天然药物化学实验指导书实验一一叶秋碱的提取分离

自然药物化学试验指导书试验一一叶秋碱的提取分别与NATURALMEDICINALCHEMISTRYEXPERIMENTALGUIDENCE〔试验指导书〕EditedbyRongminYu(于荣敏)YinYin(殷茵)CollegeofPharmacy,JinanUniversityDecember2023PREFACE自然药物化学试验是整个自然药物化学课的重要组成局部。主要目的为：深学生对理性学问的理解和把握。生获得从事自然药物化学科研工作的根本训练。自然药物化学试验要求学生把握以下技能：提取分别方面：〔渗渍、渗漉、回流提取、液－液萃取法〔简洁萃取法、梯度萃取法、反流分布法、重结晶法等。要求学生了解常见溶剂的性能，并能较好地选择提取溶剂。〔包括吸附柱离子交换层析的原理及根本操作。了解气相层析、高效薄层及高效液相层析的根本操作。鉴定方面化学方法A把握一般定性反响鉴定中的应用B把握重要衍生物〔乙酰化物、甲基化物、生物碱盐等〕的制备方法及其在构造鉴定中的应用。C了解重要降解反响的原理及应用。如碱降解、霍夫曼降解、臭氧氧化等。光谱方法了解UV,IR,NMR,MS在自然产物构造测定中的应用。目前，要求学生能了解黄酮IRNMR自然产物的构造修饰小檗胺制备檗肌松。的设计力气，为今后从事科研工作打下必要的根底。TheExperimentalNotesofNaturalProductsChemistry(自然药物化学试验须知)全可以避开一切事故的发生。TheExperimentalRules(试验规章)现象，以撰写正式试验报告。2.试验前应清点并检查仪器是否完整，装置是否正确，合格前方可进展试验。试验仪器是否漏气、裂开等。便他人使用。不行调错瓶塞，以免污染。器皿用后要洗刷干净。操作易燃性有机溶剂，回流、蒸馏、减压蒸馏时，不能明火直接加热，要放沸压系统应装有安全瓶。加液时应停火或远离火源，勿漏气开口，冷凝水要通畅。5.有毒、腐蚀性药品应妥当保管，操作后要马上洗手。勿沾及五官、创口及身体暴露部位，以免中毒、损伤皮肤。其旋转而入，防止折断割伤。试验台上勿放置与试验无关物品，随时保持水槽、仪器、桌面、地面干净。可离开试验室。TheSafetyRulesofLaboratory(安全防火须知)500ml。机溶剂倒入水槽或废液缸内。烘箱内不能烘盛有易燃性溶剂的器皿。应处于备用状态。万一不慎着火，要冷静冷静乐观抢救。应马上切断室内电源和火源，用石棉布将室使用二氧化碳灭火器较好，它具有不腐蚀、不导电等优点。试验室常见的事故如下，应予以特别留意：简洁引起火灾。蒸馏易燃物时，未通冷却水，大量蒸气逸出易引起火灾。蒸馏易燃物时塞子漏气引起火灾。用三角烧瓶做减压装置的受器，结果炸裂。减压操作完毕后，放气太快，使压力计冲破。被吸到枯燥器中，使样品被污染等。EXPERIMENTAL ONE:IsolationandIdentificationofSecurinine1:一叶萩碱的提取分别与鉴定)IntroductionPurposeandClaimMethodandNotesExtractandIsolationQualityofSecurinineThePreparationofRamificationofSecurinineThePreparationofSecurinineNitrateThePreparationofMethylSecurinineIdentificationThedeterminationofMeltingPointofSecurinineanditsMetylationTheDeterminationofTLCIRSpectraUVSpectraTheSpecificRotationKeyUnderstandingandNotesReportWritingQuestionsEquipmentsandReagentsReferencesINTRODUCTION(概述)大戟科植物一叶萩〔Securinegasuffruticosa〔Pall〕Rehd〕也称叶底珠，别名狗杏条等，我国资源格外丰富，主要成分为一叶秋碱〔9。