第二章实验技术基础

第二章实验技术基础第一节样品的采集与保存第二节样品的制备和前处理技术第三节试验方法原理及方法选择第四节试验误差及消除方法第五节试验数据的整理和处理复习思考题课前复习题1、2、3返回2023/2/62第一节样品的采集与保存一、样品采集与保存的重要性和要求二、样品采集的基本术语和基本程序三、样品的采集四、样品运输和保存返回2023/2/63一、样品采集与保存的重要性和要求1.采样的含义及重要性（1）含义从某原料或产品的总体中抽取样品的过程为采样。扦样：从一批受检粮油中均匀地、有代表性地扦取原始样品的过程。2023/2/64一、样品采集与保存的重要性和要求1.采样的含义及重要性（2）重要性试验是采样和制样的结果，样品必须很好地代表整个货批的任何一方面待分析的质量。否则，再先进的分析设备、再精确的测试方法、再准确的试样分析结果，都将毫无意义。采样是分析工作的基础，正确的采样方法、合理的保存和及时送检是保证食品质量与安全分析质量的前提。2023/2/65一、样品采集与保存的重要性和要求2.样品采集与保存的要求（1）具有充分的代表性（2）方法不得随意（3）执行操作规范（4）强调真实性有些样品在采样、运输和保存中易受外界因素影响而变质，必须严格保护样品以减少外界因素对样品原始特性的改变。对于易变化的样品，应强调即时采样，即时分析。2023/2/66一、样品采集与保存的重要性和要求（5）把握典型性。在食品安全监测中，对于怀疑被污染的原料、产品和商品，应采集接近污染源和易受污染的典型样品；对于发生中毒或怀疑有毒的原料、产品和商品，应采集与中毒者有关的典型样品；对于发生掺假或怀疑掺假的原料、产品或商品，应按可能的线索提示，采集有可能揭露掺假的典型样品。2023/2/67二、样品采集的基本术语和基本程序（一）基本术语原始样品：按采样规则和操作要求，从待测原料、产品和商品的一个检验批或货批的各个部位采集的分样（又称小样）均匀混合在一起形成的样品。固体样品一般不少于1kg，液体不少于4L。检验批：是进行技术检验的一个批量，也是抽样检验的一个母体。一般一个生产批即为一个检验批。但当生产批量很大而生产周期又很长时，可以按预先规定的方法将一个生产批划分为若干个检验批。但不同的生产批不能合并为一个检验批。货批：同一货批指相同品名、相同物品、相同来源、相同包装、甚至相同生产批次的物品构成的货物群体。2023/2/68二、样品采集的基本术语和基本程序（一）基本术语平均样品：将原始样品按一定的均匀缩分法分出的作为全面检验用的样品。平均样品量应不少于试验样品的4倍，总量不得少于0.5kg（固体）或2L（液体）。2023/2/69二、样品采集的基本术语和基本程序（一）基本术语缩分：指按一定的方法，不改变样品的代表性而缩小样品量的操作，一般在将原始样品转化为平均样品时使用。颗粒状样品采用四分法。液体样品的缩分只要将原始样品搅匀或摇匀，直接按平均样品的需要量倒取或吸取即可。不均匀的大个样品的缩分：先按大小分类，然后将尺寸同类的样品缩分，最后把各类缩分样再混合，构成平均样品或直接构成试验、复检和保留样品。2023/2/610二、样品采集的基本术语和基本程序（一）基本术语四分法示意图2023/2/611二、样品采集的基本术语和基本程序（一）基本术语套斗分样器2023/2/612二、样品采集的基本术语和基本程序（一）基本术语试验样品：由平均样品分出用于全部项目检验用的样品。总量不少于全部检验项目需用量（设计各项目检验需要量时要考虑全部平行试验）。标准样品：由省级主管部门授权制备的成品粮油标准样品。2023/2/613二、样品采集的基本术语和基本程序（一）基本术语标本样品（陈列样品）：将各优良品种制成标本陈列于实验室内以作研究或供参观用，称为标本样品，又称陈列样品。复检样品：由平均样品分出用于复检用的样品。量与试验样品相同。保留样品：由平均样品分出用于在一定时间内保留，以备再次检验用的样品。量与试验样品相同。2023/2/614二、样品采集的基本术语和基本程序（二）基本程序需检验的批量农产品原始样品平均样品采样缩分复检样品保留样品试验样品2023/2/615三、样品的采集（一）液体样品的采集散装批量样品的采集在批量产品的每一大储存容器中，于不同深度、不同部位，分别采集每份约0.1～0.2L的5份独立样品（小样），将5份样品充分混合成约0.5～1L的混合样品。如某一储存容器中采出的样品感官测定异常，则应单独留样。2023/2/616三、样品的采集（一）液体样品的采集2.包装样品的采集（1）对于铁桶、木桶等大包装液体样品，如果未规定检验批量，可以一货批中随机抽取数个（数量一般为一货批总包装件数的5％左右）包装。用采样管在每一抽取的包装内上、中、下部分分别吸取0.1～0.2L样品，如果感官无异常，将各包装抽取的样品充分混合，从中再取2～4L的混合样品作为原始样品。2023/2/617三、样品的采集（一）液体样品的采集2.包装样品的采集（2）对于内部包装为盒、瓶、罐等，外部包装为箱等液体样品，如果没有规定检验批，一般可随机抽取（x为该货批的总箱数）箱，然后从每箱中随机抽出1个小包装，合并为原始样品。2023/2/618三、样品的采集（二）固体样品的采集1.散装批量样品的采集在散装批量颗粒或粉末产品的每一大储存器中，于不同深度、不同部位，分别采取每份约0.1～0.2kg的5～10份样品，将这些样品充分混合成约0.5～2.0kg的混合样品。2023/2/619三、样品的采集（二）固体样品的采集2.包装样品的采集一般对于内部包装为盒、袋、包等，外部为纸箱、塑料箱等固体样品，都规定了检验批量盒采样量。如果没有规定检验批，一般可随机均匀抽取箱（x为该货批的总箱数），然后从每箱中随机抽出一个小包装，合并为一检验批的原始样品。2023/2/620三、样品的采集（二）固体样品的采集2.包装样品的采集在总货批量相对较小时，常将总货批作为一个检验批，采集的包装数量一般为该货批总包装数的5％，最少为5个，最多为15个。如果总包装数少于5个，则打开每一外包装采集，每箱中抽取的小包装视小包装的大小而定，最少取一包。将抽出的样品合并作为原始样品。2023/2/621三、样品的采集（三）流水生产线上的采集流水作业线上的取样位点一般都设在作业线上的一定位置，每隔一定时间，从该位置取出流经此位置的一件或一定量的样品作为小样，然后将一定时间范围内的小样合并，就形成原始样品。2023/2/622三、样品的采集（四）微生物检验采样采样用具、容器灭菌方法（1）玻璃吸管、长柄勺、长柄匙、采样容器和盖子，要单个用纸包好，0.1MPa高压蒸汽灭菌30min，之后干燥密闭保存待用。（2）采样用的棉拭子、规板、生理盐水、滤纸等，要分别用纸包好，0.1MPa高压蒸汽灭菌30min，之后干燥密闭保存待用。（3）镊子、剪子、小刀等金属用具，用前在酒精灯上直接用火焰灭菌。2023/2/623三、样品的采集采样时的无菌操作（1）采样前，操作人员用75％酒精棉球进行手部消毒。（2）对于包装食品，采取原始样品时，至少小包装暂时不要打开。必须打开包装进一步采样时，包装的采样口处及周围用75％酒精棉球消毒。（3）对于散包装物品，采样口处及周围也需要用75％酒精棉球消毒。2023/2/624三、样品的采集采样时的无菌操作（4）固体、半固体、粉末状样品可用灭菌勺或刀采样，液体样品用灭菌玻璃吸管采样，将其转入灭菌样品容器后，容器口经灭菌消毒后密封。（5）采后样品必须在4h以内进行检验，否则，必须冷藏或冷冻保存。2023/2/625三、样品的采集（五）采样注意事项一切采样工具、容器、塑料袋、包装纸等都应清洁、干燥、无异味、无污染。采样后，对每件样品都要做好记录，采样时样品应及时贴上标签，标签上应注明货主、品名、检验批编号、样品编号、采样日期、地点、堆位、生产日期、班次、采样负责人。2023/2/626三、样品的采集（五）采样注意事项如果发现货品有污染的迹象或属于感官异常样品，应将污染或异常的货品单独抽样，装入另外的容器内，贴上特别的标签，详细记录污染货品的堆位及大约数量，以便分别化验。生鲜、易腐的样品应在采集后4h内迅速送到实验室进行分析或处理，应尽量避免样品在分析前发生变化。盛装样品的容器应当是隔绝空气、防潮的玻璃容器或其它适宜和结实的容器。2023/2/627三、样品的采集（六）采样记录现场采样记录采样前，采样负责人必须了解受检食品的原料来源、加工方法、运输保藏条件、生产和销售中各环节的卫生状况。如外地进入的食品，应审查该批食品的有关证件，包括商标、送货单、质量检验证书、卫生检疫证书、监督机构的检验报告等。随后对受检食品的品名、数量、包装类型及规格、样品状态、现场环境等进行了解，并对该批食品总体进行初步感官检查。然后按实际样品的适宜采集方法和采样规则，正式开始采样。2023/2/628三、样品的采集（六）采样记录现场采样记录（1）物主（被采样单位或法人）（2）品名、数量、商标、包装类型及规格、样品状态。（3）物品产地、生产厂家、生产日期、生产批号。（4）送货单、质检合格单、卫检合格单等证件编号。（5）采样地点、现场环境条件。2023/2/629三、样品的采集（六）采样记录现场采样记录（6）初步的总体感官检查结果（如包装有无破损、变形和受污染、散装品外观有无霉变、生虫、受污染等异常现象）。（7）采样目的、采样方法和方式。2023/2/630三、样品的采集（六）采样记录现场采样记录（8）各检验批或货批的编号、原始样品编号、特殊或异常样品编号及其观察现象。（9）采样单位盖章、采样负责人签字、采样日期。（10）物主负责人签字。2023/2/631三、样品的采集（六）采样记录

