维生素类药物分析

第十四章维生素类药物的分析

Chapter14AnalysisofVitamins学习要求掌握VitA的鉴别和含量测定；VitC的鉴别、检查和含量测定。熟悉VitB1的鉴别和含量测定；VitE的鉴别、检查和含量测定。了解VitD的鉴别、检查和含量测定。概述一、概念维生素1〕维持人体正常生理功能所必需的一类微量的生物活性物质。2〕大多数人体内不能自行合成,必须从食物中摄取。

VitA缺乏—夜盲症

VitB1缺乏—脚气病VitC缺乏—坏血病VitD缺乏—＊如果人体缺少某种维生素，就会引起维生素缺乏症，而影响人体的正常生理机能。水溶性：VitA、D、E、K等VitB族（B1、B2、B6

、B12等）VitC

、烟酸、叶酸、烟酰胺、泛酸等脂溶性：二、分类－按溶解度结构性质VitA、D、E、B1、C鉴别试验杂质检查含量测定VitA1：视黄醇，生物活性最高VitA2：去氢维生素，活性是VA1的30-40%VitA3：去水维生素，活性是VA1的0.4%第一节维生素A的分析

AnalysisofvitaminA

VitA故通常所说的维生素A是指维生素A1。人工合成的VA醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液，还有VA胶丸、VAD胶丸和VAD滴丸药典收录情况环己烯共轭多烯侧链存在多种立体异构化合物具有UV吸收1．化学结构一．结构与性质CH2OR6543219'8'7'6'5'4'3'2'1'R=HVitA

醇VA1retinolR=—COCH3VitA

醋酸酯vitaminAacetateR=—COC15H31

VitA

棕榈酸酯vitaminApalmitateCH2OR去氢VitA（A2，dehydroretinol）CH2去水VitA（A3，anhydroretinol）6个共轭双键〔1〕环己烯+共轭多烯侧链；5个双键〔2〕存在多种立体异构体，具有UV吸收天然VitA侧链为全反式；〔3〕通常所说的维生素A是指维生素A1〔4〕天然来源为鱼肝油，主要为醋酸酯和棕榈酸酯。目前多为人工合成产物结构特点：〔二〕性质Properties1溶解性2不稳定性

3紫外吸收特性4与三氯化锑呈色＊不溶于水＊溶于乙醚，氯仿，异丙醇，环己烷，脂肪和油。1溶解性VA光、热、氧化剂、氧氧化产物（无活性）2不稳定性＊共轭多烯侧链—性质不稳定.临床用其醋酸酯或棕榈酸酯的油溶液密封、凉暗处保存，充氮气或参加抗氧剂◆维生素A的氧化产物：无生物活性▲ⅰ．环氧化物▲

ⅱ．维生素A醛▲

ⅲ．维生素A酸CH2OHOCOOHCHOCH2OHO＊具有共轭多烯侧链—紫外吸收。＊λmax=325～328nm，随VA存在状态以及所用的溶剂，最大吸收波长的位置有所不同鉴别、含量测定3紫外吸收特性★鉴别★含量测定4与SbCl3呈色—Carr-PriceVA蓝色SbCl3CHCl3～紫红色λmax

=620nm

a.

溶解性b.不稳定性

c.紫外吸收特性

d.与SbCl3作用小结.

