综述资料-人类 BCR-ABL融合基因P210 RNA扩增检测试剂盒(数字 PCR 法)

PAGEPAGE11人类BCR/ABL融合基因P210RNA扩增检测试剂盒（数字PCR法）综述资料（一）章节目录目录（一）章节目录 1（二）概述 2命名 2分类 2（三）产品描述 2产品综述 2产品包装描述 24产品研发历史 24与同类和/或前代产品的比较 25（四）预期用途 27预期用途 27预期使用环境 28（五）申报产品上市历史 28上市情况 28不良事件和召回 28销售、事故及召回率 28（六）其他需说明的内容 28（二）概述1.BCR/ABL(P210)融合基因RNA（字PCR法）依据国家市场监督管理总局令 第48号《体外诊断试剂注册与备案管理法》：PCRYYT1182-2010核酸扩增检测用试剂（盒）相关要求：1.1命名×××核酸（DNA或RNA）扩增试剂（盒）（方法学）1.2分类可按如下方式分类：a）PCR（盒RT-PCR（盒）、PCR（盒）、PCR-电泳法检测试剂（盒）等。b）根据对试验结果的判定可分为：定量和定性。20132.分类编号；2013分类编码：6840-IVD128管理类别：Ⅲ产品分类：Ⅲ-3与人类基因检测相关的试剂产品分类名称：BCR/ABL融合基因检测试剂BCR/ABL病的分型及指导治疗。3.描述申报产品预期用途。患者（临床新发患者或治疗后患者）BCR/ABLP210。4.其他经批准上市产品的关系或历次的提交信息等。BCR/ABL（荧光原位杂交法）荧光PCR），本产品方法学为数字PCR，发产品，且为首次申报。（三）产品描述1.产品综述（1）描述产品的预期用途（定性/定量/半定量、样本类型、目标物），与（物的详细介绍及与临床适应症的关系），相关的临床或实验室诊断方法。产品的预期用途（定性/定量/半定量、样本类型、目标物）本产品适用于定性检测融合基因BCR/ABL亚型P210，检测样本为经临床常规检查疑似或已诊断患有白血病患者（临床新发患者或治疗后患者）外周血。与预期用途相关的临床适应症背景情况（如临床适应症的发生率、易感人群、目标物的详细介绍及与临床适应症的关系）白血病是我国十大高发恶性肿瘤之一，近年的临床研究表明，大部分白血病下会形成相关的融合基因，是白血病和淋巴瘤临床诊断的重要指标之一。慢性粒细胞性白血病（chronicmyelogenousleukemia，CML）是一种发生在早期多能造血于细胞上的恶性骨髓增生性疾病。发病率约为0.36/10万，中位生存期仅3-4年，是人类发现的第一个与基因异常相关的血液肿瘤。1879·弗莱明（WaltherFlemming，1843—1905年染色体的发现揭开了科学家在生命探索中的新的篇章。1960C.（PeterC.Nowell1928—（FoxCancerCenter）的大卫·亨格福德（DavidHungerford，1927—1993）22号染色体比正常人的要短一小段。显微镜可以观察到慢性粒细胞白血病患者的 22显微镜可以观察到慢性粒细胞白血病患者的 22号染色体比正常人的要短一小段，而9号染色体要长一小段。明这些慢性粒细胞白血病肿瘤细胞确实是从发生染色体变异的单个细胞生长而12年中，一个问题一直困扰着科学家：为何费城染色体会短小？那缺失的一小段染色体去了哪里？染色体缺失的意义何在？1973年，芝加哥大学的珍妮特·戴维森·罗利（JanetDavisonRowley，1925—2013年）用优化的染色法研究慢性粒细胞白血病患者的染色体时发现，原来229号染色体上。被人们戏称为“费城掉了的东西在芝加哥找到了”。821号染色体的易位，在早幼粒细胞白血病1517199070多种染色体易位。1985年，科学家通过进一步研究发现，费城染色体形成时，原来9号和229ABL22BCRBCR-ABL“融合基因”。99ABL22BCR基因处断裂，断裂片段易位后，22BCR-ABL融合基因。我们知道，基因是一段DNA序列，可以转录成mRNA，细胞根据mRNA210kD的蛋白质这“活跃”导致慢性粒细胞白血病的发生。CML分子生物学及相关白血病：c-abl300kb12c-abl12lalb2mRNA，分别6kb7kbmRNA2P1P2mRNA分别编码各含有1122和1142个氨基酸的蛋白质在所编码的蛋白中有几个区域各具有不同的功，其中一个区域即肌动蛋白结合区，含有蛋白激酶C（PKC）磷酸化位点，人类c-abl蛋白就属于PKC家族，分子量为145kD，即

