2022年行业分析保健食品中维生素检测方法现状及展望

保健食品中维生素检测方法现状及展望一、保健食品中脂溶性维生素分析方法概况

保健食品中添加有维生素A、维生素D、维生素E、维生素K和b－胡萝卜素，一般状况下后两者使用相对较少。鉴于脂溶性维生素的特点和样品基质状况，样品一般需要在皂化后经有机溶剂提取后测定。

1．维生素A

一般添加视黄醇醋酸酯和视黄醇棕榈酸酯两者之一或两种均添加。通常状况下成分简单的样品需采纳皂化反应后测定其中的视黄醇。成分相对简洁的片剂和胶囊样品可采纳溶剂提取直接测定视黄醇醋酸酯或视黄醇棕榈酸酯。奶粉等产品可以使用胰酶或蛋白酶处理，溶剂提取后测定视黄醇醋酸酯或视黄醇棕榈酸酯。

2．维生素E

一般状况下添加的是a－维生素E。成分相对简洁的样品可采纳溶剂提取直接测定。多数样品需要在皂化反应后测定其中的维生素E。

同时分析维生素E4种结构并包括内标物，可使用如下正相柱：

（1）Nucleosil-NH24.6×250mm,5μm，正己烷：二恶烷=85：15，295nm

（2）ZorbaxSIL4.6×250mm,5μm，正己烷：二恶烷：异丙醇=985：10：5，295nm

（3）Lichrosorb-NH24.0×250mm，5μm，正己烷：异丙醇=99：1，295nm

（4）YMC－PacA－600（NH2），3μm，正己烷：异丙醇=98：2Ex：290nmEm：325nm

3.维生素D

一般状况下添加的是维生素D2和维生素D3中之一。目前维生素D的分析尚不如维生素A和维生素E成熟，主要缘由为含量低，前处理过程损失多，与维生素E较难分别。现在实行的方法是采纳乙腈＋甲醇＋水＝25+75+4作为流淌相，依据样品中维生素D的状况，选择维生素D2和维生素D3互为内标。维生素D的分析对于色谱柱的要求较高，一般来讲250mm长度的ZobaxSB-C18比较适合分析要求。

4.b－胡萝卜素

b－胡萝卜素一般消失在植物性保健食品中，分析方法相对成熟。目前我们将维生素E、番茄红素和b－胡萝卜素通过采纳不同的波长达到一次性分析的目的。样品采纳二氯甲烷进行提取，分析过程需要加入抗氧化剂BHT对组分进行爱护。

流淌相为甲醇：乙腈＝50：50

色谱柱：SupelcosilRPC18

5.α－胡萝卜素

α－胡萝卜素目前也消失在保健食品中已有应用，初步将其与b－胡萝卜素一同分析。样品采纳丙酮进行提取。

流淌相为甲醇：甲基叔丁基醚：水＝310：76：14

色谱柱：SymmetryC18

检测波长：450nm

二．保健食品中水溶性维生素分析方法概况

目前建立并推广了一套的系统分析方法，通过选用多波长离子对高效液相色谱分析可以解决维生素B1、维生素B6、烟酸、烟酰胺、维生素C的分析。生物素、泛酸、叶酸需采纳单独的高效液相色谱分析条件。维生素B2采纳荧光分光光度法分析。