Fig.9 TheStructureofSecurinineN叶萩碱治疗面神经麻痹、小儿麻痹骶神经炎和股外侧神经炎感染引起的多发性神经炎，为神经科疾患的常用药物。一叶萩碱为淡黄色棱形晶体，难溶于水，易溶于醇、氯仿，较难溶于石油醚；一叶萩碱是一个由△αβ分子中具有共轭双健，氢原子的孤电子恰好处于键之上，因而可与π度降低。说明NN都结在环中，有确定程度的碱性〔2，因而具有生物碱的一般通性；能与生物碱沉淀试剂产生沉淀反响，亦可与显色剂反响。从一叶萩中提取生物碱可承受溶剂法[5]、活性炭吸附法[3]和离子交换法。PURPOSEANDDEMANDPurpose:通过一叶萩碱的提取分别把握用离子交换树脂法提取分别生物碱的原理和方法。Demand:分别得到一叶萩碱纯品；制备其衍生物，并加以鉴定。METHODANDNOTESExtractandIsolation：(Fig.10)LeafofdriedSecurinegasuffruticosa 〔75g〕1000mLpH1－2的H2SO4700ml20pH1－2的H2SO4溶液以4－5ml/min的滴速进展渗漉，收集滤液约0m〔H取少量溶液进展颜色反响。Residue AcidicextractX 80g阳离子交换柱〔2〕以4－5ml/min的流速进展交换待酸水液全部交换完毕后将树脂倾入烧杯中，Driedresin用氨水10－12ml20minNH3。将树脂装入沙氏提取器中用150mL〔30－60℃〕602.5h。Resin Petroliumextract〔回收〕 移至无水的圆底烧瓶中旋蒸50℃回收至体积约20－30ml转移到小锥形中加盖放置，结晶析出后过滤Petroliumsolution Crystal〔回收〕 〔供作鉴定〕Fig.10 TheFlowChartofSecurinineAlkaloids’IsolationNOTES:〔先用水潮湿〕,然后将潮湿过的药材分次参与，分层填压，顶部盖一张滤纸压上干净的鹅卵石。树脂处理：取树脂〔已用水膨胀过的〕6-7%HClpH3-45%NaOH〔2〕6-7HCl装树脂柱及交换原理用蒸馏水将已处理好的树脂悬浮起来加到底部垫有脱脂棉的交换柱中，等树脂颗粒含一叶萩碱的酸水，翻开底部活夹。把握流速，反响式如下：NH4OHTheDeterminationofQualitiesofAlkoloids①取渗漉液1ml，加硅钨酸试剂(Bertrad’sreagent②取渗漉液1ml，加碘化钾试剂(Wagner’sreagent)数滴，产生棕褐色沉淀③取渗漉液1ml，加碘化铋钾试剂(Dragendorff’sreagent)数滴，产生棕红色沉淀ThePreparationofSecurinineDerivatives：硝酸一叶萩碱〔SecurinineNitrate〕的制备：200mg6ml9ml10%硝酸无水乙醇液14ml，滴加乙醚至混浊,放置，白色结晶析出后,过滤，结晶用无水乙醇—乙醚〔1：1〕洗涤数次,枯燥，即得硝酸一叶萩碱。硝酸一叶萩碱:无嗅、味苦，溶于水，难溶于醇。m.p.222℃一叶萩碱的甲基化物的制备：ml1hMeOH-EtOH重结晶,得针状结晶。m.p. 5℃〔分解，反响式1)：Fig. 11 The Structures of Securinine and MethylSecurinineIdentification①TLC：吸附剂：Al2O3〔II-III〕200〕开放剂：CHCl320mLCHCl3:石油醚〔1：1〕10mLCHCl3:乙醇〔9：1〕10mL样品：一叶萩碱/CHCl3液标准品：一叶萩碱/CHCl3液Rfvalue，并据此作出结论。IRνmax(KBr,cm-1)〔Fig.12〕:1790α－H)1730C=O)1620(C=C)3.UV:λmax(EtOH,nm):256.7;311.64.比旋度的测定：[α]d-1042Fig.12 TheIRSpectrumofSecurinineKeyUnderstandingandNotes：理解用离子交换树脂提取生物碱的原理。