培养基的制备

4/4实验二培养基的制备一、目的要求1.掌握一般培养基制备的原则和要求。２.熟悉一般培养基制备的过程。二、实验器材１。药品或试剂：１ｍoｌ/LＮａOH,1mol／LＨCl；蛋白胨0.２、牛肉膏0。６、琼脂，氯化钠1,蒸馏水20０。2。仪器或其他用具:

试管,三角瓶,烧杯，量筒，玻璃棒，培养基分装器,天平，药匙，高压蒸气灭菌锅，pＨ测定仪或pH试纸（pH5.５～９.０)，棉花，滤纸，记号笔,麻绳,纱布等。实验方法：1称量：准确称量所需药品或试剂2溶解：将以上成分加温溶于蒸馏水中3调节PH：用酸度计测定溶液ＰH并用1mｏｌ/LNaOH,1ｍol/LHCl调节ＰH7．４~7.６４过滤：用滤纸过滤后取出５0ML进行封装，每支试管装入5MＬ５加塞：塞好棉塞用纸包好，准备灭菌6灭菌:

培养基的灭菌，高压蒸汽灭菌,一般采用15磅／平方（即1。05kg/ｃｍ2)压力,此时的温度是121．3℃.灭菌20~30分钟后。７无菌检验：将灭菌的培养基放入３7℃的恒温箱中培养24～4８h,以检查灭菌是否彻底.二）普通琼脂培养基1将以上过滤封装后剩余的溶液加琼脂溶解,补足水分2分装于中三角瓶中。3加塞4高压灭菌２0~3０分钟后,制平板。5无菌检验将灭菌的培养基放入３7℃的恒温箱中培养24～48h，以检查灭菌是否彻底。保存备用。思考题1.培养基配好后，为什么必须立即灭菌?如何检查灭菌后的培养基是无菌的？2.在配制培养基的操作过程中应注意些什么问题？3.管口、瓶口为什么要用棉塞?能否用橡皮塞代替？为什么？实验三理化因素对微生物的影响一、目的要求１．掌握对微生物影响的因素2．熟悉温度、紫外线对微生物的影响二、实验器材1。普通肉汤培养基、普通琼脂培养基２．大肠杆菌、金黄色葡萄球菌3.仪器或其他用具：