维生素A结构性质CH2OR6543219'8'7'6'5'4'3'2'1'二、鉴别试验Carr-PriceUVTLCVitA(10～20IU/ml)蓝色SbCl3/CHCl3～紫红色无水/无醇〔一〕三氯化锑反响Carr-Price反应机理：VA与三氯化锑(SbCl3)中存在的SbCl5作用形成不稳定的蓝色正碳离子。本卷须知：反响需在无水、无醇条件下进行。溶剂：无水三氯化锑的无醇氯仿溶液乙醇可与正碳离子作用，使正电荷消失水可使SbCl3水解成SbOClVitA：5个共轭双键，无水乙醇液λmax=326nmVitA2、A3：6个共轭双键，红移.〔二〕紫外分光光度法UV▲例：VA和其标准品用环己烷溶解展开剂：环己烷—乙醚〔8：2〕薄层板：硅胶G显色剂：SbCl3T.S.现象：蓝色斑点Rf：VA醇VA醋酸酯VA棕榈酸酯目的：鉴别醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯〔三〕薄层色谱法TLC三、含量测定1紫外-可见分光光度法2比色法3高效液相色谱法〔一〕紫外-可见分光光度法2005利用共轭多烯结构，在325～328nm处有选择性吸收峰（1）原因（2）原理（3）波长的选择（4）测定方法方法：三点校正法——三波长测定法〔1〕原因为了消除杂质〔相关物质〕吸收所引起的误差＊相关物质—结构相似,维生素A最大吸收波长附近也有吸收，对测定有影响。＊Morton和Stubbs等人在1946年提出了三点校正法。相关物质的吸收＊d.

鲸醇：维生素A醇的二聚体，无生物活性＊a.

维生素A的衍生物（A2、A3）＊b.

维生素A的氧化产物＊c.

合成时的中间体＊e.

维生素A异构体＊f.

稀释用油〔2〕原理：假定、根据a:杂质吸收在310nm～340nm范围近似呈一条直线，随λ↑,A↓b:物质对光的吸收具有加和性A样品=A维生素A+A相关物质〔3〕波长的选择2、3：分别在1两侧1：VitA的maxⅰ．等波长差法：ⅱ．等吸收比法：ⅰ．等波长差法：测VitA醋酸酯1=328nm;2=316nm;3=340nmii．等吸收比法：测VitA醇1=325nm;2=310nm;3=334nm*波长的选择VA醋酸酯1=328nm2=316nm3=340nmⅰ．等波长差法：ⅱ．等吸收比法：

2、3：分别在1两侧1：VitA的maxVA醇1=325nm2=310nm3=334nm〔4〕测定方法收载有2种方法第一法（直接测定法）

测定对象

VA醋酸酯

等波长差法300、316、328、340、360nm325330波长：300、316、328、340、360nm测定：A0、A1、A2、A3、A4找到：λmax=328nm〔326～329〕在326~329nm，第一法测定。不在326~329nm，第二法测定。计算比值：A0/A2、A1/A2、A2/A2、A3/A2、A4/A2比较：①算吸光度比值差测定波长吸光度吸光度比值吸光度比值差计算值规定值300

0.555

316

0.907

(325)

328

1.000

(330)

340

0.811

360

0.299

②判断最大吸收波长是否在326～329之间是否计算吸收度比值之差是否超过±0.02第二法（皂化）是否A328

-15%-3%03%

皂化

A328（校正）A328皂化1IU的VitA的维生素A醇的维生素A醋酸酯a:效价的定义：每g供试品中含有VitA的国际单位数。单位IU/g③计算1g维生素A醋酸酯=1g维生素A醇=换算因子（维生素A醋酸酯）=2907000/1530=1900换算因子（维生素A醇）=3330000/1820=1830b:换算因子的定义：单位数值所相当的效价C:求

A:A328校正

A328d:求效价e:求标示量%小结：第一法〔直接测定法〕--VA醋酸酯①②判断A328,A328校正④求效价⑤求③求：平均胶丸重为维生素A的标示量为10000IU/丸取样：→100ml，从中取出2ml→25ml.练习题：维生素A醋酸酯胶丸的含量测定求：维生素A醋酸酯的标示百分含量。首先计算吸收度比值和吸收度比值差。由结果知，需计算校正吸收度。由此可知，应该用测得的A328计算。第二法(皂化法)