与其他酪氨酸激酶一样，c-abl蛋白可能与细胞的生长分化过程有关，具有调节生长因子受体（如集落刺激因子受体血小板源性生长因子受体、上皮生长因子受体等）表达的作用。bcr130kb25P210bcr/abl2e1e2，bcr基因可在多2bcrmRNA4.5kbmRNA6.7kbmRNA160kDP160bcr，含有几个不同区域。基11个蛋白区域，具有丝苏（ser/thr）bcr/abl基因产物的激活中起到很大的作用。其它的外显子（3-10）CDC42鸟DBLP160bcrCGTP酶激活蛋白（P21）bcr原癌基因可能与肿瘤发生有关。c-ABLc-ABL基因(300kb)(145kb蛋白)9q134(58 91011 1222q12 3 456789 1011121314 1516171819202122232425c-ABL和BCL基因结构示意图c-ABL基因(约300kb)(145kb蛋白)1 2 34c-ABL基因(约300kb)(145kb蛋白)1 2 345 678 91011 9qBCR基因(约130kb)12 3 456789 1011121314 151617181920 212223242522qm-BCRM-BCR为主要断裂位u-BCR点M-BCRbcr基因的内含子内，既在外显和b3（e14）b4（e15）bcr部分abla2b2a2b3a22个基因主要区别是长度75bp258.5kbb2a2b3a2bcr/ablA5´bcr和3´l0b2a2bcr902b3a2927个氨基酸，abl1096mRNA中，bcrabla2bcr/ablcablmRNA的产生由bcr（5.8kb基因片段）90%CML1/3BCR基因(130kb)22q12 3 456789 1011121314 1516171819202122232425形成BCR-ABLe13a2融合基因形成BCR-ABLe14a2融合基因12 3 456789 1011121314 BCR基因(130kb)22q12 3 456789 1011121314 1516171819202122232425形成BCR-ABLe13a2融合基因形成BCR-ABLe14a2融合基因12 3 456789 1011121314 345678 91011 12c-ABLc-ABL基因(300kb)(145kb蛋白)9q1 2 345678 91011 12112 3 456789 10111213 345678 91011 12转录剪接8.5kbbcr/abl融合mRNA转录剪接8.5kbbcr/abl融合mRNA210kD蛋白210kD蛋白形成过程示意图m-BCRela2mRNAP1902/3的Ph+B淋巴细胞白血病（Ph-positiveB-cellacutelymphoblasticleukemia，Ph+B-ALL）3%CML患者；μ-BCR区，可以转录为e19a2型的mRNA，编码P230融合蛋白，主要见于慢性中性粒细胞白血病（Chronicneutrophilicleukemia，CNL）患者。据：《BCR-ABL融合基因核酸检测试剂的研发及临床应用》，已报道的BCR-ABL融合形式列表如下：融合形式BCR断裂点ABL断裂点GenbankNOe13a2e13和e14之间a2和a3之间AJ131467.1e14a2e14和e15之间a2和a3之间AJ131466.1e1a2e1和e2之间a2和a3之间AF113911.1e19a2e19和e20之间a2和a3之间AM491363.1e18a2e18和e19之间a2和a3之间EU394716.1e8a2e8和e9之间a2和a3之间AB069693.1e6a2e6和e7之间a2和a3之间AM491362.1e15a2e15和e16之间a2和a3之间AF321981.1e13a3e13和e14之间a3和a4之间AM491359.1e14a3e14和e15之间a3和a4之间AM491360.1e1a3e1和e2之间a3和a4之间S72479.1e6a3e6和e7之间a3和a4之间无e18a3E1和e19之间a3和a4之间AF487522.1e14a4e14和e15之间a4和a5之间DQ898315.1e13a4e13和e14之间a4和a5之间DQ898314.1e1a4e1和e2之间a4和a5之间DQ898313.1e14a5e14和e15之间a5和a6之间DQ912590.1e13a5e13和e14之间a5和a6之间DQ912589.1e1a5e1和e2之间a5和a6之间DQ912588.1e19a3e19和e20之a3和a4之间AZ048578.1CML CML 的药物治疗及疗效监测CML20%，目前的治疗方法主要以干扰素和骨髓移植CML的发病P210bcr/ablCML及其治疗具有重要的理论意义和临P210bcr/ablCML的特征性蛋白，通过干扰造血细胞内信号转导bcr/ablP210bcr/ablP210bcr/ablPTKP210bcr/abl如介导CMLP210bcr/abl融合蛋白的形成机制及作用的研究进展》CMLP210bcr/ablPTK抑制P210bcr/abl、P185bcr/abl、v-ablc-abl的酪氨酸激酶活性及其它酪氨酸和丝/苏氨酸蛋白激酶XuJHP210bcr/ablPTKRasK562细P210bcr/abl特异靶点的药物提供新的思路。P210P210bcr/ablCML药物提供理论基础目前，世界各国科学家正试图寻找针对P210bcr/abl的其它作用靶点。可以预见，CML将为期不远。CML发病机制基础上，瑞士汽巴嘉基（Ciba-Geigy）制药公司的研究员尼古拉斯（NicholasB.（OregonHealth&Science）的布莱恩·J.德鲁克尔（BrianJ.Druke）等人合作研发抗肿瘤药物。他们通过高通量筛选技术，找到了2-苯胺基嘧啶（2-phenylaminopyrimidine）。BCR-ABL2-苯胺（格列卫）。BCR-ABL+ATP或底物竞争位于激P210BCL-ABLP185BCL-ABL，V-ABL，C-ABL，以及血小板衍化生长因子(PDGF)，干细胞因子(C-Kit)受体的酪氨酸激酶的活性。BCR-ABLBCR-ABLATPATP中转移到蛋白质上，引起细胞的不受抑制生长，最终导致慢性粒细胞白血病的发生。