• 现行
  • 正在执行有效
  • 2014-12-24 颁布
  • 2015-05-01 实施
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GB 15193.20-2014食品安全国家标准体外哺乳类细胞TK基因突变试验_第1页
GB 15193.20-2014食品安全国家标准体外哺乳类细胞TK基因突变试验_第2页
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文档简介

中华人民共和国国家标准

GB1519320—2014

.

食品安全国家标准

体外哺乳类细胞TK基因突变试验

2014-12-24发布2015-05-01实施

中华人民共和国发布

国家卫生和计划生育委员会

GB1519320—2014

.

前言

本标准代替基因突变试验

GB15193.20—2003《TK》。

本标准与相比主要变化如下

GB15193.20—2003,:

标准名称修改为食品安全国家标准体外哺乳类细胞基因突变试验

———“TK”;

修改了范围

———;

增加了术语和定义

———;

修改了试验目的和原理

———;

增加了代谢活化系统

———;

增加了和选择培养基的配制方法

———THMGTHG;

增加了和选择培养基的配制方法

———CHATCHT;

增加了三氟胸苷的配制方法

———;

增加了磷酸盐缓冲液的配制方法

———;

修改了受试物剂量设定的要求

———;

修改了对照的设定

———;

增加了备选细胞系及相应的试验方法及数据处理

———;

增加了试验报告的要求

———;

增加了试验的解释的要求

———。

Ⅰ

GB1519320—2014

.

食品安全国家标准

体外哺乳类细胞TK基因突变试验

1范围

本标准规定了体外哺乳类胸苷激酶基因突变试验的基本试验方法与技术

(thymidinekinase,TK)

要求

。

本标准适用于评价受试物的致突变作用

。

2术语和定义

21TK基因

.

哺乳类动物的胸苷激酶基因人类的基因定位于号染色体长臂远端小鼠的则定位于

。TK17;

号染色体

11。

22突变频率

.

在某种细胞系中某一特定基因突变型的细胞集落占细胞集落总数的比例单位通常为-6

,()()(10)。

3试验目的和原理

基因突变试验的检测终点是基因的突变基因突变属于常染色体基因突变

TKTK。TK。

基因的产物胸苷激酶在体内催化从脱氧胸苷生成胸苷酸的反应在正常情况

TK(TdR)(TMP)。

下此反应并非生命所必需原因是体内的主要来自于脱氧尿嘧啶核苷酸即由胸苷酸

,,TMP(dUMP),

合成酶催化的甲基化反应生成但如在细胞培养物中加入胸苷类似物如三氟胸苷即

dUMPTMP。(,

则在胸苷激酶的催化下可生成三氟胸苷酸进而掺入造成致死

trifluorothymidine,TFT),TFT,DNA,

性突变故细胞不能存活若基因发生突变导致胸苷激酶缺陷则不能磷酸化亦不能掺入

,。TK,,TFT,

故突变细胞在含有的培养基中能够生长即表现出对的抗性根据突变集落形成数

DNA,TFT,TFT。,

可计算突变频率从而推断受试物的致突变性在基因突变试验结果观察中可发现两类明显不同

,。TK

的集落即大小集落细胞或正常生长缓慢生长集落细胞有研究表明大集落正常

,/(L5178Y)/(TK6),,/

生长集落主要由点突变或较小范围的缺失等引起而小集落缓慢生长集落主要由较大范围的染色体畸

,/

变或由涉及调控细胞增殖的基因缺失引起

,。

4仪器和试剂

41仪器

.

实验室常用设备低温冰箱

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