中医学综合实验报告

试验报告乙酰苯肼制作小鼠血虚证模型及中药疗效观看——小鼠造模、四诊观测及病理局部******** **制和防治措施的中药途径。本试验选取了造模方简便、结果牢靠的乙酰苯肼制作血虚证模一、 材料及方法〔一〕试验材料试验动物ICR43只，体重26±3g。饲养于内铺垫料的塑料笼，每天自食一般颗粒饲料。仪器及设备WMY-01型温度计；MP200B型电子天平；YLS-13A大小鼠抓力测量仪；相机三脚架，划有小方10cm、524把；一般双面刀片：10片/盒×1盒；染色架：5个；染色缸：1000ml，14-15个；100片/盒×2盒；玻璃漏斗：φ9032支；20张；Φ90mm42支；烧杯：1个；组织切片机及配套刀片：2台；摊片用水浴锅：2台；生物切片石蜡：5盒，熔点：56-5837°、盒；广1-2个；打火机、标签纸、铅笔各一，卷筒纸，乳胶手套、口罩足量。药物及试剂乙酰苯肼溶液〔H，P，白色粉末状固体，临用时配制成%溶液；%氯化钠1瓶；苦味酸-三硝基苯酚：/瓶×1福尔马林液：500ml/瓶×1瓶；无水乙醇：AR，500ml/瓶×1瓶；二甲苯:AR，500ml/瓶×1n苏木素〔苏木精/瓶×1〔曙红丫水溶瓶×1瓶；碘酸钠：AR，500g/瓶×1瓶；柠檬酸：AR，500g/瓶×1瓶；水合氯醛：/瓶×1瓶蛋白甘油〔/鸡蛋清l；中性树胶：0/瓶×2瓶；蒸馏水：500ml〔二〕试验方法动物分组1011只。造模及给药组别模型组四物汤组

1造模及给药造模及给药1、51-710.5ml/只10.09ml/10g，50.05ml/10g，21-710.5ml/只0.5ml/只0.5ml/只饮水、饮食量自造模之日起，各组动物添加等量的水及饲料，水：500ml/组；饲料：380g/组。检测指标动物一般状况：主要包括动物死亡状况，动物外观分析，饮水摄食状况等。四诊计量化指标场等。四诊数据处理:档案。每张表的“行”为不同组别、各动物及其编号rr、水平、直立等。②求出正常比照组各指标均数。③求出各组小鼠实测值与正常比照组均数的比值，以及各证候程度的值。⑤汇总不同日期检测的各组小鼠数据，用以观看证候的进展和演化。证候的计算公式及辨证气盛衰度=各动物水平移动实测值/正常组组均值×0.3+各动物直立次数/正常组均值×0.2+各动物抓力实测值/正常组均数×0.5；辨证标准：与正常组比较，＞1.5为气盛，＜0.75为气虚，＜0.5为气虚甚，＜0.25为气亏。阳盛衰度=各动物腋温/正常组组均值×0.3+各动物爪r/正常组均值×0.5+各动物尾r/阳虚重，＜0.9阳损。=各动物体重/为阴虚，＜0.7为阴亏，＜0.6为液脱。正常组比较，＞1.1为血充盈，＜0.9为血虚，＜0.8为血虚重，＜0.7为血亏。病理切片制作及读片脏和肠的读片。病理组织切片的制作：a.固定液、染色液的配置；b.组织取材：取肝、脾、胃和c.固定与修块；d.脱水和透亮；e.f.切片；g.脱蜡、染色与脱水；h.封片。统计方法SPSS统计软件进展单因素方差分析EDP5。二、 试验结果〔一〕动物死亡状况2117只，当归补血76只。〔二〕动物全身状态外观正常组。试验第5日，小鼠仍旧较为活泼5日，小鼠消灭少动、扎堆，欠活泼，爪、尾凉。5日，小鼠消灭少动、扎堆，眯眼，被毛疏松，爪、尾凉。5日，小鼠消灭少动、扎堆，眯眼，被毛疏松，爪、尾凉。〔三〕饮水、摄食状况图1 饮水状况 图2 摄食状况和模型组相差不大。〔四〕气盛衰度图3 抓力比较图 图4 垂直运动比较图5图5水平运动比较图 图6气盛衰度4、5、6可知抓力比较：正常组、模型组、治疗III组的抓力，造模前、后各组间无显著差异(P＞0.05)垂直运动比较：正常组垂直运动明显下III组垂直运动下降，I组有显著性差异〔P<0.05〕I组水II组水平运功略有下降。与正常组相比，模型组、治疗I组比较有显著性差异〔P<0.05〕III组则明显上升。与正常组相比，模型组、治疗I组有显著差异(P<0.05)血盛衰度图7 各组爪r比较图 图8各组尾r比较图图9 血盛衰度由图 7、8、9可知r比较：造模 前后各组间无小鼠尾r比较：与正常组相比，模型组有显著性差异(P0.05)，两组治疗组无显著性差异(P＞0.05)I组、治疗II组的II组尤其明显，造模前、后四组间比较血虚程度均无显著性差异(P＞0.05)阴盛衰度图10 各组体重比较图