2.样品封签和编号每件样品采好后，立即由采样人封签，并在包装外贴好标签，明确标明样品编号、品名、来源、数量、采样地点、采样人和采样日期；采样全部完毕并整理好现场后，将同一检验批或货批的每件样品统一装在固定的包装内，由采样人再次封签，并贴好标签，注明品名、来源、采样地点、检验编号、采样人和采样日期。异常和特殊样品应独立封签和独立贴标（标签特征最好与其他的不同）。2023/2/632三、样品的采集（六）采样记录3.采样单采样单一式两份，一份交被采样单位或法人，一份由采样单位留存。或者根据实际情况，确定采样单数量。采样单内容包括：物主名称品名、数量、编号物品产地、生产厂家、生产日期、生产批号检验批数量和每一检验批采得样品数量采样单位（盖章）、采样人（签字）、采样日期物主负责人（签字）2023/2/633二、样品采集的基本术语和基本程序思考题：根据以上学习的基本采样知识，请分别说明大豆（散装）、含有小包装的豆奶粉、矿泉水（瓶装）和散装豆油的样品采集方法。2023/2/634四、样品运输和保存（一）样品运输不论是将样品送回实验室，还是将样品送到别处去分析，都要考虑和防止样品变化。生鲜样品要先冻结后再用冰壶运送，易挥发样品要密封运送，水分较多的样品要装在几层塑料食品袋内封好，干燥而挥发性很小的样品可用牛皮纸袋盛装，但牛皮纸袋不防潮，还需要有防潮的外包装。所有样品的外包装要结实而不易变形和损坏。此外，运输过程中要注意车辆等运输工具的清洁，注意车站、码头有无污染源，避免样品污染。2023/2/635四、样品运输和保存（二）样品保存采用的样品应尽快分析，复检样品和保留样品要保质保存。保存样品时同样要严格注意卫生，防止污染。返回2023/2/636第二节样品的制备和前处理技术一、样品制备和前处理的定义和目的二、样品制备三、样品的前处理返回2023/2/637一、样品制备和前处理的定义和目的1.样品制备和前处理的定义样品的制备和前处理，两者间没有本质上的区别，有时统称为样品的前处理，是指样品经一些准备性处理转化为最终分析试样的技术过程。样品制备：是一些简单的处理，包括样品整理、清洗、匀化和缩分等。前处理：分析试样需经过进一步样品前处理才能作为最终分析试样，这是进一步的处理就是侠义的前处理。2023/2/638一、样品制备和前处理的定义和目的2.目的去掉试验样品中不值得分析的部分和一部分杂质，保证分析试样成分均匀和试样中的待检物含量至少高于分析方法的检出限。样品制备工具2023/2/639二、样品制备面粉、淀粉、砂糖、奶粉、咖啡等粉末状和较细的颗粒状样品只要充分搅拌均匀就可作为最终分析样品。谷物、大豆、坚果、花椒等天然颗粒状样品的制备包括去杂和去壳，有些检验项目还要求去麸、皮、籽、小梗等。饮料、油脂、炼乳、蜂蜜、酱油、糖浆等液态食品的样品制备方法主要是充分混匀，如果这些样品中有结晶、结块或很稠时，可在不高于50℃的水浴中边加温边搅拌使充分匀化。2023/2/640二、样品制备4.对于个体过大的固体，如香肠、水果、面包、动物、瓜、薯类等，设法减小个体体积才能进一步均匀化，也就是是样品制备时的缩分。缩分的基本要点是不断中分和间隔切分。5.整鱼、贝、畜、禽、蛋及生鲜水果、瓜、蔬菜、薯类等的样品制备时，先要去除不可食部分，再进行分析。2023/2/641二、样品制备6.罐头食品制样时，将罐头打开，固体和汤汁分别称重，小心去除固体中的不可食部分后再称重，按可食固体和液体的质量比各取一定量，混合后于捣碎机内捣碎匀化。7.水果、蔬菜、薯类等生鲜农产品分析前一般必须清洗和去皮，但分析农药残留时，原则上不宜清洗和去皮，得仔细小心地将泥土简单清去。2023/2/642三、样品的前处理（一）提取（二）有机物破坏法（三）沉析（四）层析（五）透析（六）蒸馏法（七）浓缩干燥2023/2/643三、样品的前处理（一）提取含义：即待测物质与样品分离的过程。主要使用无机或有机溶剂从样品中提取被测物。（1）浸提：如果样品为固体，称为浸提。（2）萃取：如果样品为液体，称为萃取。2.目的：去除分析干扰物和富集待测物质。3.原理：溶质在互不相溶的介质中的扩散分配。将溶剂加入样品中，经过充分混合和一定时间的等待，溶质就会从样品中不断扩散进入溶剂，直至扩散分配平衡。2023/2/644三、样品的前处理（一）提取分配系数：扩散分配平衡时，溶质在原介质和溶剂中的浓度比称为分配系数（k）。一般为提高提取效率和节约溶剂，应采用每次少量加入溶剂和多次提取的方法。2023/2/645三、样品的前处理（一）提取Mr=Mo·（Vw/（KVo+Vw））n