把握装树脂柱的根本操作，避开柱中存有气泡。留意交换时的流速及检查流出液的变化，分析发生变化的原理。在使用沙氏提取器时，应作试教，讲解安装方法。用石油醚回流洗脱时应留意防火。3ExperimentalReport定性试验结果、反响原理。半小时后流出液的pH----，二个半小时后pH ；试述3.描图说明鉴定结果。4UV、IRQuestions用树脂提取生物碱的原理是什么？为什么提取生物碱时必需考虑交联度？用石油醚从树脂上回流洗脱一叶萩碱的原理是什么？DevicesandDrugs〔Table4and5，pergroup〕Table4NameofDevicesStandardNumber Note锥形瓶1000ml,50ml1烧杯250ml1培育皿15cm1树脂柱2×60cm1沙氏提取器250ml1电水浴锅21Table5NameofDrugStandardNumberNoteandReagents一叶萩碱标准品微量H2SO4732＃阳离子树脂工业磺酸型5－100ml60g湿重NH4OH苯A-RA-R15－20ml5mlCHCl3乙醇A-RA-R5mlO.4ml石油醚CP250－300ml30－60℃Al2O3一叶萩叶II-III5－10g150gArrangementTable6Times TheContentofExperiment第一次 1处理树脂，装柱，进展交换；交换完毕后洗净置于培育皿中风干；2Alk其次次 树脂和碱化，回流提取至终点后，倾出石油醚至小体积放置。第三次1过滤结晶，烘干；2制备衍生物。第四次1，m.p.,UV,IR2衍生物的熔点测定。References：omittedEXPERIMENTALTWO:THEEXTRACTANDIDENTIFICATIONOFRUTIN(试验二、芦丁的提取及鉴定)IntroductionPurposeandClaim3MethodandNotesExtractandIsolationofRutinIdentificationofRutinTheReactionofQualityElucidationofUVElucidationofNMRThedeterminationofSugarsandAglyconeofRutinHydrolysisIdentificationofAglyconeDegradationbyAlkliElucidationofUVSpectraTheDeterminationofMPofAcetylRutinPCDeterminationofSugars4KeyUnderstandingandNotes5ReportWritingQuestionsEquipmentsandReagents8ReferencesINTRODUCTION70烟叶、槐花、荞麦和蒲公英中均含有。尤以槐花米〔为植物Sophorajaponica的未开放的花蕾〕和荞麦中含量最高，可作为大量提取芦丁的原料。芦丁是由槲皮素糖〔Glucose〕与鼠李糖〔Rhamnose〕组成的双糖。](Fig.13Fig.13 TheStructureofRutin174-178℃，乙醇)，1:12(冷吡啶)。微溶于丙酮、醋酸乙酯,不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于碱而呈黄色。提取芦丁的方法很多，目前我国多承受碱提取-酸沉淀法。该法的提取原理是依据游离析出。此外，还可以承受水或醇提取法。P〔但不能降压〕剂，亦可防治因缺芦丁所致的其它出血症。多作口服，也可作注射用。PURPOSEANDDEMANDAims:通过芦丁构造的检识，了解苷类构造争论的一般程序和方法。UVNMRDemands：分别得到芦丁、槲皮素、全乙酰化芦丁；UVNMR测定黄酮类化合物的构造有根本了解。METHODANDNOTESExtractandIsolationofRutin(Fig.14)SeedsofSophorajaponica〔20g〕500ml300ml，在搅拌下参与石灰乳，调pH8－9[1]，加热套中加热至微沸，盖上滤纸，防止水分过分挥发，但要不时搅拌。