杨爱平FACSCanto流式细胞仪原理

FACSCantoⅡ流式细胞仪原理及应用杨爱平主要内容什么是流式细胞仪？流式细胞仪可告诉我们—细胞相关知识流式细胞术的应用流式细胞术临床检测：TBNK、HLA-B27流式荧光补偿知识（略）什么是流式细胞仪？在流动的状态中检测细胞各种物理及生物特征的一种仪器；InjectorTipFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid聚焦的激光光束流式细胞仪特点及检测标本特异性强，灵敏度高，速度快，并能实现多参数分析；可检测的样本种类多样(1)外周血，骨髓，细针穿刺，洗脱液，实体组织，培养细胞(2)血清、血浆、培养上清、细胞裂解液FACSCanto

II流式细胞仪系统组成流式细胞仪液流车（鞘液、shutdown液、cleaning液、工作液）工作站（结果分析、处理系统）FACSCantoⅡ简介配置空冷激光两根激光:488nm、633nm、光路固定，无需调校液流系统信号检测系统八角形和三角形光学收集系统，将光信号转换成电信号电子系统将电信号转换成数字化信号磁珠分选常用荧光染料的特性荧光染料激发波长(nm)发射波长(nm)用途颜色*FITC488525免疫荧光绿色(CD3)*PE(RD1)488575免疫荧光橙色(CD4)*PerCP 488 670免疫荧光深红(CD16+56)APC633 670免疫荧光红色PI488620DNA染色橙红ECD488620免疫荧光橙红PeCy5488675免疫荧光红*最常用三种荧光染料荧光信号的特征常见荧光染料的发射波长

常用荧光染料(488nm,633nm激发)Fluorescein

Isothiocyanate(FITC)异硫氰酸荧光素Phycoerythrin(PE)藻红素Allophycocyanin(APC)异藻蓝蛋白Peridinin-ChlorophyllProtein(PerCP)多甲藻黄素-叶绿素蛋白TandemDyesPE-TexasRed(ECD)PE-Cy5(PC5)PE-Cy5.5(PC5.5)(futures)PE-Cy7(PC7)(futures)FACSCantoⅡ信号检测组件光学滤片用于调整光谱的分布。当光子遇到滤片时，光子或通过滤片，或被滤片吸收，或被滤片反射。长通滤片（LP）：长于设定波长的光通过，并反射短于设定波长的光带通滤片：允许一定带宽波长的光通过。短通滤片（SP):短于设定波长的光通过，并反射长于设定波长的光流式细胞仪如何检测细胞指标?细胞的相对大小及表面积（前向角散射光信号，FSC）细胞的相对颗粒性及内部结构的复杂性（侧向散射光信号，SSC）相关的荧光强度前向角散射光信号FSC侧向角散射光信号SSC散射光信号的特征红细胞裂解的全血液流系统-样本流速样本流速的选择高流速：一般用于定性分析，如免疫分型。采集速度快,但分辨率低.低流速：一般用于对分辨率要求较高的分析，如DNA分析。流式细胞仪可以告诉我们什么？细胞内和细胞外发生了什么事件？流式细胞术的应用细胞结构细胞大小细胞颗粒细胞表面积核浆比例DNA含量和周期RNA含量蛋白质含量……细胞功能细胞表面/胞浆/核的特异性抗原细胞活性细胞内/外因子激素结合位点、细胞受体蛋白磷酸、PH、钙离子浓度……细胞生理学研究细胞相对大小和颗粒性分析细胞周期分析DNA含量分析-PI染色细胞周期分析DNA含量分析细胞凋亡细胞膜分析-PS外翻

PS（磷脂酰丝氨酸）正常暴露在胞膜的内表面，凋亡时，PS外翻向细胞外表面。重组蛋白Annexin-V可与PS结合淋巴细胞亚群分析T淋巴细胞（CD3+），与细胞免疫有关总T