其中，Mo——样品中溶质的起始含量

Mr——经n次等溶剂量提取后，溶质在原介质中的保留量

K——分配系数

Vw——提取所用的样品体积

Vo——一次提取所用的溶剂量（体积）认真观察后，可以看出，括号内是一真分数，所以随着n的增大，Mr将迅速缩小。2023/2/646三、样品的前处理（一）提取例如，如果Vw为100g，K为100，Vo为20ml，n为5次，则Mr/Mo为2.4×10-7。也就是说，经过5次提取后，溶质在原样品中的保留量与起始量之比已小到2.4×10-7。同样可以算出，如果要求经过一次提取就达到相同的效果，则需要4000ml的溶剂。2023/2/647三、样品的前处理（一）提取4.溶剂的选择应选择对被测物和干扰物有尽可能大的溶解度差异的溶剂，还应避免选择两介质难以分离、黏度高和易产生泡沫的溶剂。要根据分析样品和化合物的特性来选择。一般原则：“相似相溶”原理；溶剂对样本有较强的渗透能力；沸点45～80℃；不能与样本发生反应作用；毒性低，价格便宜。2023/2/648三、样品的前处理（一）提取4.溶剂的选择（1）难溶于水的被测物石油醚、乙醚、氯仿、二氯甲烷、苯、四氯化碳等作提取溶剂。（2）易溶于水的被测物水、酸性水溶液、碱性水溶液、乙醇、甲醇、丙酮、乙酸乙酯等作提取溶剂。2023/2/649（一）提取5.几种常用的提取方法（1）浸渍、漂洗法对附着在样本表面的成分的提取效果较好。（2）振荡法（3）匀浆、捣碎法2023/2/650（一）提取

5.几种常用的提取方法（4）索氏提取器法少量多次萃取用该方法。用它提取固体样品中的油脂、脂溶性色素、脂溶性纤维素等十分普遍，常用石油醚、乙醚等作为提取剂，样品受热温度低，提取效率高，操作方便，但是花费时间长。三、样品的前处理2023/2/651三、样品的前处理（一）提取（4）索氏提取器法2023/2/652三、样品的前处理（一）提取（5）超临界CO2萃取技术和液态CO2提取技术主要用于提取香精油、保健成分和其它天然有机成分。这两种提取方法使用的溶剂（CO2）对原介质和待提取物化学惰性高、在最终样品中无残留，提取效率高、样品不必过于破碎，因此是高级的提取方法。2023/2/653三、样品的前处理（一）提取（5）超临界CO2萃取技术和液态CO2提取技术超临界流体萃取分离过程是利用超临界流体的溶解能力与其密度的关系，即利用压力和温度对超临界流体溶解能力的影响而进行的。当气体处于超临界状态时,成为性质介于液体和气体之间的单一相态,具有和液体相近的密度,粘度虽高于气体但明显低于液体,扩散系数为液体的10～100倍;因此对物料有较好的渗透性和较强的溶解能力,能够将物料中某些成分提取出来。2023/2/654三、样品的前处理（一）提取（5）超临界CO2萃取技术和液态CO2提取技术液态CO2提取技术除了要求有低温条件以保证CO2不大量挥发损失外，其他方面与一般的溶剂提取无任何差别。超临界CO2萃取技术则要求用专门的仪器，这种仪器既包括提取室，又包括分离室。CO2在提取室内以超临界状态与样品接触，达到饱和提取后，转入分离室，在脱离超临界状态的同时CO2与提取的物质分离，此后，CO2被重新转入超临界状态重复使用，如此反复提取与分离，直到提取与分离彻底完成。2023/2/655压缩机

萃取釜

制冷MVC-760L

二氧化碳循环泵

2023/2/656三、样品的前处理2023/2/657三、样品的前处理（一）提取（5）固相萃取技术固相萃取就是利用固体吸附剂将液体样品中的目标化合物吸附，与样品的基体和干扰化合物分离，然后再用洗脱液洗脱或加热解吸附，达到分离和富集目标化合物的目的。