1．维生素B1（盐酸硫胺、硝酸硫胺）

分析维生素B1可采纳盐酸苯海拉明作为内标。样品采纳甲醇+水+磷酸提取。

流淌相为硫酸月桂酯钠溶液（5g/530mL）：乙腈：磷酸＝530：470：0.4

色谱柱：m-BondapakC18或TSKGel-C18

检测波长：260nm

2.维生素B1（呋喃硫胺）

有报道，呋喃硫胺是维生素B1的活性结构，在韩国、日本等产品中使用呋喃硫胺与盐酸硫胺、硝酸硫胺的色谱行为有较大区分。

流淌相为甲醇：水：乙酸：PigB6＝450：530：20：20

色谱柱：m-BondapakC18

检测波长：280nm

3.维生素B6（吡哆醇）、烟酸、烟酰胺

分析维生素B6、烟酸、烟酰胺可采纳愈创木酚甘油醚作为内标。样品采纳甲醇+水+磷酸提取。

流淌相为1－癸烷磺酸钠溶液（1.22g/850mL）：乙腈：磷酸＝850：150：0.4

色谱柱：m-BondapakC18或TSKGel-C18

在维生素类保健食品中烟酸应用极少，基本上添加的均为烟酰胺。

检测波长：280nm

功能性饮料中添加的咖啡因和苯甲酸也可以同时检测。依据大量试验认为液体类样品应使用TSKGel-C18，固体样品两者皆可。

4.维生素C

除颜色较深、含量较低、自然 植物干制品外，一般样品中的维生素C均可以采纳碘溶液滴定法进行测定。利用高效液相色谱法测定维生素C可利用维生素B6（吡哆醇）、烟酸、烟酰胺流淌相体系，因维生素C色谱保留时间较短，可以将降低其中乙腈的比例至5%。提取溶剂尽可能使用水，以避开在前面消失倒峰影响定量结果的精确     。

检测波长：254nm

5.维生素B2

有关维生素B2的色谱分析方法有报道，但在实际样品分析过程中因保留时间较短且与其它峰难以较好分别，故采纳将其转化为光黄素后进行荧光分光光度法分析。

6.泛酸（维生素B3）

泛酸采纳液相色谱分析法进行检测，样品用水提取即可。

流淌相：0.02M磷酸二氢钾溶液：乙腈=95：5，pH=3.0

色谱柱：m-BondapakC18300mm

检测波长：200nm

7.生物素

生物素的分析正在初步摸索阶段，目前采纳pH=3.50.25M磷酸盐缓冲溶液：甲醇=77：23的流淌相，检测波长200nm。目前的需要解决的问题是保留时间较长，大约在30min左右；此外灵敏度较低。

8.叶酸

叶酸一般使用弱碱性水溶液提取，为保证提取效果可以在50℃水浴中加热10min。

流淌相：磷酸二氢钾缓冲溶液：甲醇=460:40，pH=6.0

色谱柱：m-BondapakC18300mm

检测波长：280nm

叶酸的讨论方向：通过大量实际样品检测讨论，发觉在虫草等自然 产物中存在与叶酸色谱保留时间完全全都的物质；不少样品中叶酸含量较低，拟采纳固相萃取等技术作为前处理手段。

9.维生素B12

维生素B12的化学分析目前还是一个难题，对于含量较高，组成简洁的原料和添加剂进行高效液相色笱单的原料和添加剂进行高效液相色失杂的多种维生素样品的分析方法正在摸索之中。

维生素B12的讨论进展：虽然维生素B12有3个特征波长，但样品在不经处理的状况下也很难分析；在溶液中钴胺素很简单消失氰钴胺素、甲钴胺素、羟钴胺素等几种形式共存的现象。为避开消失上述问题，更好地去除样品中的干扰杂质并对样品中的维生素B12进行富集，目前采纳加入表面活性物质、盐析、有机溶剂萃取等方法去除杂质，再通过固相萃取法进行富集的手段。

三、类维生素分析方法概况

1.肉碱（维生素BT）

肉碱若采纳分光光度法检测比较繁杂，高效液相色谱法测定相对简洁。利用高效液相色谱法测定肉碱同样利用维生素B6（吡哆醇）、烟酸、烟酰胺流淌相体系，因肉碱色谱保留时间虽比维生素C长但相对仍较短，因此流淌相可以同维生素C一样。提取溶剂尽可能使用水或pH=5~6的水，以避开在前面消失倒峰影响定量结果的精确     。

检测波长：210nm

2.辅酶Q10

对于维生素类样品中辅酶Q10的检测采纳液相色谱分析法。样品中辅酶Q10使用正己烷作为提取溶剂。

色谱柱：TSKGel-C18

流淌相：乙腈+四氢呋喃+水=55+40+5

检测波长：280nm

3.肌醇

对于维生素类样品中肌醇的检测建立了一套衍生化-气相色谱分析法。样品中肌醇经过提取，彻底去除水分后进行衍生化，正己烷提取后进行气相色谱分析。

衍生化试剂：三甲基氯硅烷：六甲基二硅氨烷：二甲基甲酰胺=1：2：8

色谱柱：BP-5弹性石英毛细管柱,25m×0.32mm

色谱条件：载气50mL/min

尾吹气50mL/min

氢气40mL/min

空气500mL/min

分流比1：50

四、需要解决的问题及展望

1．解决样品前处理技术

（1）不少油性胶囊样品中加入了水溶性维生素，如何应用前处理手段解决提取、净化问题。

（2）对于含量较低的样品如何应用固相萃取等手段。

（3）