实验四 酵母菌形态观察

实验四酵母菌形态观察1.学习并观察酵母菌的形态及出芽生殖方式，学习区分酵母菌的死活细胞的试验方法和子囊孢子的观察方法。2.掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。一、目的要求二、基本原理酵母菌是单细胞真核微生物，大小通常比常见的细菌大几倍甚至十几倍。大多数酵母以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖。有性生殖是通过接合产生子囊孢子。美蓝是一种无毒性的染料，氧化型呈蓝色，还原型呈无色。酵母菌的活细胞新陈代谢作用强，有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。而死细胞或代谢作用较弱的衰老细胞则呈蓝色或淡蓝色，借此即可对酵母菌的死、活细胞进行鉴别。

子囊孢子是子囊菌类真菌的有性生殖产生的有性孢子。在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。麦氏培养基有利于面包酵母子囊孢子的产生。子囊孢子壁厚，不易染色亦不易脱色，可采用芽孢染色法染色观察。子囊孢子呈现绿色，而子囊壁和营养细胞呈红色。子囊孢子三、实验材料

1.

菌种：啤酒酵母、面包酵母2.

培养基：豆芽汁斜面、麦氏培养基3.溶液或试剂：0.1%的美蓝染色液、芽孢染色液一套4.

仪器及其他用具：载玻片、显微镜等四、实验内容

1.水浸片法观察酵母菌的死活细胞（啤酒酵母）载片中央滴一滴0.1%的美蓝染液无菌操作取菌并将菌体与染液混匀盖上盖玻片镜检并绘图2.子囊孢子的观察（面包酵母）1.菌种的活化麦氏培养基上产孢培养制片（涂片、干燥、固定）2.孔雀绿初染10min95%乙醇脱色30s

水洗沙黄复染5min水洗干燥镜检(子囊孢子绿色、营养菌体和子囊呈红色)3.制美蓝水浸片观察面包酵母.染色法观察子囊孢子水浸片法观察子囊孢子

3放线菌的插片培养

插片培养法：倒平板（将融化的高氏合成1号培养基无菌操作倒平板）插片（将无菌的盖玻片以大约45°角插入培养基中（9片/皿/组）接种（无菌操作取灰色链霉菌或紫色链霉菌划线接种于插片和培养基接触处）培养（将插片平板倒置，28℃培养3~5天）放线菌的插片培养接种位置4霉菌小培养装片培养小室的灭菌：在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤纸片，再放一U形玻棒，其上放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖，包扎后于121℃灭菌30min，烘干备用。五、实验结果绘制啤酒酵母的芽殖，示芽体、营养体及死活细胞绘制面包酵母，示子囊孢子、营养菌体和子囊。六、思考题

1.在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？P43，2（2）2.如何区别酵母菌的营养细胞和释放出子囊外的子囊孢子？p44，2上次试验习题解答1.你认为制备细菌染色标本时，尤其应该注意哪些环节？P28，2（1）①载玻片要洁净无油迹，制片时取水和菌量不宜过多，涂片时应均匀涂开呈一薄层。②热固定温度不宜过高（酒精灯火焰上方3～4次），否则会改变甚至破坏细胞形态。③水洗时，不要直接冲洗涂面，而应使水从载玻片的侧面或背面流下。水流不宜过急、过大，以免涂面薄膜脱落。2.为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？P28，2（2）

制片未完全干燥就滴油观察，水油不相混溶，视野易滑动而无法清晰观察。3.你认为那些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？P30，2（1）

①

菌龄：要用活跃生长期的幼龄培养物②涂片：不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性③火焰固定：不以过热（酒精灯火焰上方3～4次）④脱色程度革兰氏染色乙醇脱色程度为实验成功的关键步骤。脱色不足，阴性菌误认为阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌，脱色时间一般为30s。4.说明芽孢染色法的原理。用简单染色法能否观察到细菌芽孢？P32，2（1）①芽孢染色的原理：细菌的芽孢壁厚、不易染色亦不易着色，用着色力强的染色剂孔雀绿通过加热或延长染色时间而使菌体和芽孢着色，菌体的染料经水洗后