101日，四组小鼠体重根本5日模型组、治疗III组体重均比第18日正常组、模型组、治疗II组体重无明显差异，但治疗I组体重明显增加。与正常组相比，三组均无显著差异〔P>0.05〕图11 各组阴盛衰度比较图

11II组模型组、治疗II组无显著性差异(P＞0.05)，治疗I组有显著性差异〔P<0.05〕阳盛衰度图12 各组腋温比较图型组最为明显。与正常组相比，模型组有显著性差异)(P>0.05)图13 阳盛衰度

13可知，正常组、治疗I组II组明显下降。与正常组相比，模型组有显著性差异〔5差异(P＞0.05)同病异证同样的处理，组内不同个体消灭不同的证候如第8天模型组，6号无证可辨，8号为气盛证图14 同一个体不同证候14可知，同一组别中的不同小鼠，其辨证结果也是不同的。同一个体，存在证候的演化II1号小鼠明显向气盛证候方向演化图15 同一个体证候演化15可知，小鼠也会发生证候的演化〔五〕病理读片结果脾图16 正常组脾脏〔400倍〕 图17 模型组脾脏〔400倍〕图18 当归补血汤组脾脏〔400倍〕 图19 四物汤组脾脏〔400倍〕17可知，正常组边界清楚，常组脾脏白髓与红髓；融合，呈现溶血性贫血脾脏病理表现，可见乙酰苯肼造模成功；18可知，治疗I组(当归补血汤组)脾脏上分布大量含铁血黄素，白髓、红髓相互融合；19可知，治疗II组(四物汤组)脾脏上分布大量含铁血黄素，白髓、红髓边界不清。十二指肠图20正常组十二指肠〔400倍〕 图21 模型组十二指肠〔400倍〕治疗1组图22当归补血汤十二指肠〔400倍〕 图23四物汤十二指肠〔400倍〕21可知，模型组肠腺数量较少肠腺数量削减II组(四物汤组)肠腺数量较少。三、 争论关于乙酰苯肼造模问题从本次试验来看，造模是成功的。第一组从动物外观上看到，造模第5天，即消灭爪部颜色变白、眼睛颜色变淡、被毛疏松等转变，本组观测到模型组脾脏病理切片显示，脾脏上有大量含铁血黄素分布，并且白髓与红髓相互融合，边界不清。第三小组观测到模型组肝脏病理切片显示，肝脏上也有大量含铁血黄素分布；其次组此次试验血虚证模型造模成功。关于小鼠证候问题病理损伤、试验指标水平作为模型建立的评价标准，这与中医理论中人体证候的整体、动态、表征等特征相去甚远。本次试验观看了小鼠的体重、腋温、爪尾显微观程中证候变化。III组最为明显；从气盛衰度来看，除了正常组小鼠变化不大外，其余三组均发生了不同程度的气盛，治疗I组最明显；从阴盛衰度来看，治疗I组发生了显著上升，说明治疗I组II组发生了显著下降，说明这III组小鼠除了有血虚证外，还伴有其他证候，此次试验所造的是一个综合性的复合证，并非单一的血虚证。而且，我们觉察，造模后，小鼠都消灭了腋温降低的现象，伴有明显的阳虚证，同样处理，不同的小鼠其证型也会不同，这就提示我们小鼠也有个体化差异，辨证论治在小鼠身上也是可行的。当归补血汤、四物汤疗效问题更好呢？首先，从第一组得到的结果可以看出，四物汤在改善血盛衰度方面较当归补血汤疗效好，且从脾脏病理切片来看，四物汤效果好，但是在改善气盛衰度、阴盛衰度、阳盛衰度方面，当归补血汤效果好；其次组得到的结果也是四物汤的疗效好，因其能增加红细胞数量；第三组的结论是支持四物汤，由于血红蛋白检测四物PCR结果也显示四物汤效果好。四组试验结果似乎都在说四