测定对象VitA醇

等吸收比法300、310、325、334nm△皂化EtOH+KOH乙醚提取**样品一定量水浴浓缩异丙醇溶介9～15IU/ml波长：300、310、325、334nm测定：A0、A1、A2、A3找到：λmax=325nm〔323~327〕在323~327nm，皂化法测定。不在323~327nm，色谱法纯化。计算比值：A0/A2----A300/A325①算吸光度比值②判断吸光度比值是否≤A325校正=6.815A325－2.555A310－4.260A334最大吸收波长是否在323～327之间是否A300/A325是否≤色谱法纯化是否A325校正32531033403%－3%A325校正A325校正A325③求效价④⑤小结：测定方法第一法VA醋酸酯第二法VA醇λ323～327nm

A300/A325λ326～329nm之间

超否A328±3%之间：A328-15%～-3%：A328校正<-15%或>+3%:皂化法±3%之间：A325<-3%或>+3%:A325校正色谱法A328校正〔2A328－A316－A340〕A325校正325310334③求①判断A②④小结:VitA紫外分光光度法2005方法：三点校正法——三波长测定法2、3：在1两侧ⅰ．等波长差法：ⅱ．等吸收比法：

1：VitA的max〔1〕原因：消除杂质吸收所引起的误差a:杂质吸收在310nm-340nm范围近似呈一条直线，随λ↑,A↓b:物质对光的吸收具有加和性〔2〕原理〔3〕波长的选择〔4〕测定方法〔二〕三氯化锑比色法〔三〕高效液相色谱法思考题1、三点校正紫外分光光度法测定维生素A含量的依据〔原理〕是什么？2、三点校正紫外分光光度法测定维生素A醋酸酯含量时，换算因子是多少？写出测定其胶丸含量时标示量%的计算式。3、将维生素A溶于无水乙醇-盐酸溶液中，测定紫外吸收光谱，在326nm波长处有一吸收峰，而将此液置水浴上加热，冷却后，在300-400nm范围内出现3个吸收峰，这是为什么？小结：VitA的分析

a.

紫外吸收特性b.溶解性

c.不稳定性d.与SbCl3作用结构性质鉴别试验含量测定CH2OR6543219'8'7'6'5'4'3'2'1'Carr-Price、UV、TLC紫外-可见分光光度法三氯化锑比色法高效液相色谱法维生素A含量用生物效价表示，其效价单位是

A、IUB、gC、mlD、IU/gE、IU/ml每单位维生素A相当于维生素A醋酸酯g，其=1530，那么换算因数等于A、1820B、1830C、1900D、1920E、无法计算计算维生素A吸收度的校正公式为A328(校正后)=3.52(2A328-A316-A340)。如果校正后的吸收度与未校正的吸收度之差对未经校正吸收度的百分比为-3.2%，那么应A、用皂化法测定B、用校正后的吸收度计算含量C、用未校正的吸收度计算含量D、改用另一校正公式计算E、以上都不对维生素A的鉴别试验为A、三氯化铁反响B、硫酸锑反响C、2,6-二氯靛酚反响D、三氯化锑反响E、间二硝基苯的碱性乙醇液反响维生素A具有易被紫外光裂解、易被空气中氧或氧化剂氧化等性质，是由于分子中含有〔〕A、环已烯基B、2,6,6-三甲基环已烯基C、伯醇基D、乙醇基E、共轭多烯醇侧链E哪些描述适合VitA结构及性质

A、分子具有长二烯醇侧链，易被氧化

B、具有较长的全反式共轭多烯结构

C.含酯键，经水解后产生苯并二氢吡喃衍生物，易被氧化

D.与三氯化锑的无醇氯仿液中呈不稳定兰色，很快转变为紫红色

E、样品用无水乙醇溶解后，加硝酸加后，呈橙红色中国药典〔2000年版〕规定维生素A的测定采用紫外分光光度〔三点校正法〕，此法又称为A、等波长差法B、等吸收比法C、6/7A法D、差示分光光度法E、双波长分光光度法用“三点校正法〞测定维生素A含量的依据是A、维生素A可见光区有最大吸收B、杂质在310～340nm波长范围内呈线性吸收C、物质对光吸收具加和性D、维生素A与三氯化锑的无水氯仿溶液作用，产生不稳定蓝色E、维生素A在碱性溶液中，可被铁氰化钾氧化生成具有蓝色荧光的硫色素第二节维生素B1的分析

