微生物检验的质量控制

第十九章微生物检验的质量控制

质量控制是指人们根据客观条件的许可所制定的，实际可以达到的统一的质量标准。微生物检验的质量控制，包括室内质量控制和室间质量评价室内质量控制是由实验室内部制定并实施的，是质量保证的核心和基础。室间质量评价是由实验室外部的组织或机构对实验室进行的质量评价。

第一节室内质量控制

（一）人员与组织管理

具备扎实的微生物学、基础医学、临床医学等理论知识专业化的实验技能培训配有一名经严格训练并长期从事于微生物检验的技术员，全面负责实验室的工作定期进行新理论、新技术、新方法的业务学习，经常组织疑难细菌鉴定讨论会，提高业务水平（二）操作手册包括：①实验室的规章制度各级人员的职责和权限；②实验室安全措施；③标本采集和处理指南；④本室开展的检验项目及最低鉴定要求；⑤培养基、试剂和染色剂的配制与保存；⑥质量控制方案；⑦常用参考数据；⑧其他制度。（三）仪器设备的功能检测

1．高压灭菌器最好在灭菌器装上温度记录装置，以保证整个灭菌过程中保持合适的温度。为了保证灭菌的彻底，可用生物指示剂嗜热脂肪芽胞杆菌ATCC7953监视灭菌效果。2．培养箱、冰箱、水浴箱应在每日工作开始和结束时记录温度。3．二氧化碳培养箱每天检查CO2含量。4．厌氧罐或厌氧箱美篮为指示剂，无氧时应无色。5．生物安全柜更换滤网由专门技术人员进行。6．细菌培养仪对每批培养瓶进行生长试验。保证在有效期内使用。7．微生物鉴定仪应及时更新系统操作软件，使之能识别最新认识的微生物。（四）培养基的质量控制培养基是分离培养微生物的必需品。培养基质量的好坏，直接关系到分离培养的成败。目前大多数实验室都使用干粉培养基配制或使用成品培养基。对来自著名的微生物培养基生产公司的培养基，质量比较稳定。只要按照说明书的要求贮存，在有效期内使用可获得满意效果。常用培养基质控标准培养基质控菌株判定标准营养琼脂金黄色葡萄球菌ATCC25923生长血琼脂肺炎链球菌ATCC6305化脓性链球菌ATCC19615生长，α溶血生长，β溶血巧克力琼脂淋病奈瑟菌ATCC

43069脑膜炎奈瑟菌ATCC13090流感嗜血杆菌ATCC10211生长生长生长中国蓝琼脂大肠埃希菌ATCC25922鼠伤寒沙门菌ATCC14028生长，蓝色菌落生长，无色菌落麦康凯琼脂大肠埃希菌ATCC25922奇异变形杆菌ATCC12453生长，红色菌落无迁徙生长，无色菌落SS琼脂大肠埃希菌ATCC25922鼠伤寒沙门菌ATCC14028不生长生长，中心黑色菌落（五）试剂、染色液及诊断血清质量控制1．试剂及染色液注明配制日期，有效日期及贮存条件。测试同时进行阳性和阴性对照试验。2．抗血清的质量控制来源可靠，根据使用说明使用与保存。冻干制品还应注明配成水溶液的日期；抗血清应澄清；第一次使用时，应用已知菌效价和特异性进行测定，合格者方可使用。

（六）药敏试验的质量控制

抗菌药物敏感试验是临床进行抗菌治疗的指导性实验，其结果的正确性直接关系到抗菌治疗的成败。常用有纸片法和稀释法，保证结果的准确性极为重要。

举例：纸片法质量控制①质控菌株有：金黄色葡萄球菌ATCC25923；大肠埃希菌ATCC25922；铜绿假单胞菌ATCC27853⑥抑菌环的质控范围：标准菌株的抑菌圈直径在连续20个试验结果中只能有1个结果超出所列的范围。⑦质控测定次数：每批新的MH琼脂和含药纸片必须用质控菌株进行检测30日，30个抑菌环直径只有少于3个结果超出范围。达到要求后，每周检测一次。

（七）质控标准菌株1．标准菌株的来源标准菌株是指具有典型的、稳定的生理生化特征，并被国际社会所认可的菌株。来源于专门的菌种保存供应机构，如卫生部生物制品鉴定所菌种保藏中心（CMCC）。2．标准菌株的保存（1）一般保存法将菌种于半固体培养基中，35℃培养18h时后封盖无菌石蜡油，置4℃冰箱保存。此法是最简单的保存菌种方法，最长可保存一年。（2）快速冷冻保存法将细菌在液体培养基中增菌取数环对数生长期的细菌加入含有小牛血清或无菌脱纤维羊血的培养基中再放入无菌玻璃珠数枚速冻后置-30℃以下低温冰箱保存。此法可长期保存菌种。（3）真空冷冻干燥法

是最可靠的菌种保藏方法，它具有不改变菌种性状和保存时间长等优点，但需有专门的冷冻干燥设备。菌种保藏中心多用此法。

第二节室间质量评价室间质量评价：

是通过国内负责室间质量控制的机构检查各实验室的工作质量，并接受国际检验质量控制机构的质量检查。同时制订符合本国国情且与国际标准相统一的质量检验标准。

（一）室间质量评价机构

我国负责此项工作的部门是卫生部临床检验中心及各省、市、自治区的临床检验中心定期或不定期的向下一级实验室发放模拟临床未知标本，评价各实验室在病原体的分离鉴定和药敏试验等方面的质量，对各实验室进行横向比较发现问题并进行指导和纠正。（一）室间质量评价机构我国负责此项工作的部门是卫生部临床检验中心及各省、市、自治区的临床检验中心。定期或不定期的向下一级实验室发放模拟临床未知标本，评价各实验室在病原体的分离鉴定和药敏试验等方面的质量，对各实验室进行横向比较发现问题并进行指导和纠正。（二）室间质量评价方法日常临床标本检验结果

评价指标为细菌分离率和细菌耐药率

定期评估

熟练程度的考核由质控管理机构发放模拟标本到受试实验室，实验室知道菌株的来源、检验的内容和时间。实验室完成鉴定后在规定时间内将结果反馈至质控管理机构，进行评价。但受试实验室通常对这些菌株特别重视，采用超过常规操作标准的方法进行鉴定，使上报结果不能准确反映实验室的真实水平。盲点试验由质控管理机构将模拟标本混入临床普通标本，送入实验室进行常规测定。实验室主管及实验操作者不知道哪一个标本是来自质控机构