乙肝病毒DNA实验室检测

LOREMIPSUMDOLOR乙肝病毒DNA的实验室检测2020/12/1811、荧光定量PCR技术2、乙肝病毒的感染3、HBV-DNA与临床2020/12/182荧光定量PCR技术2020/12/183荧光定量PCR技术Polymerasechainreaction(PCR)，聚合酶链式反应，是一种DNA的快速扩增技术。PCR技术通过两个短的称为引物的DNA小片段和一种耐热酶（TaqDNA聚合酶）的作用，经过高温变性、低温退火、适温延伸三个步骤在3个小时内反复循环25-30次，把特定的DNA片段扩增1000万倍。每个PCR体系含4种主要成分：含有待扩增序列的DNA模板、引物、TaqDNA聚合酶、脱氧核糖核酸三磷酸（dNTP）2020/12/184

实时荧光定量PCR技术，是指在反应体系中加入荧光标记，利用荧光信号积累实时检测整个PCR过程，通过标准曲线对PCR终产物的分析，最终实现对未知的起始模版进行定量分析的一种技术，是迄今对已知基因序列的核酸测定中最灵敏的方法。荧光定量PCR技术2020/12/185PCR反应过程5’5’3’3’d.NTPsTaq酶Primers5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’反应组分变性5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’2020/12/186延伸5’3’5’3’5’3’5’3’3’5’3’TaqTaq5’5’重复退火2020/12/1875’3’5’3’5’3’5’3’5’5’3’3’5’3’5’3’循环24个拷贝循环38个拷贝5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’3’5’5’3’5’3’5’3’5’3’2020/12/188荧光定量PCR原理插入染料法

SYBRGreenI杂交探针法(最常用)

TaqMan2020/12/189TaqMan探针5’5’3’3’d.NTPsTaq酶Primers5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’反应体系变性5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’5’3’Taql5’3’RQProbe5’3’RQ2020/12/18105’3’5’3’5’3’RQ退火5’3’1.链取代Taq3’QR5’5’3’3’QTaqR5’2.水解3.聚合5’3’QTaqR3’5’4.检测荧光5’3’3’QTaqR5’l2020/12/1811乙肝病毒的感染2020/12/1812乙肝病毒的感染

（一）乙型肝炎病毒结构及特点HBsAg：是HBV感染的主要标志HBsAb：保护性抗体HBcAg：仅存于感染的肝细胞核内，一般不存在于血循环中HBcAb:非保护性抗体，HBcAb-IgM提示HBV处于复制状态HBeAg：HBV复制及强感染性的指标HBeAb：有一定的保护作用，预后良好2020/12/1813乙肝病毒的感染（二）HBV-DNA与“两对半”1.“两对半”：机体的免疫反应状态；2.“携带者”、“大三阳”、“小三阳”等免疫学指标不能反应体内病毒复制水平与感染程度。FQ-PCR：检测的是HBV本身的遗传物质—DNA，是病毒存在和复制的最可靠、最直接的指标。HBsAg(－)

HBV-DNA(＋)

HBeAg(－)HBV-DNA(＋)3.血清学指标(－)不能排除HBV感染。2020/12/1814乙肝病毒的感染5.HBeAg阳性标本HBVDNA检出率90％左右

HBeAg与HBVDNA有着良好的相关性4.也可能出现HBsAg(＋)，HBV-DNA(－)。2020/12/1815乙肝病毒的感染2020/12/1816乙肝病毒的感染慢性HBV感染分期及相关实验室检测指标鲁凤民，庄辉，乙型肝炎实验室诊断研究进展20092020/12/1817HBV-DNA与临床2020/12/1818HBVDNA检测的临床意义HBVDNA是HBV存在最直接的依据HBVDNA是HBV复制的标志HBVDNA是患者具有传染性的标志HBVDNA对乙肝两对半起补充作用HBVDNA是目前判断乙肝抗病毒药物疗效最敏感的指标HBVDNA可检测出隐匿性慢性乙型肝炎2020/12/1819有利于献血员窗口期病毒核酸的筛查和早期诊断提供直接证据缩短“窗口期”HBVDNA检测的临床意义2020/12/1820

调查表明并不是所有“大三阳”的病人都处于HBV复制期，具有传染性；也不是所有“小三阳”的病人HBV都无复制。因此，要准确知道HBV是否处于复制状态，最准确的方法还是通过检测HBVDNA来决定。HBVDNA检测的临床意义2020/12/18212020/12/18222020/12/1823HBVDNA检测的临床意义HBsAg和HBeAg均阳性而HBVDNA阴性？●干扰素或拉米夫定等治疗后病毒复制受抑制。●PCR所用引物相应的DNA序列发生突变，此引物与突变DNA不能配对结合。●病毒DNA整合于宿主肝细胞染色体而血中游离HBVDNA很少或缺乏。2020/12/1824

目前尚无一种能迅速、直接杀死清除乙肝病毒的药物，最好的抗病毒药物疗效也仅能达到50％左右。目前国际医学界公认的治疗慢性乙肝有确切疗效的抗病毒药物主要有两大类：

干扰素：重组人α-1b干扰素、α-2a、