伊马替尼类比BCR-ABLATPBCR-ABL的活性。了它的高度特异性。试验表明格列卫的抑制活性很强，抑制K562CMLIC500.05～0.3μM。从而构成了该药临床上高效、安全的药理基础。2001年，美国食品药品监督管理局（FDA）批准了伊马替尼作为治疗慢性粒细胞白血病的一线用药，其商品名就是格列卫。20015FDA仅用2个半月的时间就加速批准了伊马替尼（其商品名就是格列卫）(CML)；格列卫自上市之日起，一直位于畅50%90%。格列卫BCR-ABL靶点的靶向药，用于治疗融合基因所引起的癌症，这CML患者的治疗从传统的姑息性治疗、化疗发展到使用特异的酪氨酸激酶抑制剂kinaseinhibitors，TKI）进行分子靶向治疗。2003年3月，FDA批准甲磺酸伊马替尼用于CML的一线治疗；2003年5月，FDA批准甲磺酸伊马替尼治疗Ph染色体阳性的儿童CML患者；2006FDAPh染色体阳性的急性淋巴细胞白血病(ALL)Ph染色体阳性的一线治疗方案；2011年，获得美国和欧盟批准其治疗急性淋巴细胞白血病儿科患者。LI临床疗效有很好的相关性，BCR-ABL美国国立综合癌症网络（NCCN）发布的《CML临床实践指南》（2012版）明P210标，并提出了更早的治疗方案决策时间点（3），IM3BCR-ABL/ABL≤10%TKIIM。据《成人慢性粒细胞白血病诊疗规范（2018）》：以伊马替尼为代表的酪氨酸激酶抑制剂（TKI）CML10TKICML2（TFR，treatmentfreeremission曾经是CMLTKICML分子学缓解的评估标准同时《成人慢性粒细胞白血病诊疗规范（2018）》指出，治疗期间应TKICML（EMR）TKIBCR-ABLBCR-ABL1BCR-ABLISBCR-ABL（P210）在检测体系稳定后尽早获得有效的转换系数（CF）BCR-ABLIS，并通过定CFP210BCR-ABLBCR-ABLIS<10%CML国内文献《BCR-ABLBCR-ABL-p210BCR-ABLBCR-ABLBCR-ABLCML。另外，研究结果显示，CML速期、急变期的BCR-ABL96.8%、25.0%、85.7%、100.0%。结果提示，不同病期的CML，CMLBCR-ABL，CMLBCR-ABLCMLCML综上所述，BCR-ABLP210CML为CMLBCR-ABLP210CML指导临床治疗有重要价值。相关的临床或实验室诊断方法。BCR/ABL（CML）种方法：（1）形态学检查，由于白血病细胞的高度异质性和多态性，重复性差，易受主观因素的影响，其诊断一致率约60%-80%。K562髓系白血病细胞系的代表性核型。核型接近三倍体70，XXX，-13，-17，+7，+9（p11），+小中着丝粒染色体，del（X）（p21），del（3）（p11），del（9）（pl1），del（9）（pl），t（15；18）（q21；q23），r（22）。特征标记染色体由箭头标识。请注意，r（22）22号染色体，该染色体构成费城染色体，该染色体是该系起源的慢性髓系白血病细胞的标记。免疫学检测方法，主要有两种：细胞涂片法和流式细胞术（FCM），细胞涂片法所需设备简单，可在显微镜下清楚地判断细胞抗原和抗体结合的部10-2，目前主要FCM2FCMRHG构复杂或细微的改变难以准确识别。CML染色体RHG显带荧光原位杂交（FISH），FISH法。但是，常用的双色单融合探针检测bcr/ablbcrabl4%-10%的假阳性率。过高的假用荧光原位杂交对基因融合进行鉴定，用非放射性荧光物质作成的探针，与染色体上特定的DNA序列相结合，显示出问题染色体的位置。图中正常染色体为蓝色，有绿色和红色荧光标记的染色体为问题染色体。PCRRT-PCRbcr/ablMrnaRNA等优点。但由于引物错配和非特异性退火发生，容易产生非特异性结果PCR（gPCR），PCR光信号被淬灭基团吸收，PCR扩增过程中，Tag5'～3'外切酶活性将探针酶Ct值（即每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数）CtCtCtPCR.Ct值。定量的准确度不够，且灵敏度比较差，目前该方法的灵敏度最好的1%，无法满足某些高灵敏度的检测需求。临床治愈"4RT-PCRbcr/abl转录RT-PCR检测技术限制（1%），即使无法检测出bcr/abl转录本的患者仍可能残留少量白血病细胞，这些残留白血病细胞仍存在复发的可能。因此需要一种检测限更低的技术，将患者的复发风险降到更低。（2）描述产品所采用的技术原理，组成（试剂、项目的质控和校准），主要原材料、关键反应成分的来源及制备方法，主要生产工艺过程，校准品、质控品的制备方法及溯源或定值情况（如适用），使用方法和检验步骤。12PAGEPAGE28（（如化学发光法、比浊法），测量方法（如终点/速率法、定性/定量），法，数据获取和解读方式，分析前处理步骤等。产品技术原理本试剂盒利用微滴式数字PCR技术结合Taqman探针技术，对融合基因BCR-ABL的亚型P210进行定性检测。通过数字PCR芯片，将样本进行微滴化处理，靶标核酸BCR-ABLP210和背景核酸ABL随机分布于生成的数万个微滴中，再进行PCR扩增反应，利用微滴分析仪读取样品中每个微滴的荧光信号，（内参基因个反应中靶标基因P210的拷贝数，从而实现对样本中融合基因BCR-ABL的亚型P210的定性检测。原理示意如下：数据获取和解读方式PCRDNA分散到数万个微滴中，使每个微滴中包含或者不包1个或多个拷贝的目标分子(DNA模板2DPCR光信号并进行统计学的分析。100DNA100个微滴里，理想情况下，我们希100DNA100A图所示，但是实际情况100DNA100B图所示。100100100100100100个分子100个孔370个分子391个分子132个分子实际情况下的随机分布（一种可能的情况）DNADNA过程如下：①定义：基因拷贝数：c（copy），一个拷贝代表一个独立的目的DNA片段。生成微滴数：d（droplets）。定义这样一个事件X∶对于某指定微滴，某一个目的DNAp=1/d。②N次Xk个目的DNA片段的概率是∶P(xk)Ckpkp)NK (1)NN=cccX事件。③泊松分布：当二项分布的N很大而p很小时，泊松分布可作为二项分布的近似（n→∞）：P(xk)kek!

