动物细胞融合与单克隆抗体课件-高二下学期生物人教版选修3

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体核心素养目标1.掌握动物细胞融合技术及应用。(重点)2.简述单克隆抗体的制备。(重、难点)植物体细胞杂交过程：植物细胞A植物细胞B去除细胞壁去除细胞壁原生质体A原生质体B诱导融合杂合的原生质体再生出细胞壁杂种细胞细胞分裂（脱分化）分化发育（再分化）愈伤组织杂种植株原生质体的制备原生质体的融合筛选组织培养如果将奶牛的细胞与植物细胞杂交，得到绿色的小奶牛，那岂不是只要晒晒太阳就可以挤出牛奶吗？

思考1：动植物细胞融合有何区别？基本原理和过程是否相同？（1）区别：植物细胞要去除细胞壁；动物细胞全能性受限制，不能培育出杂种个体。（2）基本原理：细胞膜的流动性A细胞B细胞人工诱导杂交细胞动物细胞融合（也称细胞杂交）：是指

融合形成

的过程。一、动物细胞融合两个或多个细胞一个细胞1.概念杂交细胞:融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞。病毒颗粒黏附细胞表面诱导方法物理法：化学法：生物法：灭活的病毒离心、振动、电激聚乙二醇(PEG)2.诱导方法细胞A细胞B杂种细胞1、为什么可以用灭活的病毒？

灭活是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但是并不破坏这些病原体的抗原结构

灭活的病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能与细胞膜上糖蛋白发生作用、使细胞相互凝集、细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合.

病毒颗粒黏附细胞表面诱导方法物理法：化学法：生物法：灭活的病毒离心、振动、电激聚乙二醇(PEG)2.诱导方法细胞A细胞B杂种细胞1、为什么可以用灭活的病毒？2、病毒不灭活可以吗？不灭活会感染细胞，而不能诱导细胞融合。病毒颗粒黏附细胞表面诱导方法物理法：化学法：生物法：灭活的病毒离心、振动、电激聚乙二醇(PEG)2.诱导方法细胞A细胞B杂种细胞1、为什么可以用灭活的病毒？2、病毒不灭活可以吗？不灭活会感染细胞，而不能诱导细胞融合。原理：细胞膜具有流动性（结构特点），病毒的侵染能力4.融合过程细胞膜融合细胞质融合细胞核融合细胞融合完成的标志:

细胞核融合成一个核

动物细胞融合过程不同DNA的两个细胞

灭活的病毒有丝分裂两个完整的杂交细胞三种AA、AB、BB（A、B)含两种生物的遗传物质融合后细胞的类型（只考虑俩俩融合)A细胞B细胞融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞3.动物细胞融合技术的意义和应用突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交成为可能

成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。①意义：②应用：制备单克隆抗体（最主要的应用）4.比较植物体细胞杂交和动物细胞融合比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合原理融合前处理诱导方法用途细胞膜的流动性、植物细胞的全能性细胞膜的流动性用纤维素酶、果胶酶去壁用胰蛋白酶使细胞分散物理、化学方法物理、化学、灭活的病毒完整植株主要用于制备单克隆抗体小牛试刀1.能使动物细胞融合的特有的诱导因子是（）A.离心B.灭活的病毒C.电刺激D.振动2、融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点？（）A.具有原来两个或多个细胞的遗传信息B.能无限增殖C.可形成新个体D.培养过程会贴壁3、动物细胞融合的目的中最重要的是（）A.克服远源杂交不亲和B.制备单克隆抗体C.培育新物种D.生产杂种细胞BAB二、单克隆抗体

抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。什么是抗体？传统的获取抗体的途径是什么？1.抗体的传统生产方法从血清中分离抗体该法制备抗体的缺点：

产量低、纯度低，且抗体的特异性差、灵敏度低。多种效应B细胞动物体内多种抗体抗原1、抗体是由何种细胞产生的？2、一个B淋巴细胞能产生多种抗体吗？3.要想获得大量的单一抗体怎么做？每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一种特异性抗体思考：效应B细胞

1、单克隆抗体的概念

是用单个B淋巴细胞进行克隆，得到的一种化学性质单一、特异性强的抗体单克隆细胞：单个细胞增殖形成的细胞群思考在体外培养的条件下，一个B淋巴细胞有没有可能无限增殖？什么细胞具有这样的能力？存在问题：B淋巴细胞能产生特异性抗体但不能无限增殖

