粗糙链孢霉的杂交实验-遗传学实验

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实验八粗糙链孢霉的杂交一、实验目的

1、了解顺序四分体的遗传分析方法

2、掌握重组值的计算及着丝粒作图的方法

3、观察由于基因转换引起的异常分离现象二、实验原理

粗糙链孢霉，又称红色面包霉，在分类学上属于真菌中的子囊菌纲、球壳目、脉孢菌属。利用粗糙链孢霉进行遗传学分析有如下优点：①个体小，生长快，容易培养；②有性繁殖可产生大量后代；③无性世代是单倍体，基因型可直接反映在表型上；④一次杂交可达到高等二倍体一次杂交和一次测交的目的粗糙链孢霉的生活史

从交换型子囊数占总子囊数的百分比，可以计算出该基因与着丝点间的交换值：三、实验材料、用具及药品

粗糙链孢霉：野生型（lys+）菌株，赖氨酸缺陷型（lys-）菌株。用具：酒精灯、试管、培养皿、载玻片、镊子、接种针、解剖针、滤纸、显微镜等。药品：75%酒精1、菌种活化

把野生型和缺陷型菌种分别斜面接种到试管培养基上，置于28℃恒温培养箱中培养5-7天，直至菌丝上部有分生孢子产生，长好的菌株在菌丝上部可见红粉状孢子。四、实验步骤2、杂交培养基的配制：将浸软的玉米粒剪碎，每试管2-3粒，加入3毫升2%的琼脂，再放入经多次折叠的滤纸。加上棉塞，消毒即可。3、接种杂交

在无菌条件下，用接种环分别挑取Lys+和Lys-菌株的菌丝或分生孢子，接种于杂交培养基上，然后放在25℃恒温培养箱中培养，约经14天左右，可看到棕黑色的成熟子囊，此时即可在显微镜下观察分析。4、灭活与收集子囊果

在长有棕黑色子囊果的试管中，加75%酒精，静置20分，摇动片刻，将子囊果冲洗下来，倒入平皿中。5、压片与镜检

取一载玻片，用解剖针将子囊果挑出放到载玻片上，加1-2滴水，再盖上另一载玻片，用力压片，使子囊充分压散而末破裂，最后在显微镜下观察、记录各种类型子囊的数目。

粗糙链雹霉lys+与lys-杂交子囊孢子的排列方式图中（1）（2）为非交换型；（3）（5）（6）缺少（4）为交换型子囊作业

观察一定数目的子囊果，记录每个完整子囊的类型，按不同的子囊类型计数填入表中，计算Lys基因与着丝粒间的距离。子囊类型孢子排列方式观察数合计非交换类型（第一次分离裂）1＋＋＋＋――――2－－－－＋＋＋＋

交换类型（第二次分离裂）3＋＋――＋＋――4―

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