AnalysisofvitaminB1氨基嘧啶环噻唑环(季铵碱)一、结构与性质NNH3CNH2NSCH3CH2CH2OH+

H-

ClCl

·CH2还原性碱性酸性1、结构(盐酸硫胺)2、结构特点a.氨基嘧啶—亚甲基—噻唑环季铵化合物b.碱性基团：嘧啶环上的氨基噻唑环上的季铵可与酸成盐（一）、溶解性1、易溶于水2、水溶液呈酸性（二）、UVHCl(9→1000)λmax=246nm（三）、硫色素反应硫色素OH-O蓝色荧光VitB1正丁醇3、性质（四）、沉淀反应嘧啶环噻唑环生物碱沉淀剂沉淀〔五〕、具有两个碱性基团，可以和酸成盐。▲噻唑环上的季铵▲嘧啶环上的氨基（六）、氯化物特性呈氯化物的反应，用于鉴别（七）、硫化物特性VitB1Pb2+OH-△PbS↓二、鉴别试验

（一）硫色素反应Ch.P（2005）荧光消失正丁醇蓝色荧光H+OH-硫色素铁氰化钾K3Fe(CN)6维生素¾¾®¾+-OH1BVB1专属反响，用于鉴别和含量测定。〔三〕其他反响S元素反响Cl-反响小结：VitB1鉴别试验O硫色素OH-蓝色荧光VitB1正丁醇嘧啶环噻唑环生物碱沉淀剂沉淀Cl-反响NaOHPb(NO3)2△PbSS元素反响HNO3AgNO3AgCl↓〔一〕硫色素反响〔2005〕〔二〕沉淀反响〔三〕其他反响Cl2↑MnO2H+

KI-淀粉

蓝色

三、含量测定非水滴定法〔2005测原料药〕紫外分光光度法〔2005测制剂〕硫色素荧光法硅钨酸重量法〔一〕非水碱量法VitB1原料醋酸汞：可与氢卤酸盐生成卤化汞，消除氢卤酸盐的干扰1、原理VitB12HClO4冰醋酸Hg(Ac)2

VitB1·ClO4·HClO4溶剂：冰醋酸指示剂：ChP以喹那啶红-亚甲蓝〔紫红→天蓝〕滴定剂：高氯酸(0.1mol/L)醋酸汞：消除氢卤酸盐的干扰需要做空白试验摩尔比：1：22、方法3、计算要求：≥99.0%〔二〕UV法VitB1片剂、注射剂1、原理共轭体pH=2HCl(9→1000)

λmax=246nm2、计算VitB1片：90.0%～110.0%VitB1注射液：93.0%～107.0%〔三〕硫色素荧光法λex=365nm,λem=435nm〔四〕硅钨酸重量法2VB1＋硅钨酸白色沉淀＋4HCl1、原理2VB1的分子量为2×337.27沉淀的分子量为3479.222、计算换算因数=0.1939（含义：1g沉淀相当于0.1939gVB1）鉴别试验：硫色素反响、沉淀反响、其他反响含量测定非水碱量法、UV法、硫色素荧光法、硅钨酸重量法小结：VitB1的分析NNH3CNH2NSCH3CH2CH2OH+

H-

ClCl

·CH2能发生硫色素特征反响的药物A、维生素AB、维生素B1C、维生素CD、维生素EE、烟酸以下药物的碱性溶液，参加铁氰化钾后，再加正丁醇，显蓝色荧光是A、维生素AB、维生素B1C、维生素CD、维生素DE、维生素E烯二醇强还原性酸性L－抗坏血酸一、结构与性质第三节维生素C的分析

内酯环水解手性CUV与糖类结构相似Vc易溶于水，水溶液呈酸性；三氯甲烷中不溶〔一〕溶解性（二）烯二醇结构－还原性、酸性强还原性酸性一元酸由于共轭效应的影响C3－OHpKaC2－OHpKa可与NaHCO3生成钠盐〔三〕手性C〔C4、C5〕旋光性