保持30min〔留意滴加石灰乳维pH8－9〕趁热抽滤Residue Filtrate〔X〕 60－70pH2－3[2〔2h〕,抽滤Filtrate Precipitation(cruderutin)(X) 重结晶[3]：将一半沉淀悬浮于7015min,趁热过滤Residue Filtrate充分静置2h，过滤,枯燥〔60-70℃〕Rutin(FinalProduct)Fig.14 TheFlowChartofIsolationofRutinNOTES:[1]pH不能过高,否则钙能与芦丁形成螯合物而析出沉淀。[2]pH过低会使芦丁形成养钅羊〔YANG〕盐而降低收率[3]1:70IdentificationofRutin芦丁的定性反响3～4mg,加955-6ml使溶,分成三份做下述试验:1-2ml,加2滴浓盐酸,再酌加少许镁粉,留意观看颜色变化状况.ml,然后滴加2%ZrOCl2的甲醇溶液,留意观看颜色变化状况；2%柠檬酸的甲醇溶液,具体记录颜色变化状况.α-萘酚反响(Molish`sReaction)1-2ml10%α-萘酚乙醇溶液,摇匀,沿管壁滴加浓硫酸,留意观看两液界面产生的颜色变化.Notes:在样品溶液中参与2ZrOCl2的甲醇溶液之后,如溶液呈黄色示构造中可C3-OH,但有C5-OHC3-OH、4C5-OH、4-酮基络合物.)芦丁的紫外光谱解析V试解析光谱并初步推断其构造。NMR〔1〕NMRNMR(Fig.16),试分析其构造.Notes:①δ0.8(d,3H,Rha-CH3)②δ3.0-4.0(m10H,为鼠李葡萄糖基质子)③δ4.2(S1H,为鼠李糖H-1)④δ5.8(d1HJ=7Hz,为葡萄糖基H-1J＝7Hz,说明Glucoseβ型)Fig.15 TheUVSpectraofRutinAppendixwithsomeCheckingReagentsFig.16 TheNMRSpectraofRutin(TMSEtherDerivative)inCCl4⑤A、BH-6,H-8。⑥δ6.9(d1HJ=7HzH-5’δ7.3-7.5(2H,H-6’andH-2’)NMR50ml2ml8-10ml15’。100ml95〔按同样条件再重结晶一次〕6取上述十乙酰化芦丁30mg，0.5mlCDCl3中，以TMSNMROHFig.17 TheNMRSpectraofRutinAcetateinCCl4芦丁水解后糖与苷元的鉴定水解方法〔±gL0min，用滤纸盖上，以免过分挥发。放冷静置过滤。所得沉淀用少量水(除酸)，枯燥称重，计算苷的纸层析鉴定〕取芦丁精品，水解苷元，十乙酰化产物及芦丁标品少许，溶于95％乙醇中，点样于记录现象。再熏少许氨水，观看现象并记录。喷AlCl3显色，并记录现象。分别计算各RfNote:2。假设依据苷元与糖的比g。苷元的鉴定通过苷元的化学降解(Fig.18)、UV①苷元碱降解与降解产物的纸层析鉴定50mg955ml，4g5〔pH2〕,再用乙醚振摇萃取。取醚层回收醚，残液进展缓冲纸层析。然后用Sulphanilicacid[1]试剂显色，并与间苯三酚和原儿茶酸的标准品比照，层析结果如注[2]所示。1SulphanilicacidT.SA液：10%Na2CO3水溶液B液：0.5%SulphanilicacidC液：0.5%NaNO3水溶液ABC〔BC〕2pH=9的缓冲溶液处理。Fig.18 TheProductsofDegredationofQuercetin②苷元的UV取苷元溶于甲醇中，加规定试剂〔见附录〕V〔9，推断其UVFig.19 TheUVSpectraofQuercetin③苷元乙酰化物的熔点测定200mg50ml5ml1d，振摇使完全溶解，接空气冷凝管，水浴加热30’，放冷，搅拌下将反响液倾入100ml冰水中,搅拌至油滴消逝为止。抽滤并洗涤沉淀，枯燥后以95%乙醇重结晶。测得苷元m.p.与槲皮素五乙酰化物的熔点〔193℃〕全都。