...…...…(2)其中λ为Np=c/d，c/d即每个微滴中的平均拷贝数。所以要使用泊松分布来计算，我们必须满足两个条件∶a．p=1/d要小，即是说划分要够细，即微滴数（d）要够多，越多则计算越准确。b．N=cc太少我们就要把计算方法还原到二项分布（见⑤）。④在实验过程中，我们可测量的就是阳性率q(一次实验中阳性液滴占的比例)。则阴性率为1-q，即没有任何分子进入的微滴的比率，代入（2）式∶1-q=P（x=0）=e-λ，λ=c/d。则λ=c/d=-In（1-q） （3）而每个微滴的体积是一定的（假定为1nl），则我们可以推断出目的基因的拷贝数为1000*[-In（1-q）]copies/ul.⑤当c很小时，使用公式（1）计算：1-q=P(x=0)=(1-p)cp=1/d1-q=1-c/d→c/d=q，此时如用（3）式计算，因为阳性率同样极低（<c/d），c/d=-In(1-q)>c/d=-1-q)=q这样我们可以看到，当c/d极小时，（3）式同样可以用于近似计算c/d。分析前处理步骤。融合基因的断点一般都是在内含子里面，内含子一般又都很长，如果要检测DNA，RNARNARNAmRNA综合考虑，本公司产品在分析前，先进行样本RNARNAcDNA，PCR记物、固相载体、引物-探针、目标物分离（如核酸提取）组分等的来源及制备方法。试剂盒组分名称组成BCR-AB