比旋度0～0OOHHOO

COHHCH2OH123456**L(+)－抗坏血酸〔活性最高〕D(-)－异抗坏血酸〔5%〕L(+)－异抗坏血酸〔无活性〕D(-)－抗坏血酸〔无活性〕ＮaOH酮酸盐〔四〕内酯环结构水解性Ｎa2CO3单钠盐〔五〕与糖类结构相似具有糖的性质50℃（六）共轭双键UV二、鉴别试验IdentifactionTests

（一）与氧化剂反应（强还原性）1、与AgNO3反响2005VitC2,6—二氯靛酚玫瑰红色～无色2、与2,6—二氯靛酚反应

Ch.P20053、与其他氧化剂的反响碘或高锰酸钾碱性酒石酸酮磷钼酸→Cu2O↓砖红色→钼蓝→试剂褪色〔二〕糖类的反响VitC三氯醋酸戊糖50℃

吡咯水解、脱羧脱水糠醛〔三〕UV〔BP〕VitCH+0.01mol/LHClλmax=243nm小结：VitC的鉴别试验〔一〕与氧化剂反响〔强复原性〕1、与AgNO3反响20052、与2,6—二氯靛酚反响20053、与其他氧化剂的反响〔二〕糖类的反响〔三〕UVHClλmax=243nm溶液的澄清度与颜色铁、铜离子的检查三、杂质检查1、溶液的澄清度与颜色：

有色杂质：VitCPH、光线、空气、温度糠醛检查方法分光光度法原料:溶液应澄清无色

420nm，A<0.03注射剂：420nm，A<0.06片剂：440nm，A<0.072、铁、铜离子的检查方法：原子吸收分光光度法供试品+标准溶液a供试品b合格b＜

a-b标准溶液的吸收Fe：Cu：〔一〕碘量法2005原料、片剂、注射液〔二〕2，6-二氯靛酚反响USPJP四、含量测定〔一〕碘量法〔原料、片剂、注射液〕1、原理指示剂淀粉指示液

(无色→蓝色）反应摩尔比1∶12、方法取本品约，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘〔〕滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘液(0.05mol/L)相当于的C6H8O6。3、讨论C、立即滴定减少O2的干扰A、新沸冷水赶走水中O2B、酸性环境稀醋酸减慢VitC被O2氧化速度D、附加剂干扰的排除VitC注射液—消除抗氧剂的干扰VitC注射液测定前要加丙酮NaHSO3抗氧剂COCH3CH3COH33CHCHNaSO34、计算原料药：≥99.0%

注射剂：90.0%～110.0%

片剂：93.0%～107.0%

鉴别试验：硫色素反响、沉淀反响、其他反响含量测定非水碱量法、UV法、硫色素荧光法、硅钨酸重量法小结：VitB1的分析NNH3CNH2NSCH3CH2CH2OH+

H-

ClCl

·CH2〔二〕2,6—二氯靛酚滴定法1、原理USPJP2,6-二氯靛酚VitC酚亚胺H+

2、方法样品空白HPO3-HAc二氯靛酚液V样V空白自身指示终点法：玫瑰红色，持续5秒不褪〔1〕酸性环境HPO3-HAc稳定VitC〔2〕快速滴定2min内防止其他复原性物质干扰〔3〕测定对象：VC制剂及食品分析3、讨论discuss

〔4〕缺点2,6－二氯靛酚不稳定需经常标定贮存≤一周干扰多氧化能力强小结：VitC的分析L－抗坏血酸溶解性强复原性酸性旋光性水解性糖的性质UV与氧化剂反响糖类的反响UV溶液的澄清度与颜色铁、铜离子的检查碘量法2,6—二氯靛酚滴定法鉴别杂质检查含量测定维生素C的鉴别反响是A.与硝酸银反响B.与2，6-二氯靛酚反响C.与三氯化铁反响D.与茚三酮反响E.与碘化汞钾反响测定维生素C注射液的含量时,在操作过程中要参加丙酮，这是为了A、保持维生素C的稳定B、增加维生素C的溶解度C、使反响完全D、加快反响速度E、消除注射液中抗氧剂的干扰使用碘量法测定维生素C的含量，维生素C的分子量为，每1ml碘滴定液(0.05mol/L)，相当于维生素C的量为