超净工作台，培养箱、接种环,镊子,酒精灯、吸管、试管，记号笔等。三、方法１。紫外线杀菌试验用接种环沾取大肠杆菌在琼脂平板培养基表面来回密密涂满整个平板。打开平板盖，盖上中空纸片，使其半暴露于紫外线灯下20—30ｃm处，照射３0分钟,取出纸片,盖上盖，置37℃温箱内培养２４h,观察平板表面细菌生长的情况.２.温度试验用接种环沾取大肠杆菌分别接种于４支装有普通肉汤培养基的试管中，1支作为对照,1支不接入任何菌也作为对照，其余3支置于80℃水浴锅中，分别放置５分、10分、2０分钟,取出后，置３７℃恒温培养箱中培养2４小时,观察细菌生长的情况。实验四自然界中微生物的分布一、实验目的1.认识微生物在自然界存在的普遍性2.了解细菌在自然界和人体的分布情况二、实验器材１。普通琼脂培养基,2．培养箱,接种环，镊子，酒精灯、吸管、试管,记号笔等.三、方法1、空气中细菌的检查（采用沉降法)取无菌普通平板１只，置一处,启盖10分，再盖上盖,37℃培养24h，取出观察有无细菌生长。2、咽喉部细菌检查用无菌方法，向普通平板里吹气2—3次，３7℃培养2４h后观察结果。观察有无细菌生长。３、皮肤表面细菌的检查（采用涂抹法）在普通培养基上分区后,直接用手指在无菌平板表面轻轻涂按1处，之后用自来水洗手指在平板表面2处轻轻涂按，37℃培养2４h后,取出观察有无细菌生长.实验五细菌分离技术一、实验目的1。掌握微生物的分离与接种技术2．学会用平板划线法分离微生物二、实验器材样品；MRS分离培养基；乳酸菌,大肠杆菌培养箱,摇床０.9％，接种环，记号笔,酒精灯,试管架，无菌生理盐水等五、实验步骤１。采样:无菌采集样品，要有针对性2。分离:用乳酸菌分离培养基(MRＳ）采用划线法进行3．培养：平板倒置于３７℃培养箱24ｈ～４8h，观察菌落特征4．制备纯培养：将培养后单个菌落钓出，划线与平板上,37℃培养4８小时检查菌落是否单纯，也可用显微镜检查是否是纯的微生物2）释液倾注平皿称取样1。0g，放入盛99mL无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中,振荡使样品均匀分散成为悬液（10-2）。用1mＬ的无菌吸头从中吸取0.５ml样品悬液，注入分装有４。５mｌ无菌水的试管中,吹吸３次，振荡均匀（10－3）。同样方法，配置成稀释度为1０—4，1０－5，１0-6的样品溶液,各样取１mL加在平皿中,倾注培养基．（3)涂布用一支新的无菌吸头，分别由各浓度样品稀释液中各吸取10０ul，对号较均匀地放入已写好稀释度的牛肉蛋白胨培养基平板上，用无菌玻璃涂棒涂匀。每个浓度做２个平板4．制备纯培养：将培养后单个菌落钓出，划线与平板上，37℃培养4８小时检查菌落是否单纯，也可用显微镜检查是否是纯的微生物细菌的生理生化反应一、实验目的1。了解细菌生理生化反应原理２.掌握细菌鉴定中常用的生理生化反应的测定方法二、实验器材３7℃恒温培养箱、接种环、酒精灯、试管架、记号笔等待测菌甲基红试剂、V.P试剂、吲哚试剂.培养基：糖发酵培养基，用于糖类发酵试验葡萄糖蛋白胨水培养基，用于甲基红和V．Ｐ试验蛋白胨水培养基，用于吲哚试验柠檬酸铁铵或醋酸铅的半固体培养基,用于硫化氢试验柠檬酸钠培养基,用于柠檬酸盐利用试验三、实验方法方法（1)编号在各试管上分别标明各种糖名称，所接种的菌名和组号，下同.（2）接种（３)培养将已接种好的培养基置37℃温箱中培养２4h。（4）观察结果2甲基红(Methｙlrｅd）试验(简称MR试验）某些细菌分解葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸再被分解，产生甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的pH降低到４．2以下，这时若加甲基红指示剂呈现红色。因甲基红指示剂变色范围是pＨ４．4（红色）~pＨ6．２（黄色)方法将待检菌分别接种到葡萄糖蛋白胨水培养基中，３７℃培养４8h，加甲基红指示剂数滴，观察结果,呈现红色者为阳性,呈现黄色者为阴性3伏一普二氏试验（V.P．试验某些细菌分解葡萄糖为丙酮酸，丙酮酸再被分解,变为乙酰甲基甲醇;乙酰甲基甲醇,其在碱性条件下氧化成为二乙酰，二乙酰和蛋白胨中精氨酸胍基起作用产生粉红色的化合物，此为VＰ试验4靛基质(吲哚）试验某些细菌能分解蛋白质中的色氨酸，产生靛基质(吲哚）,靛基质与对二甲基氨基苯甲醛结合,形成玫瑰色靛基质(红色化合物)方法:将被检菌接种到胰蛋白胨水培养基中，37℃培养24h～４８h后，沿试管壁滴加数滴吲哚试剂于培养物液面，观察结果结果：出现红色者为阳性出现黄色者为阴性.５。硫化氢试验某些细菌能分解含硫的氨基酸（胱氨酸、半胱氨酸等)，产生硫化氢，硫化氢与培养基中的铅盐或铁盐，形成黑色沉淀硫化铅或硫化铁，为硫化氢试验阳性,可借以鉴别细菌方法将待检菌以接种针穿刺接种