卫生及微生物知识培训

卫生及微生物知识培训根本要求制药厂的所有工作人员，特别是干净区域内的工作人员〔包括维修、辅助人员〕都应定期进展卫生和微生物学根底知识、干净作业等方面的培训及考核；对于需要进入干净室〔区〕的临时外来人员也应进展指导和监视。微生物的定义微生物的定义： 存在于自然界中的一群体型细小、构造简单、肉眼看不见，必须借助于特殊仪器放大后才能观察到的微小生物。微生物的定义 按其构造、化学组成及生活习性可分为以下几大类：原核类： 仅有原始核质，无核仁或核膜，细胞器很不完善。如细菌、放线菌、支原体、立克次氏体、衣原体、螺旋体。微生物的定义真核类： 细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体，细胞器完整。如真菌〔酵母菌和霉菌〕、原生动物、藻类。非细胞类： 体积微小，能通过除菌过滤器。如病毒和朊病毒等。微生物的定义按微生物对人类的致病性，可以分为两类：病原性微生物：

病原微生物是指可以侵犯人体，引起感染甚至传染病的微生物，或称病原体，以细菌和病毒的危害性最大。微生物的定义按微生物对人类的致病性，可以分为两类：非病原性微生物：

非病原性微生物指不会侵犯人体，不会引起感染等疾病的微生物。在我们体内其实存在着很多微生物，我们人类互利共生。如肠道中很多微生物，它们帮助我们消化食物，而我们给它们提供生活环境，营养等。微生物的特点个体小：微生物一般小于0.1mm，肉眼不可见。分布广，种类多〔目前的超过10万种〕： 在自然界中到处都有，如水、空气、土壤等，其中在土壤中的数量最多。代谢强，转化快： 发酵乳糖的细菌在1小时内可分解其自重1000～10000倍的乳糖。微生物的特点生长旺，繁殖快：

微生物有惊人的繁殖速度，大多数微生物几分钟到几十分钟内就可以繁殖一代。适应性强，易变异：

由于细菌的适应性极强，并且能产生变异，原有的抗生素就不能发挥作用，这就是人们常说的细菌产生了耐药性的原因。微生物的特点葡萄球菌

酵母菌〔芽痕〕棒状杆菌大肠杆菌弧状菌链球菌一些常见的微生物的形态微生物的分布土壤：

在土壤中，由于温度与湿度适中，富含微生物所需要的营养物质，是微生物生活最适宜的环境，在土壤中微生物的种类与数量最多。水：

是仅次于土壤的微生物分布、定居场所。微生物的分布空气：

空气中的微生物主要来源于带有微生物菌体及孢子的灰尘，这类微生物大多数是腐生性的，还来源于人和动物，它们大多数是通过呼吸道排出的，其中也包含有病原微生物，悬浮在大气中。微生物的分布 由于空气中的微生物不是以微生物的独立形态存在，而是由微生物菌体及孢子与灰尘抱团，悬浮在大气中，这也就是为什么在药品生产过程中，我们需要建立干净房间的原因，当空气的干净度〔尘埃粒子数〕符合要求时，也就控制了微生物数量，就能保证产品的质量。微生物的分布人体中的微生物 人在出生以后，自然界中的微生物就逐渐进入人体。在正常人体皮肤、粘膜及与外界相通的各种腔道〔如口腔、鼻咽腔、肠道和泌尿道〕等部位，存在着对人体无害的微生物群，包括细菌、真菌、螺旋体等，这些都称为正常菌群，这些菌群保证了人类的生存。微生物的分布人体中的微生物 能使宿主〔人或动物〕感染致病的细菌称为致病菌或病原菌，不能造成宿主感染致病的为非致病菌或非病原菌。有些细菌在正常情况下并不使宿主致病，但当在某些条件改变的特殊情况下可以致病，这类菌称为条件致病菌或时机致病菌。微生物的作用及危害微生物的作用

绝大多数微生物对人和动物是有益的，已经广泛应用于农业、食品、医药、酿造、化工、制革、石油等行业，发挥了越来越重要的作用。例如与我们日常生活密切相关的如生产酸奶、酒类，在制药工业中生产抗生素、疫苗等。微生物的作用及危害微生物的危害 微生物中也有一局部能引起人及动、植物发生病害，这些具有致病性的微生物，称为病原微生物。 如人类的许多传染病〔感冒、伤寒、痢疾、结核、脊髄灰质炎、病毒性肝炎等〕，都是由病原微生物引起的。微生物的作用及危害微生物的危害