E.1.761mg碘量法测定维生素C含量，取本品，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml至溶液中，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液(0.05mol/L)滴定，使溶液显蓝色并在30s内不退，消耗碘溶液。维生素C的分子量为，求维生素C含量98.1%B.98.9%C.98.5%D.50.8%E.88.1%可发生以下反响或现象的药物为A、维生素B1(盐酸硫胺)B、维生素CC、两者均能D、两者均不能121、与碘化汞钾生成黄色沉淀122、麦芽酚反响123、在乙醚中不溶124、与2,6-二氯靛酚反响使颜色消失125、硫色素反响ADCBA第五节维生素E的分析

AnalysisofvitaminE苯并二氢吡喃醇〔一〕、结构一、结构与性质名称R1R2生物活性α-生育酚β-生育酚γ-生育酚δ-生育酚CH3CH3HHCH3HCH3H1.00.50.20.1√1OCH3R2HORCH3CH3CH3CH3CH3维生素EOCH3R2OR1COCH3CH3CH3CH3CH3CH3母核：苯并二氢吡喃醇衍生物苯环上有一乙酰化的酚羟基名称：合成型dl—α—生育酚醋酸酯√天然型d—α—生育酚醋酸酯√侧链：脂肪烷烃〔二〕、性质1、溶解性—脂溶性2、UV—芳环3、水解性—乙酰化的酚羟基H+orOH-△VitE生育酚[O]醌型化合物杂质，需检查二、鉴别试验1、硝酸反响(2005)橙红色75℃15’生育红生育酚¾¾®¾¾¾¾®¾]O[HNO3VitE2.三氯化铁－联吡啶反响生育醌+Fe2+Fe3+联吡啶血红色生育酚（乙醚层）¾¾®¾KOHVitE3.UV法溶剂：无水乙醇浓度：0.01%

λmax

=284nm

λmin

=254nm4.TLC法薄层板硅胶G展开剂环己烷－乙醚〔4：1〕显色剂硫酸〔105℃，5min〕VitERfα-生育酚Rfα-生育醌Rf小结：VitE的鉴别试验〔一〕硝酸反响

〔二〕三氯化铁反响〔三〕UV〔四〕TLC75℃15’生育红生育酚¾¾®¾¾¾¾®¾]O[HNO3VitE联吡啶血红色生育醌+Fe2+Fe3+生育酚KOHVitE酸度游离生育酚三、杂质检查1、酸度---游离醋酸以NaOH滴定液〔〕体积控制；酚酞指示剂；样品不得超过。2、游离生育酚的检查生育酚

+2Ce4+

→2Ce3++对－生育醌原理：硫酸铈滴定液(0.01mol/L)≤1.0ml指示剂：二苯胺（亮黄→灰紫）反应摩尔比1:2例：取本品0.10g,加无水乙醇5ml溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液(0.01mol/L)滴定，消耗硫酸铈液不得过，求限量？四、含量测定〔Assay〕〔一〕GCChP(2005)(法定方法)1、特点选择性好灵敏度高速度快别离效能好n≥500R≥2载气：N2固定相：硅酮（OV—17）担体：硅藻土或高分子多孔小球柱温：265℃检测器：氢火焰离子化检测器（FID）内标物：正三十二烷2、色谱条件3、方法--内标法内标物是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近能与各组分完全分离与被测组分的量接近内标法供试液：样品+内标对照液：对照品+内标校正因子：〔二〕ＨＰＬＣｄｌ－生育酚外标法此外，还有比色法、铈量法、荧光法鉴别试验：硝酸反响、三氯化铁－联吡啶、UV法、TLC法杂质检查：酸度、游离生育酚含量测定：GC法、HPLC法小结：VitE的分析检查维生素E中的游离酚时，采用方法应为