主要成分 制备方法将转染有包含RNasin表达基因的BL21(DE3)大肠

L反转录反应液

RNasin、酶稀释液

LBRNaseA亲和层析进行纯化制得。pET28a上，产生pET28a-MMLVRT3’端6×HisTAA终止密码子。BL21感受态细胞进行表达C试剂

逆转录酶（c-MMLV酶）纯化标签的MMLV逆转录酶。取发酵菌体以Ni碎仪破碎，低温高速离心收集破碎上清液，4℃环Ni亲和层析纯化柱进行纯化收集，得到MMLV逆转录酶突变体，配制于存储缓冲液中，低温保存。剂

引物、dNTPsBCR-ABLPCR应混合液

逆转录引物5’-NNNNNN-3’热启动Taq酶

同扩增试剂探针GenBankTaqDNA聚合酶基因序列D32013.1，按照大肠杆菌偏好密码子，人工合成TaqDNATaqDNA聚合酶基因片段构建到原核表达载体TaqDNABCR-ABL探针

BCR-ABL正向引物5’-TCCACAGCATTCCGCTGAC-3’BCR-ABL反向引物5’-CACTCAGACCCTGAGGCTCAAA-3’BCR-ABL探针5’-X-GCCCTTCAGCGGCCAGTAGCATCT-Y-3’ABL正向引物5’-GACGTCTGGGCATTTGGAGTA-3’ABL反向引物5’-TCATACACCTGGGACAGGTCAA-3’ABL探针5’-X-ATGGCATGTCCCCTTACCCGGGA-Y-3’

TaqDNATaqDNA聚合TaqDNA聚合酶进行特异性结TaqDNA聚合酶的配基修饰，即为热启TaqDNA聚合酶。使用****核酸分析软件分别对已知的融合基因基因的核苷酸序列进行同源性比较，在找到同源区段的基础上，进一步使用基因的序列，而且与其他病原体酸内切酶的酶切位点，所以避免了融合基因检测的假阴性和假阳性，提高了DNA合成装置合成FPLC）纯化后进行氨解处理。同5’端标记作为荧光发生基团（报告基团）的amidite3’端标记借助活性连接臂偶联上BHQ1FPLC层析电泳法和分光光度法物理鉴定所合成的引物和探针。用超纯的去离子水经DEPC处理后，再经过高压灭水

焦碳酸二乙、菌而来。经检测无核酸酶和蛋白酶活性，可用于水 cDNA合成、体外转录、RNA提取等对核酸酶感的分子生物学试验。剂

BCR-ABL阳性质控品1BCR-ABL阳性质控品2BCR-ABL

K562cells(expressingtheBCR-ABL1translocatione14a2,alsoknownasb3a2)andHL60cells(BCR-ABL1negative)K562cells(expressingtheBCR-ABL1translocatione14a2,alsoknownasb3a2)andHL60cells(BCR-ABL1negative)HL60cells(BCR-ABL1negative)