2023/2/658三、样品的前处理自动固相萃取仪2023/2/659三、样品的前处理（一）提取（7）固相微萃取技术这一技术使用表面涂有选择性吸附高分子材料的石英纤维作为提取器，可以直接将其插入样液，也可将其插入样品瓶的顶空，通过一段时间的扩散达到分配平衡，然后将石英纤维直接插入气相色谱或液相色谱的进样器，在那里对解析萃取的待测物进行分析。60Fiber-SPME三、样品的前处理2023/2/661三、样品的前处理（8）超声波辅助萃取优点：价廉快速，简便安全，批量处理样品。2023/2/662三、样品的前处理（二）有机物破坏法分析测定食品中重金属和其他矿物质时，常首先将有机物破坏。尤其是进行微量元素分析时，由于这些成分可能与食品中的蛋白质或有机酸结合牢固，严重干扰分析结果的精密度和准确性。破除这种干扰的方法就是在不损失矿物质的前提下全盘破坏有机质。有机物破坏法分为以下两类：2023/2/663三、样品的前处理（二）有机物破坏法1.干法（灰化法）：将样品灰化。用灰分来测定这些元素。该法的优点在于破坏彻底、操作简便、使用试剂少，适用于除砷、汞、铅、锑等以外的金属元素的测定。等离子灰化机2023/2/664三、样品的前处理（二）有机物破坏法干法灰化又分直接灰化法（用于含Cu、Pb、Zn样品中的有机物破坏）Ga(OH)2法（用于含砷有机样品的破坏）NaOH法（适用于含锡样品的有机物破坏）2023/2/665三、样品的前处理（二）有机物破坏法2.湿法在酸性溶液中，利用强氧化剂使有机质分解的方法称为湿法。该法的优点是使用的分解温度低于干法，因此减少了金属元素挥散损失的机会，应用范围较为广泛。2023/2/666三、样品的前处理（二）有机物破坏法2.湿法按使用氧化剂的不同，湿法又被分为以下几类：（1）硫酸——硝酸消化法（2）高氯酸——硝酸——硫酸消化法（3）高氯酸（或双氧水）——硫酸消化法（4）硝酸——高氯酸消化法2023/2/667三、样品的前处理（三）沉析在食品质量与安全分析实验中，沉析分离技术是经常用到的。通常用沉析法去除溶液中的蛋白质、多糖等杂质。促进蛋白沉析的方法通常由以下几种：盐析——加入NaCL或（NH4）2SO4有机溶剂沉析法——加入乙醇或丙酮等电点沉析2023/2/668三、样品的前处理（三）沉析1、盐析在存有蛋白质的液体分散系中加入一定量的氯化纳或硫酸铵，可以使蛋白质沉析下来。盐析中的加盐可以是粉状盐，也可以是饱和盐溶液。调解适当的pH和温度，可达到很好的盐析效果。2023/2/669三、样品的前处理（三）沉析2、有机溶剂沉析法可用于蛋白质和多糖的沉析。在存有蛋白质和（或）多糖的液体分散系中加入一定量的乙醇或丙酮等有机溶剂，可以降低介质的极性和介电常数，从而降低蛋白质和（或）多糖的溶解度，就会使蛋白质和（或）多糖沉析下来。由于向多水分散系中加入有机溶剂是放热反应，这种沉析要在低温下进行。2023/2/670三、样品的前处理（三）沉析3、等电点沉析蛋白质的电荷状况与介质的pH有密切关系，当pH达到蛋白质的等电点时，蛋白质就会发生沉析，这样可使它与其他还原性物质分开。2023/2/671三、样品的前处理（四）层析目的：样品的净化、同类物质的分级、被测组分的富集。原理：样品组分随流动相进入层析床，在床内与固定相接触，经吸附、离子交换、分子筛或在两相分配平衡等作用，分别在床内不同位置展成条带，再经随后的洗脱作用先后脱离床体，经分别收集，待测组分就得净化，不同类甚至同类不同种的物质就得到分离。层析可分为分为柱层析和薄层层析。2023/2/672三、样品的前处理（四）层析3.柱层析（1）含义：将固定相放在水中分散后，一次性加入柱子，保证柱床中始终充满水，可以有效对样品进行分离的方法。（2）常用固定相硅胶或氧化铝细粉、离子交换树脂、多糖凝胶和改性纤维素。（3）影响柱层析效果的因素选定的固定相选定的展开液和洗脱液的极性或其pH和离子强度相对于样品量的柱径和柱长装柱和进样的操作水平洗脱的速率2023/2/673三、样品的前处理柱层析2023/2/674三、样品的前处理（四）层析4.薄层层析（1）含义：将固定相铺在玻璃板或塑吸板上形成薄层，让展开剂（流动相）带动着样品由板的一端向另一端扩散。（2）常用固定相硅胶和氧化铝（3）薄层层析的显迹方法物理法——紫外灯照射法化学法——蒸汽显迹和喷雾显迹薄层色谱扫描仪法——可用于显迹，也可以用于定量2023/2/675三、样品的前处理薄层层析2023/2/676三、样品的前处理（五）透析透析膜是一种半透膜，如玻璃纸、肠衣和人造的商品透析袋，它们只允许小分子透过。（六）蒸馏法利用物质间不同的挥发性，通过蒸馏将它们分离。2023/2/677三、样品的前处理定氮蒸馏装置蒸馏装置2023/2/678三、样品的前处理（七）浓缩干燥由于提取、层析等前处理过程引入了许多溶剂，可能会降低待测组分的浓度或不适宜直接进样，后续分析有可能需要将这些溶剂部分或全部去除，此过程称为浓缩或干燥。自然挥发法可以采用旋转蒸发器减压蒸干或浓缩可以采用冷冻干燥样品少时，可以采用氮气吹干法，易氧化、蒸汽压高的样品不能采用2023/2/679三、样品的前处理旋转蒸发器2023/2/680三、样品的前处理冷冻干燥机2023/2/681三、样品的前处理返回氮气吹干仪2023/2/682第三节试验方法原理及方法选择一、试验方法概述二、试验方法原理返回2023/2/683一、试验方法概述方法主要有：感官分析方法——最初的和最适宜现场检验的方法化学分析方法——原理清晰、结果准确、所需设备少、具体方法积累多仪器分析方法——灵敏度高、速度快、对于微量多组分分析更为适宜生物试验方法——传统生物分析速度慢、结果准确、需设备简单现代生物分析灵敏度高、速度快、结果可靠2023/2/684二、试验方法原理（一）食品质量感官鉴别法食品质量感官鉴别的基本方法，其实质就是依靠视觉、嗅觉、味觉、触觉和听觉等来鉴定食品的外观形态、色泽、气味、滋味和硬度（稠度）。不论对何种食品进行感官质量评价，上述方法总是不可缺少的，而且常是在理化和微生物检验方法之前进行。2023/2/685二、试验方法原理（一）食品质量感官鉴别法1.视觉检验

通过被检物作用于视觉器官所引起的反映对食品进行评价的方法称为视觉检验。这是判断食品质量的一个重要感官手段。食品的外观形态和色泽对于评价食品的新鲜程度、食品是否有不良改变以及蔬菜、水果的成熟度等有着重要意义。视觉鉴别应在白昼的散射光线下进行，以免灯光隐色发生错觉。鉴别时应注意整体外观、大小、形态、块形的完整程度、清洁程度，表面有无光泽、颜色的深浅色调等。2023/2/686二、试验方法原理（一）食品质量感官鉴别法1.视觉检验在鉴别液态食品时，要将它注人无色的玻璃器皿中，透过光线来观察；也可将瓶子颠倒过来，观察其中有无夹杂物下沉或絮状物悬浮，据此判断食品是否受到了污染或变质。检验时应从外往里检验，先检验整体外形，如罐装食品有无鼓罐或凹罐现象；软包装食品是否有胀袋现象等，再检验内容物，然后再给予评价。2023/2/687二、试验方法原理（一）食品质量感官鉴别法2.嗅觉检验通过被检物作用于嗅觉器官而引起的反映评价食品的方法称为嗅觉检验。人的嗅觉器官相当敏感，甚至用仪器分析的方法也不一定能检查出来极轻微的变化，用嗅觉鉴别却能够发现。2023/2/688二、试验方法原理（一）食品质量感官鉴别法1.嗅觉检验当食品发生轻微的腐败变质时，就会有不同的异味产生。如核桃的核仁变质所产生的酸败而有哈喇味，西瓜变质会带有馊昧等。食品的气味是一些具有挥发性的物质形成的，受温度的影响较大，所以在进行嗅觉鉴别时常需稍稍加热，但最好是在15℃～25℃的常温下进行，因为食品中的气味挥发性物质常随温度的高低而增减。在鉴别食品的异味时，液态食品可滴在清洁的手掌上摩擦，以增加气味的挥发；识别畜肉等大块食品时，可将一把尖刀稍微加热刺入深部，拔出后立即嗅闻气味。2023/2/689二、试验方法原理（一）食品质量感官鉴别法1.嗅觉检验嗅觉器官长时间受气味浓的物质刺激会疲劳，灵敏度降低，因此，食品气味鉴别的顺序应当是先识别气味淡的，后鉴别气味浓的，检验一段时间后，应休息一会，以免影响嗅觉的灵敏度。在鉴别前禁止吸烟。