A、对照法

B、灵敏度法

C、紫外分光法

D、滴定法

E、旋光法中国药典采用气相色谱法测定维生素E含量，内标物质为

A、正二十二烷

B、正二十六烷

C、正三十烷

D、正三十二烷

E、正三十六烷用气相色谱法测定维生素E的含量，中国药典〔2005年版〕规定采用的检测器为A.紫外检测定器B.荧光检测定器C.热导检测器D.氢火焰离子化检测器维生素E的鉴别试验有A、硫色素反响B、硝酸氧化呈色反响C、硫酸-乙醇呈色反响D、碱性水解后加三氯化铁乙醇液与2,2-联吡啶乙醇液呈色反响E、Marquis反响维生素D是一类抗佝偻病维生素的总称。目前的维生素D类物质至少有十种之多，它们都是甾醇的衍生物。第四节维生素D的分析

维生素D2、D3原料药维生素D2胶丸和注射剂维生素D3注射剂药典收录情况一、结构与性质VD2—骨化醇或麦角骨化醇VD3－胆骨化醇比VD2少一个双键，C24上少一个CH31、溶解性－脂溶性2、开环的甾体－具有甾体的显色反响3、手性C原子－具有旋光性VD2：6个手性碳，VD3：5个手性碳

4、多烯－不稳定性具有紫外吸收二、鉴别试验

(IdentifactionTests)(一)显色反响醋酐-浓硫酸反响2.三氯化锑反响3.其它D2：黄→红→紫→绿D3：黄→红→紫→蓝绿→绿橙红色～粉红色D+三氯化铁D+二氯丙醇和乙酰氯橙黄色绿色(二)比旋度测定本卷须知：应于容器开启30分钟内取样在溶液配制后30分钟内测定(三)区分反响S+85%硫酸→D2显红色，λmax=570nmD3显黄色，λmax=495nm(四)其他方法TLC、HPLC、制备衍生物测熔点三、杂质检查(一)麦角甾醇的检查:

样品溶液加洋地黄皂苷溶液，混合，放置18h不得发生混浊或沉淀。(二)前维生素D的光照产物四、含量测定方法〔Assay〕Ch.P(2005版)采用正相高效液相色谱法测定维生素D的含量，定量方法为内标法，内标物为邻苯二甲酸二甲酯，该法分为三个方法。固定相：硅胶流动相：正己烷－正戊醇〔997：3〕第一法：用于无VitA醇及其它杂质干扰的情况第二法：用于有杂质干扰的情况皂化提取→净化处理→测定第三法：用于经第二法处理后仍有杂质干扰的情况供试品→按第二法净化处理→水浴加热用碘量法测维生素C含量时，加新煮沸放冷的蒸馏水目的是：〔〕A、使维生素C溶解B、除去水中微生物的影响C、使终点敏锐D、除去水中二氧化碳的影响E、消除水中溶解氧的影响维生素C能与硝酸银试液反响生成去氢抗坏血酸和金属银黑色沉淀，是因为分子中含有〔〕A、环已烯基B、伯醇基C、仲醇基D、二烯醇基E、环氧基维生素C一般表现为一元酸，是由于分子中〔〕A、C2上的羟基B、C3上的羟基C、C6上的羟基D、二烯醇基E、环氧基中国药典测定维生素E含量的方法为A、气相色谱法B、高效液相色谱法C、碘量法D、荧光分光光度法E、紫外分光光度法以下药物的碱性溶液，参加铁氰化钾后，再加正丁醇，显蓝色荧光的是〔〕A、维生素AB、维生素B1C、维生素CD、维生素DE、维生素E－二氯靛酚法测定维生素C含量，终点时溶液〔〕A、由红色→无色B、由蓝色→无色C、由无色→红色D、由无色→蓝色E、由红色→蓝色需检查特殊杂质游离生育酚的药物是A、维生素AB、维生素B1C、维生素CD、维生素EE、维生素D紫外法测定维生素A含量，测