位点特异性重组

位点特异性重组第一页，共三十三页，2022年，8月28日Introduction保守性位点特异性重组（conservativesite-specificrecombination,CSSR）转座重组（transpositionalrecombination）P319第二页，共三十三页，2022年，8月28日P320第三页，共三十三页，2022年，8月28日1.保守性位点特异性重组（CSSR）P320第四页，共三十三页，2022年，8月28日1.保守性位点特异性重组（CSSR）1.1重组位点Duringλintergration,recombinationalwaysoccursatexactlythesamenucleotidesequenceswithinthetworecombinationsites,oneonthephageDNAandtheotheronthebacterialDNA.P321第五页，共三十三页，2022年，8月28日1.保守性位点特异性重组（CSSR）1.1重组位点①重组酶识别序列对称分布②交换区（crossoverregion）重组位点重组位点①①①①②②P321第六页，共三十三页，2022年，8月28日1.保守性位点特异性重组（CSSR）1.2重组结果①DNA片段的插入P321第七页，共三十三页，2022年，8月28日1.保守性位点特异性重组（CSSR）1.2重组结果②DNA片段的缺失P321第八页，共三十三页，2022年，8月28日1.保守性位点特异性重组（CSSR）1.2重组结果③DNA片段的倒位P321第九页，共三十三页，2022年，8月28日1.保守性位点特异性重组（CSSR）1.2重组结果①DNA片段的插入②DNA片段的缺失③DNA片段的倒位第十页，共三十三页，2022年，8月28日1.保守性位点特异性重组（CSSR）1.3重组酶丝氨酸重组酶酪氨酸重组酶P322第十一页，共三十三页，2022年，8月28日1.保守性位点特异性重组（CSSR）丝氨酸重组酶结构LiW,etal.Science.2005,309(5738):1210-1215.R2R1R3R4第十二页，共三十三页，2022年，8月28日丝氨酸重组酶功能①重组酶丝氨酸残基的-OH攻击交换区特定磷酸二酯键，重组酶通过磷酸二酯键与DNA断裂端相连②另外一个断裂DNA的-OH攻击重组酶与DNA磷酸二酯键，重新形成DNA的磷酸二酯键，丝氨酸重组酶释放DNAP322第十三页，共三十三页，2022年，8月28日丝氨酸重组酶特异位点重组功能①丝氨酸重组酶的4个亚基分别切断2个DNA分子的4条链，并且重组酶通过磷酸二酯键与DNA断裂端相连P322第十四页，共三十三页，2022年，8月28日丝氨酸重组酶特异位点重组功能②重组酶二聚体亚基旋转进行DNA片段交换P322第十五页，共三十三页，2022年，8月28日丝氨酸重组酶特异位点重组功能②重组酶二聚体亚基旋转进行DNA片段交换R2R1R3R4R2R3R1R4LiW,etal.Science.2005,309(5738):1210-1215.P322第十六页，共三十三页，2022年，8月28日丝氨酸重组酶特异位点重组功能③DNA链上-OH攻击重组酶-DNA磷酸二酯键，重新形成DNA磷酸二酯，释放重组酶，完成重组P322第十七页，共三十三页，2022年，8月28日丝氨酸重组酶特异位点重组功能①丝氨酸重组酶的4个亚基分别切断2个DNA分子的4条链，并且重组酶通过磷酸二酯键与DNA断裂端相连②重组酶二聚体亚基旋转进行DNA片段交换③DNA链上-OH攻击重组酶-DNA磷酸二酯键，重新形成DNA磷酸二酯，释放重组酶，完成重组第十八页，共三十三页，2022年，8月28日总结重组位点重组结果丝氨酸重组酶第十九页，共三十三页，2022年，8月28日2.转座第二十页，共三十三页，2022年，8月28日2.转座2.1转座因子（transposableelement）或转座子（transposon）从DNA上的一个地方移位到另外一个地方的遗传因子。P337第二十一页，共三十三页，2022年，8月28日2.2转座因子的类型

2.2.1DNA转座子

2.2.2LTR(longterminalrepeat)反转录转座子

2.2.3聚腺苷酸(poly-A)反转录转座子P339第二十二页，共三十三页，2022年，8月28日2.2转座因子的类型

2.2.1DNA转座子

自主转座子（autonomoustransposon）

非自主转座子（nonautonomoustransposon）P340第二十三页，共三十三页，2022年，8月28日2.2转座因子的类型

2.2.1.1DNA自主转座子

①反向重复序列（具有转座酶识别序列）②转座酶基因第二十四页，共三十三页，2022年，8月28日2.2转座因子的类型

2.2.1.2DNA非自主转座子

①反向重复序列（具有转座酶识别序列）第二十五页，共三十三页，2022年，8月28日2.2转座因子的类型

2.2.1DNA转座子

自主转座子①反向重复序列（具有转座酶识别序列）②转座酶基因

非自主转座子①反向重复序列（具有转座酶识别序列）P340第二十六页，共三十三页，2022年，8月28日2.2转座因子的类型

2.2.2LTR反转录转座子①两端有LTR(longterminalrepeat)

②LTR中含有反向末端重复序列③转座酶基因和反转录酶基因P340第二十七页，共三十三页，2022年，8月28日2.2转座因子的类型

2.2.3聚腺苷酸(poly-A)反转录转座子①5′-UTR:untranslatedregion②3′-UTR(聚腺苷酸序列的A-T碱基对)③ORF1:编码RNA结合蛋白openreadingframe④ORF2:编码的蛋白质同时具有反转录酶和核酸内切酶功能P341第二十八页，共三十三页，2022年，8月28日2.3DNA转座的剪切-粘贴机制

①转座酶识别并聚集转座子两端的反向重复序列，形成转座体

②将DNA转座子从原始位置切除

③DNA单链交换，即转座子的3′-OH与靶DNA的5′-P相连④DNA聚合酶和DNA连接酶修复缺口P341第二十九页，共三十三页，2022年，8月28日2.3DNA转座的剪切-粘贴机制

①转座酶识别并聚集转座子两端的反向重复序列，形成转座体P341第三十页，共三十三页，2022年，8月28日2.3DNA转座的剪切-粘贴机制

②将DNA转座子从原始位置切除P341第三十一页，共三十三页，2022年，8