2023/2/690二、试验方法原理（一）食品质量感官鉴别法3.味觉检验通过被检物作用于味觉器官所引起的反应评价食品的方法称为味觉检验。感官鉴别中的味觉对于辨别食品品质的优劣是非常重要的一环。味觉器官不但能品尝到食品的滋味如何，而且对于食品中极轻微的变化也能敏感地察觉。如做好的米饭存放到尚未变馊时，其味道即有相应的改变。2023/2/691二、试验方法原理（一）食品质量感官鉴别法3.味觉检验味觉是由味蕾产生的，味蕾的灵敏度与食品的温度有密切关系。进行食品的滋味鉴别时，最好使食品处在20℃～45℃之间，以免温度的变化会增强或减低对味觉器官的刺激。味觉检验前不要吸烟或吃刺激性较强的食物，以免降低感觉器官的灵敏度。检验时取少量被检食品放入口中，细心品尝，然后吐出，用温水漱口。几种不同味道的食品在进行感官评价时，应当按照刺激性由弱到强的顺序，最后鉴别味道强烈的食品。在进行大量样品鉴别时，中间必须休息，每鉴别一种食品之后必须用温水漱口。对已有腐败迹象的食品，不要进行味觉检验。

2023/2/692二、试验方法原理（一）食品质量感官鉴别法4.触觉检验通过被检物作用于触觉器官所引起的反映评价食品的方法称为触觉检验。触觉检验主要是借助手、皮肤等器官的触觉神经来检验食品的膨、松、软、硬、弹性（稠度），以评价食品品质的优劣。例如，对谷物可抓起一把，凭手感评价其水分；根据鱼体肌肉的硬度和弹性，常常可以判断鱼是否新鲜或腐败；评价动物油脂的品质时，常须鉴别其稠度等。在感官测定食品的硬度（稠度）时，要求温度应在15℃～20℃之间，因为温度的升降会影响到食品状态的改变。2023/2/693二、试验方法原理（一）食品质量感官鉴别法此外，在品尝食品时，除了味觉外，还有脆性、粘性、弹性、硬度、冷热、油腻性和接触压力等触感。进行感官检验时，通常先进行视觉检验，再进行嗅觉检验，然后进行味觉检验及触觉检验。2023/2/694二、试验方法原理（二）化学分析法滴定法（1）分类酸碱滴定法络合滴定法氧化还原滴定法沉淀滴定法2023/2/695二、试验方法原理（2）主要步骤写出滴定反应方程式，确定被测成分与滴定成分的定量关系配制标准溶液将样品配成溶液，该溶液同时作为反应介质，因此，消除干扰和副反应的物质也应在适当的时候加入溶液用标准溶液滴定样品溶液计算2023/2/696二、试验方法原理（二）化学分析法2.紫外——可见分光光度法（1）原理利用某些物质的分子吸收200～800nm光谱区的辐射来进行分析测定的方法。这种分子吸收光谱产生于价电子和分子轨道上的电子在电子能级间的跃迁，广泛用于无机和有机物质的定性和定量测定。2023/2/697（2）紫外——可见分光光度计的简易结构光源单色器样品室检测器信号指示装置光源

在整个紫外光区或可见光谱区可以发射连续光谱，具有足够的辐射强度、较好的稳定性、较长的使用寿命。

可见光区：钨灯作为光源，其辐射波长范围在320～2500nm。紫外区：氢、氘灯。发射185～400nm的连续光谱。2023/2/698单色器

将光源发射的复合光分解成单色光并可从中选出任一波长单色光的光学系统。①入射狭缝：光源的光由此进入单色器；②准光装置：透镜或返射镜使入射光成为平行光束；③色散元件：将复合光分解成单色光；棱镜或光栅；④聚焦装置：透镜或凹面反射镜，将分光后所得单色光聚焦至出射狭缝；⑤出射狭缝。2023/2/699样品室

样品室放置各种类型的吸收池（比色皿）和相应的池架附件。吸收池主要有石英池和玻璃池两种。在紫外区须采用石英池，可见区一般用玻璃池。检测器

利用光电效应将透过吸收池的光信号变成可测的电信号，常用的有光电池、光电管或光电倍增管。结果显示记录系统检流计、数字显示、微机进行仪器自动控制和结果处理2023/2/6100光的吸收基本定律——朗伯-比尔定律透光率（透射比）Transmittance透光率定义：T取值为0.0%~100.0%全部吸收T=0.0%全部透射T=100.0%入射光I0透射光It2023/2/6101光吸收的基本定律(1)朗伯-比尔定律（Lambert-Beerlaw）

当一束平行单色光通过任何均匀、非散射的固体、液体或气体介质时，一部分被吸收，一部分透过介质，一部分被器皿的表面反射。如图所示，设入射光强度为I0吸收光强度为Ia，透过光强度为It，反射光强度为Ir。I‘0I‘rI‘tI‘a2023/2/6102Lambert-Beerlaw入射光强度透射光强度透光度吸光度摩尔吸光系数：L·mol–1·cm-1溶液厚度溶液浓度其物理意义：一定温度下，一定波长的单色光通过均匀的、非散射的溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度和厚度的乘积成正比。2023/2/6103二、试验方法原理（三）仪器分析法1.原子吸收光谱法（Atomicabsorptionspectroscopy）（1）原理原子吸收光谱法简称原子吸收，是基于被测元素基态原子在蒸汽状态对共振辐射的吸收进行元素定量分析的方法。原子吸收中基态原子吸收原子共振辐射光发生电子跃迁，检测波长范围在60～1250nm，这和紫外—可见分光光度法相同。2023/2/6104二、试验方法原理（2）原子吸收与紫外分光光度法的区别紫外中，由样品溶液中的分子吸收单色光而发生电子跃迁，在原子吸收中，是由样品在一定条件下转化产生的蒸汽态基态原子吸收原子共振辐射光而发生电子跃迁。紫外中，分子吸收单色光产生的是带状光谱，在原子吸收中，基态原子吸收原子共振辐射光产生的是线状光谱。紫外中，入射光是由氘灯、钨灯和单色器产生的单色光，在原子吸收中，入射光是由空心阴极灯产生的原子共振辐射光。2023/2/6105二、试验方法原理（3）原子吸收仪的构造

