矿土毒素吸附剂吸附黄曲霉毒素的能力分析,畜牧兽医论文

矿土毒素吸附剂吸附黄曲霉毒素的能力分析,畜牧兽医论文黄曲霉毒素〔AF〕,是由黄曲霉和寄生曲霉等多种真菌产生的次级代谢产物。这2种霉菌仅需一点碳源和氮源就能生长、繁衍及产毒，低温潮湿情况下极易在玉米、花生、棉籽及饼粕等饲料原料中生长产生AF〔刘媛婷，2018;张自强等，2018〕.AF为特剧毒性物质，常见的有AFB1、AFB2、AFG1及AFG2等，华而不实AFB1的毒性最强〔李淑花等，2018〕,为砒霜的68倍之多，是公认的毒性较强的一类生物毒素，试验用的AF标品均为AFB1.全世界每年有大量的粮食和谷物被黄曲霉污染〔韩秀山等，2008〕,饲喂AF污染的谷物或饲料，会引起动物中毒，造成肝、肾、脾、口腔、胃肠道、大脑和神经系统损伤，导致日增质量下降、饲料转化率降低、对疾病的易感性增高及病死率增加等〔李娟娟，2018〕.国家标准规定饲料中AFB1的含量不得超过50g/L,原料污染或饲料运输和保存经过中方式方法的不当极易使AF含量超标，所以AF的去毒工作日益得到关注。当前主要的脱毒方式有物理脱毒、化学脱毒、酶解和吸附剂法〔张建梅等，2018〕;华而不实吸附剂法是当前饲料工业中最为普遍的一种霉菌毒素脱毒方式，具有性质稳定、不易变质、价格较低且能够大规模操作的优点〔刘国栋，2020〕.影响吸附剂吸附能力的条件主要有pH、温度和体系毒素质量浓度等，试验以2种比拟常见的矿土毒素吸附剂为材料，研究在不同pH〔模拟胃液和肠液的pH,分别为3和7〕、不同吸附剂添加量、毒素质量浓度和营养物质添加与否这3种条件下，吸附剂吸附AF能力的大小，为毒素吸附剂在饲料中的应用提供数据支撑。1材料与方式方法1.1试验材料与仪器1.1.1试验材料蒙脱石，浙江产的一种硅铝酸盐型矿土，吸附型产品；凹凸棒土，江苏淮安产的一种含水富镁硅酸盐粘土矿土，吸附型产品；AF标品〔AFB1,北京华安麦特〕;一级蒸馏水；色谱级甲醇。1.1.2仪器高效液相色谱仪〔安捷伦1206〕,离心机，水浴恒温振荡器，超声波清洗机。1.2试验方式方法1.2.1pH对2种矿土吸附AF的影响配制所需的标准溶液：配制10mg/LAFB1的标准溶液，pH=3的KH2〔PO4〕缓冲液，pH=7的K2H〔PO4〕缓冲液。配制吸附剂悬浮液：称取待评估的吸附剂样品0.02000g于50mL的离心管中，分别参加不同量的缓冲液和AFB1标准溶液，分别制得pH=3和pH=7质量浓度为100g/L和4mg/L的AFB1混合溶液。孵育：将对照组、pH=3质量浓度为100g/L和4mg/L及pH=7质量浓度为100g/L和4mg/L的AFB1混合溶液充分混匀后放入37℃恒温振荡器，120r/min孵育60min.吸附率测定：摇匀离心管内的吸附液，汲取1mL溶液至1.5mL的离心管中，5000r/min离心10min.汲取0.5mL上清液于新的离心管中，再参加0.5mL的甲醇，盖上盖子，混匀液体，用有机滤膜过滤至进样瓶中，上机检测。色谱条件为C18色谱柱，2504.65!m;流动相为甲醇∶水〔80∶20〕;柱温25℃；流速0.6mL/min;波长365nm;VWD检测器；进样量15L.所有样品均做2个重复。吸附率计算方式方法：吸附率/%=1-C0/C1.C0为吸附后上清液AFHPLC测试峰面积；C1为对照组AF标准溶液HPLC测试峰面积。1.2.2吸附剂添加量和毒素质量浓度对吸附剂吸附AF的影响配制所需的标准溶液：配制10mg/LAFB1的标准溶液。配制吸附剂悬浮液：分别称取待评估的吸附剂样品0.02000、0.05000和0.10000g于50mL的离心管中，分别参加一定量的蒸馏水和AFB1毒素标准溶液制得0.02000、0.05000和0.10000g这3种添加量的100g/L,4、8和10mg/L的毒素混合溶液。孵育及检测方式方法同1.2.1.1.2.3营养物质的添加对2种吸附剂吸附AF的影响配制所需的标准溶液：配制10mg/LAFB1的标准溶液，260mg/L维生素B1的标准溶液，60mg/L维生素B2的标准溶液。配制吸附剂悬浮液：称取待评估的吸附剂样品0.02000g左右于50mL的离心管中，试验组添加0.135g的赖氨酸，再分别参加不同量的AFB1标准溶液及蒸馏水、维生素B1和维生素B2溶液，维生素B1、维生素B2、赖氨酸及AFB1的最终含量：10mg/L、20mg/L、1.35%和100g/L,对照组以蒸馏水作对照。参加营养物质的试验组和对照组根据1.2.1孵育及检测的方式方法进行。