从药品生产的卫生学要求而言，微生物对药品的原料、生产环境和成品的污染，往往是造成生产失败、产品不合格的重要因素。

微生物的类群和形态构造细菌是一类细胞细而短、构造简单、细胞壁坚韧，以二分裂〔一分为二，二分为四，以此类推〕方式无性繁殖的原核微生物，分布非常广泛；细菌的体型非常小，一般需要借助于高倍显微镜或电子显微镜才能观察到。微生物的类群和形态构造细菌的形态与构造：球菌： 多数球菌直径在1微米左右，外观呈球形或近似球形，由于繁殖时分裂平面不同可形成不同的排列方式，分为双球菌、链球菌、葡萄球菌等。微生物的类群和形态构造葡萄球菌微生物的类群和形态构造四联球菌微生物的类群和形态构造杆菌：

杆菌的形态多数呈直杆状，也有的菌体稍弯，多数呈分散存在，也有的呈链状排列，分为棒状杆菌、链状杆菌、球杆菌等。

微生物的类群和形态构造与球菌不同，杆菌的大小、长短、粗细很不一致。炭疽芽胞杆菌3～10μm大中大肠埃希菌2～3μm小布鲁菌0.6～1.5μm微生物的类群和形态构造两端齐平炭疽芽胞杆菌两端尖细白喉棒状杆菌杆菌的形态多样微生物的类群和形态构造分枝杆菌双歧杆菌杆菌的形态多样微生物的类群和形态构造螺形菌：

螺形菌的菌体弯曲，呈弧形或螺旋形，如幽门螺杆菌。微生物的类群和形态构造螺形菌弧菌螺菌螺杆菌微生物的类群和形态构造细菌虽然很小，仍然具有一定的细胞构造和功能。细胞壁、细胞膜、细胞质和核质等各种都有，是细菌的根本构造。微生物的类群和形态构造 真菌是一类有细胞壁，无叶绿素，以寄生或腐生方式生存，能进展无性或有性繁殖的一类真核细胞型微生物。微生物的类群和形态构造真菌包括单细胞与多细胞两类：

单细胞真菌呈圆形或卵圆形，这一类被称为酵母菌；

多细胞真菌由菌丝和孢子组成，并交织成团，称丝状菌或霉菌。微生物的类群和形态构造 真菌最适宜的生长温度为22～28℃，最适宜的pH值为4～6。其繁殖能力强，但生长速度比细菌慢，常需1～4周才形成菌落。真菌对热的抵抗力不强，一般加热至60~70℃，1小时即被杀死，但对枯燥、日光、紫外线和一些化学消毒剂有抵抗力，但对2.5％碘酒、10％甲醛那么较敏感。微生物的类群和形态构造3.病毒

病毒属非细胞型微生物，在自然界分布非常广泛，可在人、动物、植物、真菌和细菌中寄居并引起感染。微生物的类群和形态构造 病毒是体积最小、构造最简单的一类微生物，往往需要借助于电子显微镜才能观察到，它仅有一种核酸〔DNA-脱氧核糖核酸或RNA-核糖核酸〕作为其遗传物质。 病毒必须在宿主活的细胞内寄生，依靠宿主的细胞提供的能量、营养物质及生物大分子合成机制，完成病毒的复制过程。微生物的类群和形态构造 病毒与人类的关系极为密切，人类的传染病大约有75％是由病毒所引起的。有些病毒传染性强，可引起世界大流行〔如流感、艾滋病等〕，并且病毒的变异极快。热原与内毒素 “热原〞系指由微生物产生的能引起恒温动物体温异常升高的致热物质。它包括细菌性热原、内源性高分子热原、内源性低分子热原及化学热原等。 对于制药公司生产产品所指的“热原〞，主要是指细菌性热原，它是由某些细菌的代谢产物、细菌尸体及内毒素所构成。热原与内毒素 “热源〞致热能力最强的是革兰氏阴性杆菌的代谢产物，其次是革兰阳性杆菌类，革兰阳性球菌那么较弱，霉菌、酵母菌、甚至病毒也能产生热原。热原与内毒素 细菌内毒素一般指革兰阴性细菌细胞壁的构造成分，主要是脂多糖。 从以上的描述可见我们可以看出热源与内毒素的区别，热原包含内毒素，所以热原的范围更大。 细菌内毒素生物学活性可分为两类：一是致病作用，一是保护性反响。细菌内毒素的特点1.耐热性：120℃加热4h，可以破坏98%，180℃加热2h或250℃加热30min，才可以彻底破坏。2.滤过性：由于其体积小，约在1~5nm之间，所以能通过各种过滤器进入滤液中。热原与内毒素细菌内毒素的特点3.具有水溶性及不挥发性。4.能被强酸、强碱和氧化剂破坏。