K562cellsandHL60cells按一定比例混合制得K562cellsandHL60cells按一定比例混合制得HL60cells传代培养获得控品控品生产工艺过程：原辅料（反转录试原辅料（反转录试剂、扩增反应液、去核酸酶水）（扩增引物探针）原辅料（阴阳对照试剂）配制配制配制预冷检验检验分装分装检验检验包装说明书万级检验入库校准品、质控品的制备方法及溯源或定值情况（如适用），检验步骤。本产品包含阴性质控品、强阳性质控品和弱阳性质控品。阴性质控品为只有背景内参基因ABL的HL60细胞系。强阳性质控品为靶标基因P210拷贝数为10%K562HL60弱阳性质控品靶标基因P210拷贝数为0.1%K562HL60细胞系。物质物质校准赋值程序实施WHONIBSC09/138计量学溯源IVD制造商选定参考测量程序：Bio-RadPCR剂盒（QXDxBCR-ABL%ISKit）及配套检测仪器制造商工作校准品IVD制造商制造商常设测量程序本公司产品多次测量制造商产品校准品终端用户常规测量程序临床样本临床检测结果终端用户制备方法：K562和HL60细胞传代培养获得。外购，使用时稀释分装。溯源或定值情况：0.1%1%WHO09/138（InternationalScalepercentratio(%IS)）。检验步骤：作为正常样本检验。（3）描述产品主要研究结果的总结和评价,包括分析性能评估、稳定性以及临床评价（如适用）等。本公司建立了关于人类BCR/ABL(P210)融合基因检测试剂盒（数字PCR法）BCR/ABL(P210)融合基因检测试剂盒（数字PCR法）。参考《体外诊断试剂分析性能评估系列指导原则(征求意见稿)》、GB/T37871-2019YY/T1182-2010核酸扩增检测用试剂（盒）、定量检测试剂性能评估注册技术审查指导原则（征求意见稿析性能达到如下要求：外观签字迹清楚；中文包装标签应清晰、准确、牢固。试剂溶液应无色清亮、无颗粒、无杂质。净含量液体试剂净含量不低于标示值。标准品线性（3.3.13.3.2）3.3.1YY/T1182-2020（盒4区间上限和下限，线性相关系数|r|≥0.980。3.3.2GB/T37871-2019核酸检测试剂盒质量评价技术规范标准品线性将标准物质按一定比例（510）53XYr，|r|≥0.980。样本线性5（盒1（%IS）的对数均值和稀释倍数的对数值，以浓度值为Y，X，r，|r|≥0.980。—YY/T1182-2020核酸扩增检测用试剂(盒)准确度（3.5.13.5.2）YY/T1182-2020核酸扩增检测用试剂(盒)准确度要求用试剂（盒）对参考物质或有证参考物质（CRM），GB/T21415—2008规定的溯源顺序进行测试，每个参考品重复测定（n≥2），取测试结果（M）；按下式计算绝对偏差（B），绝对偏差不超过±0.5i iB=M-Ti i式中：B——绝对偏差;iM——测试结果，取对数;iT——参考物质标示值，取对数;i=1，2，…，n。1家参考品相关要求。或使用企业参考品作为样本进行检测，每个样本测定1次或多次;按照上式计算绝对偏差（B），绝对偏差不超过±0.5iGB/T37871-2019核酸检测试剂盒质量评价技术规范准确度要求使用标准物质或稀释至试剂盒线性范围内的标准物质评价试剂盒的准确度，按照试剂盒说明书操作，重复测定6（C）。以征试剂盒的准确度，根据下式计算定量偏差（ΔC）。定量偏差应该在标准物质值的不确定度范围内。式中：

ΔC=C-CΔC——定量偏差，ng/μL或copies/μL或IU/mL；C——测量结果平均值，ng/μLcopies/μLIU/mL；C——标准物质的标准值，ng/μLcopies/μLIU/mL如果测定稀释后的标准物质，应把稀释过程引入的不确定度与标准物质测量不确定度合成，形成稀释后标准物质测量值的不确定度（可由 NIBSC09/138的靶值及CV值计算出标准差，如下图）。批内精密度（3.6.13.6.2）3.6.1YY/T1182-2020检测浓度%IS的变异系数（CV，%）≤5%。当样本浓度较低时，检测浓度对数值的变异系数（CV，%）≤10%。按照试剂（盒）说明书操作，用至少高、低2个浓度水平的样本各重复10（CV，%）≤5%度对数值的变异系数（CV，%）≤10%。备注：高于BCR-ABLNIBSCcode:09/138标准物质要求，如上图。3.6.2GB/T37871-2019核酸检测试剂盒质量评价技术规范重复性要求。10RSD（%）RSD