糖的鉴定10mlBa〔OH〕2〔1－1.5g〕细粉中和至中性，滤BaSO495%乙醇溶解后,取样，〔4：1：5〕作径向开放。晾干后显色。显色剂：邻苯二甲酸苯胺，喷洒后在105℃下加热3－5RfArrangementofExperimentTable7Order Hours Content4 1.提取分别 2.芦丁的定性反响 3.十乙酰化芦丁的制备6 1.接上次十乙酰化芦丁的制备 2.苷的水解3.糖的鉴定 苷元乙酰化物的制备及熔点测定6 1.苷元的碱降解2.几个光谱的解析KeyUnderstanding芦丁提取方法，重点介绍碱酸法的原理及留意事项；定性试验的目的、意义及留意事项；UVNMRPreparationofExperiment把握碱酸法提取芦丁的原理及留意事项；定性反响的反响机理；UVNMR乙酰化反响的试验方法。Questions苷类构造的检识程序如何？苷类水解有几种催化方法？3-0-位置相连？怎样证明芦丁分子中只含有一个葡萄糖及一个鼠李糖？苷元的构造是怎样确定的？ReportofExperiment具体记录定性反响结果；RfUVNMR分析争论试验结果〔成功、失败的缘由。DevicesandReagents〔pergroup,Table8〕Table8NameofDevices Standard Number Notes烧杯500ml2烧杯250ml2锥形瓶50ml2锥形瓶15－25ml3布氏漏斗2试管10ml3玻棒1空气冷凝器1枯燥箱水浴锅2－3cm11滴管1分液漏斗250ml1层析筒1冷凝器1Table9NameofDrugs Standard Number槐花米镁粉20g少许CaO化学纯1－1.5g无水吡啶化学纯1－2ml醋酐化学纯1－15ml95%乙醇分析纯KOH化学纯4gBa(OH)2化学纯1－1.5g葡萄糖标准品少许鼠李糖标准品少许浓硫酸分析纯浓盐酸化学纯100ml1%H2O4References:omittedEXPERIMENTALTHREE:THEEXTRACTIONANDISOLATIONOFANTHRAQUINONE〔试验三、大黄中蒽醌类成分的提取分别〕IntroductionAimsandDemandsMethodsandNotesAglyconeofRheumofficinaleIsolationofTotalAnthraquinoneAglyconeIsolationandPurificationofAnthraquinonesIdentificationofAnthraquinonesExperimentalArrangementPreparationandQuestionsReportReferencesINTRODUCTION性生药。大黄的种类繁多，优质大黄是蓼科植物掌叶大黄〔mm，大黄(RofficinaleBaill)及唐古特大黄〔RtangutiumMaxim.etregll〕的根茎及根。大Fig.20Table10Fig.20 TheStructureofAnthraquinonesinR.officinaleR1R2R1R2NameofCompoundsCrystals—H—COOH大黄酸 〔Rhein〕黄色针状318-320—CH3—OH大黄素 〔Emodin〕橙色针状256～7—H—芦荟大黄素 〔Aloe—橙色细针状206~20—CH3CH2OH—OCH3emodin〕大黄素甲醚 〔Physcion〕砖红色针状207—H—CH3大黄酚 〔Chrysophanol〕金色片状结晶196所以也具有酸性，排列第四。依据这些特点。一般分别方法用梯度碱度萃取法。其分别Fig.21。Benzene-20%H2SO4DrugpowderrefluxWaterlayer5%KHCO3BenzeneWaterlayerHCLRhein(Y)ext.5%Na2CO3BenzenelayerHCLWater Emodin(Y)layer Aloe-emodin(orange)0.5%KOH

5%KOH