癌细胞能无限增殖，但不能产生抗体一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖杂种细胞动物细胞培养技术２、实验原理：动物细胞融合单克隆抗体既能产生特异性抗体，又能大量繁殖单克隆抗体制备过程

注射特定的抗原蛋白骨髓瘤细胞的培养融合B淋巴细胞骨髓瘤细胞从小鼠脾脏获取杂交瘤细胞置于选择培养基上培养第一次筛选：选出杂交瘤细胞(多种)杂交瘤细胞特点：既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体。未融合的细胞和融合的具有同种核的细胞全部死亡,只有融合的杂种细胞能够存活多孔细胞培养板克隆化培养和抗体检测用培养液稀释第二次筛选：选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞依赖于抗原抗体的特异性反应注射到小鼠体内体外动物细胞培养单克隆抗体扩大培养从小鼠腹腔水中提取无菌无毒，营养温度pH气体环境，血清抗生素BB

、B瘤、瘤瘤（B、瘤）只考虑两两融合（一选）选择性培养基：选出杂交瘤细胞(多种)获得产生相应抗体的B细胞（二选）克隆化培养和抗体检测：选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞√体外培养小鼠腹腔内培养杂交瘤细胞特点：既能产生特异性抗体，又能大量增殖二、单克隆抗体2、原理：细胞膜具有流动性和细胞增殖1、技术基础：动物细胞融合，动物细胞培养3、优点：纯度高,特异性强,灵敏度高,可大量制备1）、作为诊断试剂：(最广泛的运用）①用于多种人类疾病和动植物病害的诊断及病原鉴定

②利用同位素标记的单克隆抗体、在特定的组织中成像的技术、可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病具有准确、高效、简易、快速特点.4.单抗隆抗体的应用2）、用于治疗疾病和运载药物：主要用于癌症治疗。“生物导弹”=单克隆抗体+放射性同位素或化学药物或细胞毒素单克隆抗体作用：借助其导向作用将药物定向带到靶细胞所在位置

药物作用：治疗作用思考：若不采用动物细胞融合的方法，能否生产出单克隆抗体？试简要说明能。可从经免疫的B淋巴细胞中获取决定所需抗体的基因(目的基因)，导入骨髓瘤细胞，然后培养骨髓瘤细胞并从培养液中提取分泌物，便可得到单克隆抗体。动物细胞融合单克隆抗体制备过程：原理：细胞膜的流动性意义：突破有性杂交局限，使远缘杂交成为可能应用：主要用于制备单克隆抗体制备过程：特点：特异性强,灵敏度高,产量大应用：用作诊断试剂，治疗疾病和运载药物小结：(1)制备肝细胞悬液时先用剪刀剪碎肝组织，再用胃蛋白酶处理。()分析：制备动物细胞悬液用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理。(2)动物细胞培养可用于检测有毒物质，植物茎尖培养可用于植物脱除病毒。()(3)培养保留接触抑制的细胞在培养瓶壁上可形成多层细胞。()分析：细胞出现接触抑制后停止分裂无法形成多层细胞。(4)植物原生质体融合与动物细胞融合原理相同。()(5)灭活的病毒能促进动物细胞融合，但不能促进植物细胞融合。()(6)体细胞杂交技术可用于克隆动物和制备单克隆抗体。()×√×√√×1．在动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A．结果是相同的

B．杂种细胞的形成过程基本相同C．操作过程中酶的作用相同D．诱导融合的手段相同Ｂ练习：2.用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，科学家得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）

A.经过免疫的B淋巴细胞

B.经过免疫的T淋巴细胞

C.不经过免疫的T淋巴细胞

D.不经过免疫的B淋巴细胞A３.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）

①淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞

A．②④B．①③⑤

C．①②③④

D．②③C4、研究单克隆抗体治疗癌症的思路是（）A．利用单克隆抗体特异性地对抗癌细胞B．以单克隆抗体作抗癌药物杀死癌细胞C．抗癌物质在克隆细胞中大量合成D．单克隆抗体携带抗癌药物特异性地与癌细胞结合DB体外培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群注射到小鼠腹腔AC

5.下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案制备单克隆抗体

不能，没有注射抗原，无法获得产生单一抗体的B淋巴细