1 100%n(xn(xx)2ii1n1 xi次测量结果；ix——10次测量结果的平均值。批间精密度210变异系数（CV，%），结果应<10%。备注：无行标、国标规定。检出限（3.8.13.8.2）GB/T37871-2019核酸检测试剂盒质量评价技术规范检出限使用标准物质（NIBSCcode:09/138，AmpouleCode08/194）稀释至试2017。YY/T1182-2020核酸扩增检测用试剂(盒)检出限生产企业应规定并提供试剂（盒）的检出限，试剂（盒）检出限的建立和检测结果应符合国家参考品或企业参考品的要求。备注：未明确是否可以使用国际参考品如WHO、NIBSC……阳性参考品符合率（YY/T1182-2020核酸扩增检测用试剂(盒)）检测40份e13a2或e14a2阳性的企业阳性参考品，符合率应为100%。品组成应包含国内常见基因型别。阴性参考品符合率（YY/T1182-2020检测40份不含被测物的企业阴性参考品，符合率应为100%。结果应为阴性。参考品设置遵循如下原则∶a）包含一定数量的不含被测物的样本;b）测物种属相近、感染部位相同或感染症状相似的其他样本等;c）适用时，包含一定数量不在试剂（盒）宣称检测范围内的基因型别。干扰物质（GB/T37871-2019核酸检测试剂盒质量评价技术规范要求）血红素及其代谢产物如胆色素，包括胆绿素、胆红素、胆素原及胆素，甘37mmol/L，2.2mg/mLEDTA5%（根据产品情况筛查）分析特异性（GB/T37871-2019核酸检测试剂盒质量评价技术规范要求）染症状像是的其他样本，结果应为阴性。非特异性样本信息如下（依据：成人慢性粒细胞白血病诊疗规范（2018年版））：序号样本信息样本数1粒细胞类白血病32真性红细胞增多症13原发性骨髓纤维化及原发性14血小板增多症15慢性中性粒细胞白血病（CNL）16慢性嗜酸性粒细胞白血病17嗜碱性粒细胞白血病18慢性粒单核细胞白血病（CMML）19不典型CML210肝硬化111血吸虫病112黑热病113霍奇金病114肝糖原累积病等引起的脾大115相关急腹症3建议选择高浓度交叉反应物水平进行验证，细菌或者真菌的最低浓度为106CFU/mL；毒的最低浓度为15PFU/mL；人野生型DNA至少包含1000ng/μL野生核酸样本。应提供用——定性检测试剂性能评估注册技术审查指导原则（征求意见稿），酌情加入。经研究，产品稳定性达到如下要求：试剂盒-20℃条件下避光保存，有效期12个月。拆封后未使用完的试剂请立即-20℃条件下避光保存，并在8周内使用完且反复冻融次数不超过8次。临床评价结果如下：三家医院共检测550例受试者样本，按方案剔除标准共剔除样本3例，剔除率为0.55%，最终纳入分析547例，其中男性269例，女性278例，平均年龄39.77±14.18岁。经计算，考核试剂定性检测结果参考范围外标本符合率为97.06%（94.08%,98.56%)，98.68%（96.30%,99.54%)，总符98.18%（95.59%,99.26%)。进行Kappa，Kappak=0.9574（4）描述不同包装规格之间的差异。本次仅申报一个包装规格：48/（5）描述检测系统各个部件之间的关系（品和校准品、软件），标签标识样稿（如适用，图表、图片）。各个部件之间的关系：RNAmRNA→反转录获得cDNA→样品液滴化→PCR测→数据分析质控品对实验过程中可能产生的假阴性进行质量控制，产品无校准品，使用QX200dropletreader标签标识样稿：BCR-ABL反转录反应液BCR-ABL反转录酶BCR-ABL引物、dNTPsLot：Lot：Lot：Exp：Exp：Exp：BCR-ABLBCR-ABLBCR-ABLPCR反应混合液引物和探针去核酸酶水Lot：Lot：Lot：Exp：Exp：Exp：BCR-ABLBCR-ABLBCR-ABL阳性质控品1阳性质控品2阴性质控品Lot：Lot：Lot：Exp：Exp：Exp：（6）描述预期使用场所及人员，使用条件（如温度、湿度）。满足PCR试验要求临床检验室，仅限临床检验室专业人士操作。试验过程可能会产生气溶胶，导致交叉污染，实验室的设计应有防止交叉污染的措施。（7）如适用，描述产品中使用的生物材料或衍生物，包括生物学来源（如人、动物、病原体、重组或发酵产物）和组织来源（如血液、骨骼、心脏）。人源性材料须对有关传染病（HIV、HBV、HCV等）病原体检测予以说明；其他动物源及微生物来源的材料，应当提供相应的文件，说明其在产品运输、使用过程中对使用者和环境是安全的并提供相关的证明文件。该试剂盒整个产品集中于一个包装盒内，不存在对外输出能量的危害；不具有致畸性、致癌性、致过敏性等生物学危害；试剂盒使用的原材料，无放射性污染，不会造成对环境的危害。试剂盒用于体外诊断用，配方中的基因工程产物（RNasin、逆转录酶、Tap）K562KL-60HIV、HCV-IgG、HBV家相关规定处理，其影响环境风险已降到能接受的最小限度。2.产品包装描述有关产品包装的信息，包括包装形状和材料。本产品试剂有聚乙烯塑料瓶和硼硅玻璃瓶封装后装在白卡纸盒内。3.产品研发历史（如有PCRRT-PCRbcr/ablMrnaRNA等优点。但由于引物错配和非特异;PCR（gPCR），PCR射的荧光信号被淬灭基团吸收，PCR扩增过程中，Tag5'～3'外切酶活性将Ct值（即每个反应管内的荧光信号到达设定的阈值时所经历的循环数）与该模板的起始拷贝数的对数存在线性关系，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，其中纵坐标为临床治愈"4RT-PCRbcr/abl转录RT-PCR检测技术限制（1%），即使无法检测出bcr/abl临床治愈"4RT-PCRbcr/abl转录RT-PCR检测技术限制（1%），即使无法检测出bcr/abl转录本的患者仍可能残留少量白血病细胞，这些残留白血病细胞仍PCR答疑：体外诊断试剂临床试验中，能否采用境外已上市同类产品作为对比试剂2019-12-0609:00体外诊断试剂的临床试验一般采用试验用体外诊断试剂与临床参考标准和/或已上市同类产品供科学有效的临床证据。其中，“已上市同类产品”指的是境内批准上市的同类产品。对于目前临床上没有可参照的临床参考标准或现有临床参考标准不能全面评价产品临床性能的情况，临床试验设计时，在确认被测物临床检测意义的前提下，还应依据现有临床实践和理论基础选择适当的实验室方法进行检测性能评价，例如：与临床公认的、标准化的实验室参考方法进行对比试验。如果有境外已批准上市的同类产品，与试验用体外诊断试剂具有相同的预期用途，且该产品经过了充分的性能验证和确认，实验室检测过程中可实现良好的质量控制，并被临床广泛认可能够用于相关标志物检测，则该产品亦可作为实验室检测方法用作对比方法。本公司产品以美国Bio-Rad的BCR-ABL数字PCR法试剂盒（QXDxBCR-ABL%ISKit）为研发参考，选择其作为研发参考的原因基于：国内尚未有同类产品上市，境外已批准上市的同类产品，与试验用体外诊断试剂有：相同的预期用途；相同的检测原理；相同的检测样本一致；相同的被测物（mRNA）。且该产品经过了充分的性能验证和确认，实验室检测过程中可实现良好的质量控制，并被临床广泛认可能够用于相关标志物检测。其产品基本信息如下：ProprietaryName:ClassificationName:ProductCode:DeviceClass:RegulationNumber:MedicalSpecialty:RegisteredEstablishmentName:RegisteredEstablishmentNumber:PremarketSubmissionNumber:Owner/Operator:Owner/OperatorNumber:EstablishmentOperations:4.与同类和/或前代产品的比较