HCL CHCL3Water PrecipitationBenzene layer (orange) layer BenzenelayerHCLWaterlayer Aloe-emodin(red)

HCL5%KOH Water Physcion+Chrysophanol(paleChloroform layerlayer ChloroformlayerFig.21 TheFlowChartofAnthraquinonesinR.officinaleAB〔Fig.22〕等。pH分别不同酸度的苷元。AIMSANDDEMANDS合物的试验方案。2pH34、学习蒽醌类化合物的鉴定方法。METHODANDNOTESAglyconeofR.officinaleCrudePowderofR.officinale〔100g〕20H2SO4200ml，氯仿500ml，水浴回流2.5取液用四层纱布过滤并测量体积。Residue ExtractofChloroform〔450ml〕Fig.22 TheStructureofSennosideAandBNotes:1、大黄当中的蒽醌类成分多与糖结合成苷存在于植物组织中。所以要用酸水解产生苷元。蒽醌苷元可溶于氯仿，苯以及乙醚等有机溶剂，用苯时应留意苯蒸气的挥发，使用时应特别留意。2、所得氯仿液中如带有酸水液，应用分液漏斗分出弃去，以免影响梯度萃取。氯。IsolationofTotalAnthraquinones1、大黄总蒽醌苷元的纸层析为了解总蒽醌苷元的所含成分，进展如下纸层析试验。255%KOHRf0.98黄酚和大黄素甲醚的混合物。Rf0.70Rf0.00(Fig.23)。Rf0.980.700.400.00Fig.23 ThinLayerChronmotographyofAnthraquinoneCompounds2、蒽醌类成分的缓冲纸层析试验4pHpHFig241 21 234 567 89 10 11 1213 14 15 1617 18 192021IIIIIIFig.24 Fig24的纸层析图谱中，可以看到三条SII素，III各条滤纸分别用下述缓冲液或碱液处理:1:pH3；2:pH4；3:pH5；4:pH5.6；H6H7H〔以上为柠檬酸磷酸氢二钠缓冲液H〔硼酸缓冲液；H9H9H913缓冲液);130.5%Na2CO3；142.5%Na2CO3；155%Na2CO316，17，185Na2CO3:NaOH(9:1,1:1,1:9)；195%NaOH3、最正确萃取剂及用量确实定Fig.24pH8pH8。pH9.90.5KOH5%NaOH4、各种萃取剂用量确实定分别组分Ⅰ〔大黄酸，8pH8〔大黄酸〕Rf1=0.04Ⅱ号以上〔其他苷元〕Rf2=0.9K1=1/2[Rf1/(1-Rf1)]=0.02其余苷元安排系数：K2=1/2[Rf2/(1-Rf2)]=4.5由此计算容积比；R=1/K1XK2=1/0.3分别因子β=K2/K1=225R=1/0.31：0.3，又由于β值很大〔5，因此可做一次简洁萃取。分别组分Ⅱ〔大黄素，9pH9.9〔大黄素〕Rf2=0.1Rf3=0.94K2=1/2[Rf2/(1-Rf2)]=0.056K3=1/2[Rf3/(1-Rf3)]=7.8容积比：R=1/ K1X K2 分别因子β=K3/K2=141pH9.90.65β较大，可做一次简洁萃取。分别组分Ⅲ〔芦荟大黄素，碱液用量计算：5%Na2CO3:5%NaOH(9:1)条带处：Ⅲ号〔芦荟大黄素〕Rf3=0.20Rf4=0.96K3=1/2[Rf3/(1-Rf3)]=0.125K4=1/2[Rf4/(1-Rf4)]=12容积比：R=1/ K1X K2 分别因子β=K4/K3=94由此可知,用5%Na2CO3:5%NaOH(9:1)的碱液萃取芦荟大黄素时，用量为氯仿提1.2，β》50，仍可做一次简洁萃取。5、分别方法的设计(Fig.25)TotalChloroformExt.〔450ml〕50mLpH8150ml,振摇pH8Bufferlayer Chloroformlayer加浓HCL酸化 加pH9.9缓冲液275ml,振摇至pH3，沉淀用双层滤纸抽滤Chloroformlayer pH9.9BufferSoln.