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文档简介

实验九

植物基因组的RAPD分析1、了解常用的分子标记；2、掌握RAPD标记的分析方法。一、实验目的广义的分子标记（molecularmarker）：可遗传的并可检测的DNA序列或蛋白。包括蛋白质标记和DNA标记（狭义的分子标记）。蛋白质标记包括动植物蛋白、同工酶及等位酶。理想的分子标记：1.高多态性2.共显性遗传3.能明确辨别等位基因4.遍布整个基因组5.无基因多效性6.检测手段简单快速7.成本低廉8.重复性好二、实验原理RPADRAPD

randomamplifiedpolymorphicDNA

1990年，由美国杜邦公司的科学家Williams推出。原理：任意序列的8-10个碱基的寡核苷酸片段随机引物扩增;引物结合区域发生DNA片段插入、缺失或碱基突变导致PCR产物增加、缺少或发生分子量变化。RAPD实验流程

DNA提取 PCR扩增 产物检测 数据记录 0.2kb0.5kb0.3kb0.2kb0.5kb0.3kb×0.2kb0.3kb0.5kb品系1品系2RAPD的特点不需DNA探针简单快速,多态性高少量DNA样品,成本较低优点缺点显性遗传重复性不太高在共迁移问题三、仪器与材料材料：不同小麦DNA样品。试剂：MgCl2、引物、10XBuffer、dNTP、Taq酶、琼脂糖凝胶，EB，溴酚兰等。器具：移液枪，枪头，离心管，电泳仪，电泳槽等。四、实验程序（1）配制RAPD反应体系总体积：25µl物质H2O引物模板10XBuffer（含MgCl2）dNTPTaq酶浓度5µM20ng/µl25mM5U/µl体积(µl)12.81.542.52.00.2（2）RAPD扩增程序预变性：94ºC5min变性：94ºC30s退火：37ºC1min30个循环延伸：72ºC1min最后一个循环结束后在72ºC延伸10min（3）PCR扩增产物用1.2％的琼脂糖凝胶电泳检测（溴化乙锭染色）。电泳结果在UV紫外凝胶系统上照相观测。结果利用DPS数据处理系统处理结果。[实验注意事项]：配制PCR反应体系过程中所用试剂的量一定要准确；所有的配制操作都应该在冰

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