由于细菌内毒素具有上述特点，在药品生产过程中，需要特别注意细菌内毒素对产品的污染，一旦产品被污染，细菌内毒素将很难除去。热原与内毒素热源〔细菌内毒素〕引入的途径： 从溶剂中带进〔主要是水，在水中往往存在细菌和细菌内毒素，在一般情况下，有机溶剂中细菌无法生存，也就不会产生热源〕； 从原料中带进； 沉着器、用具、管道和设备设施等带进； 制备过程中的污染。热原与内毒素热原与内毒素消除细菌内毒素的方法：

高温破坏法：可用180℃干烤3~4h或250℃干烤30min；

吸附法：一般选用活性炭；

蒸馏法：此法仅限于制备蒸馏水；

化学酸碱和氧化法；

离子交换法；

热原与内毒素消除细菌内毒素的方法： 反渗透法； 凝胶过滤法； 超滤法。 在生产实践活动中，采用比较多的方法是高温破坏法、吸附法、蒸馏法、化学酸碱法和氧化法。热原与内毒素 在药品生产质量管理标准〔GMP〕条件下，药品生产的质量控制一般可以承受的观点是：不存在细菌内毒素意味着不存在热原，所有在实际制定的质量标准和质量检验中，往往检测产品的细菌内毒素。消毒与灭菌我们平时都习惯所消毒灭菌，实际上消毒与灭菌是两个不同的概念。以下术语常用于表示物理或化学方法对微生物的杀灭程度：消毒： 杀死物体上病源微生物的方法,并不一定能杀死细菌的芽胞，消毒所用的试剂称为消毒剂。消毒与灭菌抑菌：

抑制体内或体外细菌的生长繁殖，常用的抑菌剂为各种抗生素，可抑制细菌的生长繁殖。灭菌：

杀灭物体上所有微生物的方法；灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。消毒与灭菌芽孢：

芽孢是细菌的休眠体，在适宜的条件下可以重新转变成为营养态细胞；

一般的芽孢在普通的条件下可保存几年至几十年的生存能力；目前世界上发现的最古老的芽孢至今已有亿年。消毒与灭菌 芽孢对热力、枯燥、辐射、化学消毒等常规理化因素有极为强大的抵抗力；杀灭芽胞最可靠的方法是高压蒸汽灭菌。消毒与灭菌防腐：

防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，而细菌一般不死亡；同一种化学试剂在高浓度时是消毒剂，低浓度时一般可以作为防腐剂。无菌：

即不存在活的细菌；防止细菌进入人体或其他物品的操作技术，称为无菌操作。消毒与灭菌无菌： 不存在活的生物〔GMP指南〕 “无菌〞从定义上来说应该是一个绝对的概念，但遗憾的是，在科学和技术高度开展的今天，要做到绝对无菌是不可能的，也无法加以证实。因此，从药品的平安性出发要求人们设定无菌的相对标准。消毒与灭菌美国FDA、欧洲制药工业界曾将百万分之一微生物污染率作为灭菌产品“无菌〞的相对标准，它和蒸汽灭菌后产品中微生物存活的概率为10-6相符，这一标准如今已为世界各国普遍承受和采用。消毒与灭菌1.物理灭菌方法 热力灭菌法； 辐射杀菌法； 滤过除菌法； 超声波杀菌法； 枯燥与低温抑菌法。消毒与灭菌热力灭菌法：

