REACH法规 第五卷译稿

第IV部分CO2释放测定(方法C.4-C)IV.1.测定方法原理一份已测定体积的矿质培养基(包含一种已知浓度的测定物质(10-40mgDOC或TOC/L)作为其唯一的微量有机碳源)以受控速度在黑暗中或散射光下通入无二氧化碳空气.在28天里,伴随着生成二氧化碳的测定(氢氧化钡或氢氧化钠吸收二氧化碳,再滴定剩余碱或测定无机碳),降解不断进行.试验物质产生二氧化碳的量(空白培养液试验修正)以ThCO2百分率表示。生物降解度也可用通过诱导期始末的辅助DOC分析计算获得。IV.2.测定方法描述IV.2.1.仪器锥形瓶,2-5L,各配一根进气导管(伸入近容器底部)和一出气口磁力搅拌器,若估计有难溶物质气体吸收瓶气流测控仪除二氧化碳装置,用于制备无二氧化碳空气;或正确比例(20%02：80%N2)混合的无CO2氧气和氮气(钢瓶气)二氧化碳测定装置,滴定测定或无机碳分析仪膜过滤装置(可选择)DOC分析仪(可选择)IV.2.2.矿质培养基的准备储备液的制备，见162.将10mL溶液(a)用800mL水稀释，将1mL溶液(b)加入(d)中，用水稀释到1L。IV.2.3.培养液的制备和预处理培养液可能有多种来源：活化污泥;生活污水；地表水；土壤或以上来源的混合物。见I.6.4.,1.6.4.1.,I.6.4.2.和1.6.5。IV.2.4.锥形瓶的准备例如，以下的体积和质量对应于5L锥形瓶包含3L悬浮物的取值.如减少体积，相应修改取值.但应保证生成的二氧化碳能被准确测定。每个5L锥形瓶加入2400mL矿质培养基.加入适量体积已准备的活性污泥（见I.6.4.1.和1.6.5.）得一悬浮液（最终3L接种后混合物浓度不超过30mg/L）;另外，也可以首先稀释准备好的污泥，在矿质培养基得到500－1000mg/L的悬浮液，然后在5L的锥形瓶中加入一份等分试剂获得30mg/L浓度。以此确保更高准确度。其它来源的培养液也能用到.（见I.6.4.2.）。整夜向培养液混合物中通入无二氧化碳空气以排净体系中二氧化碳。在平行试验的锥形瓶中分别加入已知体积的试验物质和参比物质储备液，得到浓聚物（加入化学物质（10到20mgDOC或TOC/L）的作用）；一些锥形瓶不加化学物质留作培养液对照。难溶试验物质以一定质量或体积的基体直接加入锥形瓶或按附录III处理。如有要求,用一个锥形瓶通过加入与其它锥形瓶同浓度的试验物质和参比物质来检验试验物质可能的抑制作用。如有需要，在一个消过毒的锥形瓶加入未注射疫苗的化学溶液，来检查测试的化学物质是否发生非生物降解（见166.）。可以通过加入适当浓度的有毒物质来消毒。另加前述无二氧化碳曝气过的矿质培养基将悬浮液体积补足3L。可选择地，样品可以不用进行DOC分析或其他详细的分析。在锥形瓶出气口接气体吸收瓶。如使用氢氧化钡,接三个吸收瓶,每个装有100mL0.0125M氢氧化钡溶液。与每个5L锥形瓶对应，溶液必须无硫酸盐和碳酸盐沉淀，浓度必须即用即标定。如使用氢氧化钠，连接两个吸收装置，第二个作为对照验证所有二氧化碳被第一个装置吸收。配有血清瓶罩的吸收瓶较为合适.每个瓶中加入200mL0.05M氢氧化钠（足够吸收试验物质完全降解放出的全部二氧化碳）。氢氧化钠溶液即使是新鲜制备也会含有痕量碳酸盐；可通过扣除空白试验中碳酸盐得以修正。IV.2.5.典型试验中的锥形瓶数锥形瓶1和2:测定悬浮液锥形瓶3和4:空白培养液锥形瓶5:过程控制最好和当有必要时：锥形瓶6：非生物无菌对照锥形瓶7：毒性对照亦可参阅1.6.7.IV.2.6.