原子吸收分光光度计装置示意图

空心阴极灯原子化器检测器信号指示装置燃气和助燃气进样器2023/2/6106二、试验方法原理（4）操作步骤配制标准溶液配制样品试液开启仪器预热和调整灯电流开燃气和助燃气阀及时点火调节原子化温度标准溶液进样测定样品试液进样测定2023/2/6107二、试验方法原理（三）仪器分析法2.近红外光谱分析法（Nearintra－redspectoum，NIR）（1）波长范围700～2500nm（2）特点可用于水溶液样品，含水固体和泥浆状样品，样品可不经溶剂稀释，制备溴化钾片等处理而直接测定，速度快，效果优、无损、无污染、可进行多组分同时测定。分析对象多样，可以直接分析颗粒、粉末、片剂、纤维或是溶液、乳浊液甚至是活体的生物组织等。2023/2/61082.近红外光谱分析法（Nearintra－redspectoum，NIR）（3）近红外光谱仪的分类傅立叶变换声光扫描光栅扫描光电列阵固定光路型（4）工作过程近红外反射光谱分析——要求样品力度一致和表面光滑近红外投射光谱分析——可重复性较高，但灵敏度较低二、试验方法原理2023/2/6109二、试验方法原理（三）仪器分析法3、色谱法（1）概念和参数A.色谱法是一组相关分离方法的总称，这些方法包括两个相，一相是固定相，通常是表面积很大的多孔性固体或涂在固体表面上的高黏度的涂层；另一相是流动相，通常是液体或气体。2023/2/61103、色谱法

B.分配系数和分配比在色谱过程中，不同组分在固定相和流动相中差别分配的原因是它们的分配系数或分配比有差别，而这一差别可能来自两相对这些物质的物理吸附力、化学吸附力、溶解度、离子配对键合力、扩散阻力和特异性亲和力的不同。二、试验方法原理2023/2/6111B-1分配系数

在一定温度和压力下，一组分在固定相和流动相之间分配达平衡时的浓度比值。即：

K=一组分在固定相中的浓度/该组分在流动相中的浓度=Cs/CmK值除与自身本质、流动相、固定相和温度有关外，不受其他因素影响。二、试验方法原理2023/2/6112B-2分配比在一定温度和压力下，一组分在两相间分配达到平衡时，分配在固定相和流动相中的质量比。即：k=一组分在固定相中的质量/该组分在流动相中的质量=Ms/Mmk值越大，说明组分在固定相中的量越多，相当于色谱的分离系统（色谱柱）对组分的容量大，是衡量色谱柱对分离组分保留能力的重要参数。它不仅随柱温、柱压变化而变化，而且还与流动相及固定相的体积有关。

K=Ms/Mm=（Cs·Vs）/（Cm·Vm）二、试验方法原理2023/2/6113C气相和液相色谱中流动相和固定相状态的不同是色谱种类划分的主要依据。

C-1气相流动相为气体的称为气相。

C-2液相流动相为液体的称为液相。二、试验方法原理2023/2/6114D一组参数一组物质的色谱行为可用一系列参数描述，这些参数是检测器输出的该物质的色谱信号强度对时间做图所得到的色谱流出曲线的种种特征。二、试验方法原理烟叶中有机磷农药残留气谱图2023/2/6115二、试验方法原理色谱图色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信号对时间的曲线图，其纵坐标为信号强度，横坐标为保留时间。2023/2/6116二、试验方法原理（三）仪器分析法（色谱工作图）2023/2/6117从色谱图中，可得许多信息：1色谱峰的个数，可判断所含组分的最少个数；2根据色谱峰的保留值，可以进行定性分析；3根据色谱峰的面积或峰高，可以进行定量分析；4色谱峰的保留值及其区域宽度，评价柱效；5色谱峰两峰间的距离。二、试验方法原理2023/2/6118

死时间（tM）：不与固定相作用的气体（如空气）的保留时间；

调整保留时间（tR

＇）：tR＇=tR－tM

（三）仪器分析法（保留值的基本参保数）1.基线无试样通过检测器时，检测到的信号即为基线。2.保留值

（1）时间表示的保留值

保留时间（tR）：组分从进样到柱后出现浓度极大值时所需的时间；2023/2/6119

（2）用体积表示的保留值

保留体积（VR）：

VR=tR×F0F0为柱出口处的载气流量，单位：mL/min。

死体积（VM）：

VM=tM×F0

调整保留体积(VR＇)：

V

R＇=VR

－VM

2023/2/61203.相对保留值r21

组分2与组分1调整保留值之比：

r21=t´R2

/t´R1=V´R2/V´R1

相对保留值只与柱温和固定相性质有关，与其他色谱操作条件无关，它表示了固定相对这两种组分的选择性。2023/2/61214.区域宽度

用来衡量色谱峰宽度的参数，有三种表示方法：（1）标准偏差()：即0.607倍峰高处色谱峰宽度的一半。（2）半峰宽(Y1/2)：色谱峰高一半处的宽度Y1/2=2.354（3）峰底宽(Wb)：Wb=42023/2/6122二、试验方法原理2023/2/6123二、试验方法原理2023/2/6124二、试验方法原理1100型液谱2023/2/6125（LC-MS）二、试验方法原理2023/2/6126二、试验方法原理红外光谱仪2023/2/6127气相色谱二、试验方法原理2023/2/6128离子色谱二、试验方法原理1292023/2/6（四）现代生物技术方法酶联免疫吸附测定法核酸检验法1302023/2/6

经典的化学分析方法（滴定分析、重量分析、简单的吸光光度法）是以简单离子或分子为检测对象的常量或微量分析，面对生物体系成分复杂且待测物浓度较低的测试条件则往往无能为力。

于是，一系列针对生物体系中化学成分的测量方法应运而生。免疫化学分析即其重要成员，它将免疫学知识与化学分析手段有机结合，为生命体系中高特异性、超微量的分析提供了解决方法。酶联免疫吸附测定法1312023/2/6一、基本原理

它采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接，然后通过酶与底物产生颜色反应，用于定量测定。测定的对象可以是抗体也可以是抗原。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体（免疫吸附剂）②酶标记的抗原或抗体（标记物）③酶作用的底物（显色剂）酶联免疫吸附测定法1322023/2/6

测量时，抗原（抗体）先结合在固相载体上，但仍保留其免疫活性，然后加一种抗体（抗原）与酶结合成的偶联物（标记物），此偶联物仍保留其原免疫活性与酶活性，当偶联物与固相载体上的抗原（抗体）反应结合后，再加上酶的相应底物，即起催化水解或氧化还原反应而呈颜色。1332023/2/6

其所生成的颜色深浅与欲测的抗原（抗体）含量成正比。

这种有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察，也可以用分光光度计（酶标仪）加以测定。

其方法简单，方便讯速，特异性强。酶联免疫吸附测定法1342023/2/6二、酶结合物

酶结合物是酶与抗体或抗原,半抗原在交联剂作用下联结的产物。是ELISA成败的关键试剂，它不仅具有抗体抗原特异的免疫反应，还具有酶促反应，显示出生物放大作用，但不同的酶选用不同的底物，将得到不同的颜色反应。酶联免疫吸附测定法1352023/2/6酶底物显色反应

测定波长

辣根过氧化物酶邻苯二胺

四甲替联苯胺

氨基水杨酸

邻联苯甲胺

2,2‘-连胺基-2(3-乙基-并噻唑啉磺酸-6)铵盐

橘红色

黄色

棕色

兰色

蓝绿色492460449

425

642

碱性磷酸酯酶

4-硝基酚磷酸盐(PNP)