使蛋白质、酶及核酸永久性破环，细胞膜溶解，导致细胞发生不可逆转的死亡。干热灭菌法：

采用灼烧或干热空气灭菌，使用方便，适用于玻璃器皿和瓷器等可以耐高温的固体物的灭菌。消毒与灭菌湿热灭菌法： 利用热蒸汽杀死微生物的方法。 高压蒸汽灭菌：利用高温高压蒸汽进展灭菌的方法，蒸汽的穿透力较热空气强，可以杀死一切微生物，包括细菌的芽孢，真菌的孢子或休眠体等耐高温的个体，是一种最可靠最适用最广泛的灭菌方法。消毒与灭菌辐射灭菌法紫外线：

波长190～300nm的紫外线具有杀菌作用。但穿透物质的能力很差，一般要求紫外灯距离照射物不超过米为宜。电离辐射：

高速电子、X射线、γ射线。消毒与灭菌微波〔电磁辐射〕： 波长1mm～1m的电磁波。滤过除菌法 用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去，以到达除菌目的。

消毒与灭菌 滤菌器中含有细微的小孔，孔径≤0.22微米，只允许液体或气体通过，而大于该孔径的细菌等颗粒不能通过〔细菌的直径一般均大于0.22微米〕； 滤过除菌法适用范围：血清、毒素、抗生素、溶液以及空气等的除菌。消毒与灭菌2.化学灭菌方法 许多化学药物能够影响微生物体内的化学组成、物理构造和生理活性，从而发挥防腐、消毒及灭菌的作用。 在干净室〔区〕内应定期消毒，使用的消毒剂不得对设备、物料和成品产生污染。消毒剂品种应定期更换，防止产生耐药菌株。微生物的控制 微生物的种类繁多，有的对人有益，有的对人有害，有的无益也无害。但是在药品生产过程中，不可能对环境中的各种微生物加以区别对待，为保证产品的平安有效，就需要对所有的微生物进展控制。 许多以前被人们认为是极端条件下〔高温、高压、强酸、强碱、低温等〕，甚至是致死的环境，现在已经发现在这些极端仍然条件下生活着各种类型的微生物〔我们称为极端微生物〕。事实说明，微生物有特别顽强的生存、繁殖和变异能力来适应环境。微生物的控制

当饮用水经水塔或贮水池贮存后，短期内微生物就可能繁殖到105~106个/ml。

人的头皮上有140万个/cm2，两手上约有4~40万个，1g指甲污垢就有38亿个，1g粪便可达10~1000亿个。可以说微生物是无处不在，无处不有。微生物的控制微生物的控制干净室〔区〕内微生物的来源1.空气。2.水。3.人员〔在干净室内，人是第一污染源〕。4.室内的外表和设备、工器具的外表。 针对以上4点，就能有目的的对干净室内的微生物进展控制，保证产品质量。

微生物的控制1.对空气的控制

利用空气过滤技术将每升空气中含有的以十万计甚至百万计的灰尘颗粒，降低到每升空气中只含有几粒，几百粒，几千粒的不同净化等级，以控制空间的含尘数量，控制了整个空间的含尘数量，也就是控制了微生物的数量。微生物的控制 微生物不是凭空存在的，99%的微生物都是附着在灰尘颗粒上的，或以芽孢形式悬浮于空气中，控制了空气中的颗粒数量，就控制了微生物的数量，1μm以下者处于悬浮状态，10μm以上者会逐渐沉下来而形成含菌的灰尘，所以我们需要对灰尘颗粒进展严格控制。微生物的控制2021版GMP对干净区域的规定如下：洁净度级别悬浮粒子最大允许数/立方米静态动态≥0.5μm≥5.0μm≥0.5μm≥5.0μmA级352020352020B级3520293520002900C级3520002900352000029000D级352000029000不作规定不作规定微生物的控制2.对水的控制

水是微生物的乐园，水体是微生物广泛分布的第二个天然环境；

水中的微生物来自土壤、尘埃、污水、人畜排泄物及垃圾等。微生物的控制2021版GMP明确规定： 纯化水、注射用水的制备、贮存和分配应当能够防止微生物的滋生； 纯化水、注射用水储罐和输送管道所用材料应当无毒、耐腐蚀； 储罐的通气口应当安装不脱落纤维的疏水性除菌滤器；微生物的控制 纯化水、注射用水输送管道的设计和安装应当防止死角、盲管，应当按照操作规程定期对纯化水、注射用水管道进展清洗和消毒，并有相关记录。 严