试验将无二氧化碳空气以30-100mL/min鼓入悬浮液,周期性取样(二氧化碳吸收剂)分析CO2含量。推荐前十天每两三天分析一次,然后每五天直到第28天以便确定10天的观察周期。第28天，提取样品(可选择)进行DOC和/或特殊分析，测定悬浮液pH值并在每个锥形瓶中加ImL浓盐酸;整夜通气以除净试验悬浮物中二氧化碳.第29天最后一次分析释放的二氧化碳。每到二氧化碳测量日，拆开与锥形瓶最近的氢氧化钡吸收器，用0.05MHCL滴定碱溶液,酚酞作指示剂。将余下吸收器移近锥形瓶并在末端补接一个含100mL新鲜0.0125M氢氧化钡的新吸收器.需要时进行滴定，如第一个吸收装置中有可见沉淀，第二个瓶中没有明显沉淀，或者最少每周一次.或以NaOH为吸收剂，用注射器在与锥形瓶较近吸收器中吸取少量氢氧化钠溶液样品(取决于碳分析仪特性)。将样品注入碳分析仪的IC部分直接分析释放的二氧化碳。只在试验末分析第二个气体吸收器以修正气体带出的二氧化碳。IV.3.实验数据和结果报告IV.3.1.数据处理滴定分析给出被气体吸收装置吸收CO2的量：mgCO2=(100xCB-0.5xVxCA)x44其中：V=HCl滴定100mL吸收液所用体积(mL),CB=氢氧化钡溶液浓度(M),CA=氢氧化钠溶液浓度(M),如CB为0.0125M,CA为0.05M，滴定100mL氢氧化钡用50mL滴定剂，CO2质量BA2为：0.052 2x44xmLHCl已滴定=1.1xmLHCI因此，此情况下，滴定HCL体积与生成mgCO2换算因子为1.1。以滴定值分别计算仅培养液和培养液加试验化学物质产生的CO2，其差值为仅试验化学物质产生的CO2。例如,仅培养液消耗48mL滴定剂，培养液加试验化学物质消耗45mL,CO2培养液=1.1x（50-48）=2.2mgCO2培养液加试验化学物质=1.1x（50-45）=5.5mg因此试验物质产生的CO2质量为3.3mg。生物降解百分率计算：%降解率=（mgCO2生成x100）/（ThCO2xmg加入试验物质）或，%降解率=（mgCO2生成的x100）/（mgTO试验中加入x3.67）3.67为碳到二氧化碳的换算因子（44/12）。将直到某测量日的每个测量日ThCO2百分数相加可获得每个测量日的降解百分率。对于氢氧化钠吸收器，计算产生的二氧化碳量，以IC（mg）表示（吸收液中IC浓度乘以吸收液体积）.计算降解百分数:%ThCO2=（mgIC锥形瓶-mgIC空白x100）/（MGTOC作为试验物质加入）计算DOC减少（可选择）如1.7所述.将以上所有实验结果记录在提供的数据表上.IV.3.2.实验结果的准确性试验初矿质培养基中试验悬浮液IC含量必须少于TC的5%，且试验末空白培养基CO2总释放量正常情况下不应超过40mg/L培养基。若大于70mgCO2/L，应缜密检查数据和试验技术。也见I.5.2.IV.3.3.实验结果报告见I.8.IV.4..数据记录表以下给出一张数据记录样表.CO2释放测定实验室试验开始日期试验物质名称:储备液浓度:mg试验物质/L培养基初始浓度:mg试验物质/L加入锥形瓶的总C量:mgCThCO2:mgCO2培养液来源:给定处理方法:预处理（如有）:反应混合物中悬浮固体浓度:mg/L时间（天）试验生成CO2（mg）空白生成CO2（mg）累积生成CO2（mg）（试