平均值SDRSD（%）吸光度0.560.560.5640.5620.560.5610.560.0020.29结果表明供试品溶液在10小时内稳定。

HPLC法同ＵＶ法。第三十三页，共三十八页，2022年，8月28日7重复性方法1：以6个单独制剂分别测定溶出度，计算RSD或可信限。但是此时受制剂个体间差异影响测定结果。比如测定重复性不好，可能是因为制剂的含量差异引起的。

第三十四页，共三十八页，2022年，8月28日重复性方法2:取约相当于ABC10mg的批供试品，置10ml量瓶中