萘酚-AS-Mx磷酸盐+重氮盐黄色

红色400

500葡萄糖氧化酶

ABTS+HRP+葡萄糖

葡萄糖+甲硫酚嗪+噻唑兰黄色

深蓝色405420β-Ｄ－半乳糖苷酶

甲基伞酮基半乳糖苷(4MuG)

硝基酚半乳糖苷(ONPG)荧光

黄色

360,450

420

酶联免疫吸附测定法1362023/2/6ELISA的种类和变化

（一）双抗体夹心法（二）间接法（三）竞争法（四）双位点一步法（五）捕获法测IgM抗体（六）应用亲和素和生物素的ELISA

酶联免疫吸附测定法1372023/2/6间接法。此法是测定抗体最常用的方法。将已知抗原吸附于固相载体，加入待检标本(含相应抗体)与之结合。洗涤后，加入酶标抗球蛋白抗体(酶标抗抗体)和底物进行测定。酶联免疫吸附测定法1382023/2/6双抗体夹心法。此法常用于测定抗原,将已知抗体吸附于固相载体,加入待检标本(含相应抗原)与之结合。温育后洗涤，加入酶标抗体和底物进行测定。酶联免疫吸附测定法1392023/2/6酶联免疫吸附测定法竞争法。此法可用于抗原和半抗原的定量测定，也可用于测定抗体。以测定抗原为例,将抗原吸附于固相载体；加入待测抗原和一定量特异性抗体，使固相抗原与待测抗原二者竞争与抗体结合；经过洗涤分离，最后结合于固相的抗体与待测抗原含量呈负相关。1402023/2/6ELISA应用实例1412023/2/6河豚毒素植物毒素如罌粟硷、吗啡、藻类毒素苯并芘主要有除草剂与杀虫剂两大类例如杀暝松（FN）、甲氟磷酸异已酶（SOMAN）、草不绿（Alachor）、西维因（Carbaryl）、多菌灵及克菌丹（Captan）等。农药的检测：植物激素(IAA、GA、CTK、ABA)2023/2/6142ELISA试剂盒2023/2/6143酶联免疫井1442023/2/6DNM-9602G酶标分析仪DNM-9602标配酶标分析仪

DNM-9602A酶标分析仪几种酶标分析仪1452023/2/6核酸检验法利用紫外－可见分光光度计检测DNA含量和质量。琼脂糖凝胶电泳法测定检测DNA分子大小。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。在凝胶电泳中，DNA分子的迁移速度与分子量的对数值呈反比关系。利用PCR技术检测转基因农产品中的外源DNA片段。（一些行业标准已出台，国家标准和国际标准尚未出台）1462023/2/6核酸检验法多聚酶链式反应（polymerasechainreaction）简称PCR技术，是80年代中期发展起来的一种体外扩增特异DNA片段的技术。此法操作简便，可在短时间内在试管中获得数百万个特异的目的DNA序列的拷贝，PCR技术虽然问世仅数年时间，但它已迅速渗透到分子生物学的各个领域，引起了生物技术发展的一次革命，目前它在分子克隆，目的基因检测，遗传病的基因诊断，法医学，考古学等方面得到了广泛的应用。PCR技术实际上是在模板DNA，引物和４种脱氧核苷酸存在的条件下依赖于DNA聚合酶的酶促化合反应，PCR技术的特异性取决于引物和模板DNA结合的特异性。反应分三步：①变性（denaturation）；②退火（annealing）；③延伸（extension）。返回各种分析测试仪器在农业中的应用2023/2/61472023/2/61482023/2/61492023/2/61502023/2/61512023/2/61522023/2/61532023/2/61542023/2/6155第四节试验误差及消除方法一、误差分类及其减免指南二、误差的表示与传递返回2023/2/6156一、误差分类及其减免指南分析结果与真实值之间的差值称为误差。根据误差的来源和性质，可以将误差分为系统误差和随机误差。2023/2/6157一、误差分类及其减免指南（一）系统误差系统误差是由某种固定的原因引起的误差。1.特点对分析结果的影响比较恒定；在同一条件下，重复测定，重复出现；影响准确度，不影响精密度；可以消除。2023/2/6158一、误差分类及其减免指南（一）系统误差2.产生的原因方法误差:方法误差是由于分析方法本身不够完善而引起的。仪器误差:仪器误差是由于所用仪器不够精确所引起的误差。试剂误差:试剂误差是由于测定时所用试剂或蒸馏水不纯所引起的误差。主观误差:操作误差是由于分析操作人员所掌握的分析操作，与正确的分析操作有差别所引起的。2023/2/6159一、误差分类及其减免指南（一）系统误差3.

减免指南方法误差——采用标准方法；仪器误差——校正仪器；试剂误差——做空白、对比实验；主观误差——更换操作人员或通过培训纠正操作人员主观错误。2023/2/6160一、误差分类及其减免指南（一）随机误差随机误差也称偶然误差，它是由某些无法控制和无法避免的偶然因素造成的。1.特点不恒定，可大可小，可正可负；难以校正：不能通过校正或小心操作来完全消除偶然误差；服从正态分布：小误差出现的几率大，大误差出现的几率小。2023/2/6161一、误差分类及其减免指南（一）随机误差在分析过程中还会遇到由于过失或差错造成的所谓“过失误差”。这是由于操作者责任心不强、粗心大意或违反操作规则等原因造成的，如读错刻度、加错试剂、试液溅失、记录和计算错误等。这种由于过失而造成的错误是可以避免的，不在误差的讨论范围之内。2023/2/6162一、误差分类及其减免指南（一）随机误差2.产生的原因偶然因素，例如：实验室环境温度、压力波动，偶然出现的振动，操作人员操作精度、读数准确性的正常波动等。2023/2/6163一、误差分类及其减免指南（一）偶然误差3.减免指南增加平行测定的次数，可以减小随机误差。必须注意的是，过多的增加平行测定次数，收效并不大，却消耗了更多的试剂和时间。在一般分析中，平行测定4～6次已经足够，学生的验证性教学实验，平行测定2～3次即可。2023/2/6164

（一）绝对误差和相对误差1、绝对误差（Ea）Ea=X-T测量值-真值=绝对误差2、相对误差（Er）Er=Ea/T×100%Er=100（测量值-真值）/真值

二、误差的表示与传递2023/2/6165二、误差的表示与传递（二）平均偏差与标准偏差1、平均偏差又称算数平均偏差，用来表示一组数据的精密度。d=∑|x-x|/nx——某次测定数据x——一组平行测定数据的平均值n——平行测定次数2023/2/6166二、误差的表示与传递（二）平均偏差与标准偏差2、标准偏差标准偏差又称均方根偏差S=∑(x-x)2/(n-1)变异系数CV%=S/X2023/2/6167二、误差的表示与传递（三）误差的传递1、系统误差传递加减运算：△y=△x1+△x2……+△xn计算结果的绝对系统误差等于各个直接测量值的绝对系统误差之和。乘除运算：△y/y=△x1/x1+△x2/x2…+△xn/xn2023/2/6168（三）误差的传递2、偶然误差的传递加减运算：Sy2=Sx12+Sx22+……+Sxn2乘除运算：（Sy/y）2=（Sx1/x1）2+……+（Sxn/xn）2二、误差的表示与传递返回2023/2/6169第五节试验数据的整理和处理一、原始数据的整理二、可疑数据的取舍——过失误差的判断三、有效数字返回2023/2/6170一、原始数据的整理要保留好原始记录。把原始数据按照一定的顺序和范围进行整理。2023/2/6171二、可疑数据的取舍——过失误差的判断（一）Q检验法此法是将数据从小到大排列,如设为可疑值,按下式求统计量Q,Q称为舍弃商.