QXDxAutomatedDropletGenerator;QXDxBCR-ABL%ISKit;QXDxDropletReaderBCR/ABL1MONITORINGTESTOYX2866.6060MolecularGeneticsBio-RadLaboratories,Inc.2915274K181661Bio-RadLaboratories,Inc.9929003ContractManufacturer（1）/品与同类和/或前代在技术原理、使用方法、性能指标、预期用途、临床应用的的原因。产品产品项目拟申报试剂：人类BCR/ABL(P210)融合基因RNA扩增检测试剂盒（数字 对照试剂：QXDxBCR-ABL%ISKitPCR法）生产厂家*****医学检验有限公司Bio-RadLaboratories,Inc.注册证号申报中预期用途本产品适用于定性检测融合基因BCR/ABL亚型P210，检测样本为经临床常规检查疑似或已诊断患有白血病患者（临床新发患者或治疗后患者）外周血。……作为白血病分型诊断、疗效评价以及治疗监测的可靠指标。FDA：K181661TheQXDx™BCR-ABL%ISKitisaninvitronucleicacidamplificationtestforthequantitationofBCR-ABL1andABL1transcriptsintotalRNAfromwholebloodofdiagnosedt(9;22)positiveChronicMyeloidLeukemia(CML)patientsexpressingBCR-ABL1fusiontranscriptstypee13a2and/ore14a2.ThetestisintendedtomeasureBCR-ABL1toABL1,expressedasalogmolecularreduction(MRvalue)fromabaselineof100%ontheInternationalScale,int(9;22)positive全血量加样量抗凝剂溯源

PCR法QX200droplet5-10mL25μl外周血EDTAFirstWHOinternationalGeneticReferencePanel(09/138)≤5%-10%（依评价浓度）

CMLpatientsduringmonitoringoftreatmentwithTyrosineKinaseInhibitors(TKIs)。Thetestdoesnotdifferentiatebetweene13a2ore14a2fusiontranscriptsanddoesnotmonitorotherrarefusiontranscriptsresultingfromt(9;22).ThistestisnotintendedforthediagnosisofCML.数字PCR法QXDxDropletReade5-10mL25μl外周血EDTAFirstWHOinternationalGeneticReferencePanel(09/138)LoQ:≤50%MR0.3-2.49:≤10%MR2.5-3.49:≤20%MR3.5-4.0:≤50%%ISBCR-ABLorMR4.7=-lg检测限 0.002%线性 r>0.99

（0.002%）

r>0.99定量限性能指 可报告范标参 准确数

0.002%MR0.3(50%IS)totheLoQMR4.7(0.002%IS).检测40份企业阳性参考品，符合率