1.3数据处理用Excel2018进行数据处理与分析。2结果与分析2.1不同pH条件下2种矿土对AF的吸附从表1可见：在反响体系为50g/L毒素质量浓度下，凹凸棒土和蒙脱石的吸附率接近100%,没有差异。AFB1质量浓度为2mg/L时，凹凸棒土和蒙脱石的吸附率变化规律一致，在pH为3时最高，pH为7时次之，蒸馏水最低，这和之前的研究结果一致〔刘媛婷，2018〕.【1】2.2不同吸附剂添加量和AF质量浓度下2种矿土对AF的吸附从表2可见：AFB1质量浓度为0.050~5.000mg/L时，一样毒素质量浓度条件下，矿土的添加量越大，毒素吸附率越高；在一样添加量的情况下，随毒素质量浓度升高，蒙脱石和凹凸棒土对AFB1的吸附率逐步降低，吸附率减少的幅度逐步增大。AFB10.05g/L时，蒙脱石和凹凸棒土的吸附率都为100%.高质量浓度条件〔2~5mg/L〕下，同吸附剂添加量和毒素质量浓度条件下，该蒙脱石类产品吸附率大于凹凸棒土类产品。【2】2.3添加营养物质后2种矿土对AF吸附从表3可见：在维生素B1、维生素B2和赖氨酸的添加条件下，2种矿土吸附AF吸附率与对照组数据没有差异，这讲明营养物质的添加对矿土吸附AF的能力没有影响。【3】3讨论3.1pH对2种矿土吸附AF的影响AFB1的等电点为4.17,毒素溶液pH4.17时，AFB1带正电荷，pH4.17时，AFB1带负电荷。从静电吸附单方面考虑，溶液3pH4.5时，AFB1带正电荷，蒙脱石和凹凸棒土类产品外表带负电荷〔王爱勤等，2018;于炎湖等，2004〕,有利于蒙脱石和凹凸棒土类吸附产品的对AFB1的外表吸附，pH4.17时，AFB1带负电荷，不利于AFB1的外表吸附，且由于蒙脱石和凹凸棒土对AF的吸附主要为化学吸附〔李静静等，2020〕,所以毒素含量低时〔试验的50g/L〕,pH不影响这2种吸附剂对AFB1的吸附能力，这和之前的研究报道一致〔于炎湖等，2004〕.3.2吸附剂添加量和毒素质量浓度对2种矿土吸附AF的影响一样AFB1质量浓度条件下，矿土吸附剂的添加量越大，吸附率越高，这与齐德生〔2004〕;唐家〔2018〕研究结果一致。吸附率减少的幅度随毒素质量浓度的增加逐步增大，这是高质量浓度条件毒素含量增加的原因。在高质量浓度毒素条件下吸附剂添加量等幅增加，该蒙脱石产品大于凹凸棒土产品吸附率的增加量。高质量浓度一样毒素含量条件下该蒙脱石对AF的吸附率大于凹凸棒土。由于不同厂家吸附剂产品的来源和构造不同，所以不代表所有的蒙脱石产品对AF的吸附效果都大于凹凸棒土。根据饲料中AFB1的量来确定吸附剂对AFB1的吸附率，进而明确吸附剂在饲料中的适宜添加量比拟困难〔齐德生，2004〕,试验讨论的2种吸附剂对AFB1的吸附率与反响体系中AFBI初始质量浓度间的关系，与吸附剂在动物体内的吸附情况有虽有些差异，但仍然可作为初步挑选毒素吸附剂的方式方法。3.3营养物质的添加对2种矿土吸附AF的影响矿土吸附剂类产品对毒素的吸附一般为化学吸附，没有选择性，所以吸附毒素的同时对营养物质也有明显的吸附作用〔唐家，2018〕,试验以饲料中比拟重要的、常见的营养成分维生素B1、维生素B2和赖氨酸为代表，测试这些营养物质的存在对吸附剂吸附AFB1有无影响。试验结果表示清楚：对照组和试验组的吸附率相近，这和齐德生等〔2004〕添加赖氨酸含量0.2%和0.4%对毒素的吸附没有影响结论一致，这讲明反响体系中，营养物质的添加对2种吸附剂吸附AFB1的能力没有明显影响。关于吸附剂产品对营养物质的吸收，有研究涂华荣等〔2003〕以为吸附剂会吸附饲料中的氨基酸和维生素等营养成分，所以会造成饲料中这些营养物质的损失，也有人以为吸附剂对营养物质的吸收会延长它们在动物肠胃中的停留时间，有利于机体对氨基酸和维生素的充分吸收，提高营养物质的利用率，所以还需要进一步的研究和确认。4小结吸附体系中AFB1质量浓度较低〔50g/L〕时，蒙脱石和凹凸棒土类产品对AF的吸附不受pH影响；AFB1质量浓度较高时，矿土类吸附剂在pH为3时吸附率最大，pH为7时次之，蒸馏水最低。在吸附体系的同AFB1质量浓度下，吸附剂添加量越大，吸附率越高，吸附率增加的幅度随毒素质量浓度的增加逐步增大；添加量不变的条件下，AFB1质量浓度越高，吸附率越低；AFB1质量浓度较高时，同添加量和毒素质量浓度条件下该蒙脱石产品对AFB1的吸附率大于该凹凸棒土产品。饲料中维生素和氨基酸等营养物质的添加对蒙脱石和凹凸棒土吸附AFB1的能力没有显着影响。以下为参考文献[1]刘媛婷。霉菌毒素吸附剂对黄曲霉毒素B1吸附特性及效果研究[D].雅