上式的分母是极差,分子是可疑值与最临近值之差,把Q与值比较,若,可疑值应舍弃,否则保留,若是可疑值,Q从下式求出:

值与置信度和测量次数有关,如下表所示2023/2/6172（一）Q检验法Q值表

测定次数,n345678910置信度90%()0.940.760.640.560.510.470.440.4196%()0.980.850.730.640.590.540.510.4899%()0.990.930.820.740.680.630.600.572023/2/6173（二）格鲁布斯法（Grubbs法）该法用到正态分布中反映测量值集中与波动的两数和S,因而可靠性较高.应用此法时,在计算了和S后,将测量值从小到大排列,同Q检验法一样,应按测量次数多少,确定检验或,若两个都做检验,设x为可疑值,由下式求统计量T:

把T与表值比较,若,可疑值舍弃,否则保留,若为可疑值,T由下式求出:

值与测定次数和显著性水准有关,如表2-42023/2/6174（二）格鲁布斯法(表2-4)

值表测定次数,n显著性水准α测定次数,n显著性水准α0.050.0250.010.050.0250.0131.151.151.1582.032.132.2241.461.481.4992.112.212.3251.671.711.75102.182.292.4161.821.891.94152.412.552.7171.942.022.10202.562.712.882023/2/6175三、有效数字有效数字就是指在分析工作中实际上能测定到的数字，只有最后一位数字是不准确，可能有±1的绝对误差，而其余各位数字都是确定的。有效数字是测定结果的大小及精度的真实记录，测定结果必须用有效数字来表示。在确定有效数字的位数时，数字“0”是否为有效数字，取决于它在数据中所处的位置。在小数点前面的“0”只起定位作用，不是有效数字；数据中间和最后一位的“0”是有效数字。2023/2/6176三、有效数字

有效数字位数确定之后，就要将多余的数字舍弃。舍弃多余数字的过程为数字修约，修约时所采用的方法称为数字修约方法。数字修约通常采用“四舍六入五成双”的方法。该方法规定：当被修约的数小于或等于4时，则舍去；大于或等于

6时，则进位；等于

5

且后面没有数字或有数字“0”时，若前面是偶数则舍去，如是奇数则进位；等于

5且后面有不为“0”的数字时，该数字总比5大，以进位为宜。需要注意的是，在数字修约时只允许一次修约到所需位数，不能分次连续修约。2023/2/6177三、有效数字三、有效数字的运算规则1、加减运算取决于小数点后位数最少的数据的位数。0.0121+25.64+1.057=25.7091结果为25.712、乘除运算取决于小数点后位数最多的数据的位数。0.0325×5.103×60.0/139.8=0.071179184结果为0.0712返回2023/2/6178复习思考题举例说明某农产品的样品采集与保存过程。举例说明不同样品的制备方法。举例说明各样品前处理方法的适宜样品。名词解释：采样、扦样、原始样品、平均样品、保留样品、试验样品、陈列样品、复检样品、标准样品、缩分、样品制备、样品前处理。返回2023/2/6179复习思考题试述现代仪器分析法主要包括那些方法，其各自的特点是什么？紫外分光光度法与原子吸收光谱法的主要区别有哪些？从色谱图中可以得到那些信息？试述ELISA的测定原理。试述试验误差的分类，各种试验误差的特点、产生原因和减免措施。返回2023/2/6180课前复习题1.样品采集的要求有哪些？（1）具有充分的代表性（2）方法不得随意（3）执行操作规范（4）强调真实性（5）把握典型性。2023/2/6181课前复习题2.简述不同状态样品的缩分方法。颗粒状样品采用四分法。液体样品的缩分只要将原始样品搅匀或摇匀，直接按平均样品的需要量倒取或吸取即可。不均匀的大个样品的缩分：先按大小分类，然后将尺寸同类的样品缩分，最后把各类缩分样再混合，构成平均样品或直接构成试验、复检和保留样品。2023/2/6182课前复习题采样缩分需检验的批量农产品原始样品平均样品复检样品保留样品试验样品3.简述样品采集基本程序。2023/2/6183课前复习题4.如何采集流水作业线上的样品？流水作业线上的取样位点一般都设在作业线上的一定位置，每隔一定时间，从该位置取出流经此位置的一件或一定量的样品作为小样，然后将一定时间范围内的小样合并，就形成原始样品。5.如何抽取总货批量较小的固体包装样品？在总货批量相对较小时，常将总货批作为一个检验批，采集的包装数量一般为该货批总包装数的5％，最少为5个，最多为15个。如果总包装数少于5个，则打开每一外包装采集，每箱中抽取的小包装视小包装的大小而定，最少取一包。将抽出的样品合并作为原始样品。2023/2/6184课前复习题6.简述样品采集的注意事项。一切采样工具、容器、塑料袋、包装纸等都应清洁、干燥、无异味、无污染。采样后，对每件样品都要做好记录，采样时样品应及时贴上标签，标签上应注明货主、品名、检验批编号、样品编号、采样日期、地点、堆位、生产日期、班次、采样负责人。如果发现货品有污染的迹象或属于感官异常样品，应将污染或异常的货品单独抽样，装入另外的容器内，贴上特别的标签，详细记录污染货品的堆位及大约数量，以便分别化验。生鲜、易腐的样品应在采集后4h内迅速送到实验室进行分析或处理，应尽量避免样品在分析前发生变化。盛装样品的容器应当是隔绝空气、防潮的玻璃容器或其它适宜和结实的容器。2023/2/6185课前思考题7.分别说明大豆（散装）、含有小包装的豆奶粉、矿泉水（瓶装）和散装豆油的样品采集方法。散装豆油：在批量产品的每一大储存容器中，于不同深度、不同部位，分别采集每份约0.1～0.2L的5份独立样品（小样），将5份样品充分混合成约0.5～1L的混合样品。如某一储存容器中采出的样品感官测定异常，则应单独留样。矿泉水（瓶装）：如果没有规定检验批，一般可随机抽取（x为该货批的总箱数）箱，然后从每箱中随机抽出1瓶，合并为原始样品。矿泉水（桶装）：如果未规定检验批量，可以一货批中随机抽取数个（数量一般为一货批总包装件数的5％左右）包装。用采样管在每一抽取的包装内上、中、下部分分别吸取0.1～0.2L样品，如果感官无异常，将各包装抽取的样品充分混合，从中再取2～4L的混合样品作为原始样品。大豆：在每