加5%NaCO3- 加浓HCL酸化至pH3Filtrate Precipitation 5%NaOH(1:1)碱液 沉淀过滤枯燥后 540ml振摇分层后 10mL分出水层Precipitation Filtrate无水乙醇枯燥后用无水乙醇结晶NeedleCrystalLargeNeedleCrystalⅠ〔Rhein〕〔Emodin〕ChloroformSoln. Alkaliwaterlayer经磷酸氢钙层析， 浓HCl酸化至pH3，沉淀，过滤石油醚洗脱EarlierelutionsLaterelutionsFiltratePrecipitationII(Physcion)枯燥后，用醋酸乙酯结晶Needlecrystal(Y)III〔Aloe-emodin〕Fig.25TheFlowChartofIsolationofAnthraquinoneCompounds检验：TLCRfNote：由于温度对安排系数影响很大，所以最正确萃取剂确实定，要以试验温度下的纸pH7~8pH9.5~11TheIsolationandPurificationofAnthraquinonesIsolationandpurificationofRhein450ml1000mlpH8150ml250mlHClpH310ml供鉴定用。IsolationandpurificationofEmodinpH9.9275mlHClpH310mlNote：大黄素的结晶溶剂最好是吡啶，但因吡啶臭味难闻，也可用冰醋酸。IsolationandpurificationofAloe—emodin5%Na2CO3:5%NaOH(9:1540mlHCL10ml酯重结晶，得黄色针晶的芦荟大黄素纯品，可供鉴定用。ColumnChromatographyofCaHPO4– IsolationandpurificationofChrysophanoandPhyscion115oC1015250ml体积的石油醚，搅拌均匀，取一干净的层析柱，底部放一小块脱脂纱布，松紧适宜，稍稍翻开底部的螺旋夹，将拌有溶剂的CaHPO4缓缓参与柱中，一面沉降，一面添加，直到加完为止，留意参与速度不宜过快，以免带入气泡，破坏柱床。加完吸附剂后，由底部放出多余的溶剂，当液平面比吸附剂平面稍高时，关紧螺旋夹，备用。10ml品冲起。洗脱：由柱顶参与石油醚洗脱，先流出的浅黄色流份为大黄酚，后流出的黄色黄酚时，可屡次结晶，即可得到大黄素甲醚的纯品。Notes:谱带集中影响分别效果。CaHPO4选用层析纯。TheIdentificationofAnthraquinonesPCIRIdentificationofchromatography0.5%MgAC2的甲醇溶液喷雾，100oC5开放剂：Ⅰ：石油醚〔60℃-90℃〕97%甲醇饱和。Ⅱ：石油醚，以水饱和。Ⅲ：丙酮：苯：水〔3：4：2〕取下层溶剂。依据层析结果，初步推断检品的构造类型。Notes:纸层析对蒽醌类化合物的鉴定帮助很大。在不同溶剂系统中层析，并用Rf构造母核。尤其对于混合物中成分的鉴定〔与标准品比照C的手段[4]，尚可用于探讨蒽醌成分与植物分类的相关性，即化学分类问题[5]。(1)游离羟基蒽醌衍生物的纸层析，常用的开放剂有：①石油醚〔0℃%甲醇饱和。②石油醚〔0℃：丙酮：水〔1：1：，取上层溶剂。③丙酮；苯：水〔3：：2，取下层溶剂。④水饱和的石油醚〔0℃。28%氨水饱和的丁醇。⑥甲苯97%甲醇饱和的苯。显色剂：0.5MgAC21005%的氢氧化钠溶液。RfRfTable11所示.Rf〔溶剂系统①〕NumberofGroupsGroupsNumberofGroupsGroupsβ—OHα—OCH3 α—OH10.000.01-0.070.07-0.500.750.9820.00-0.010.05-0.230.983〔0.20〕0.97-0.9840.030.97由上表可知—OHC=ORf0.97-0.98。COOH.〉—CH3OH〉β—OH〉α—OCH3。分子中只要有一个-COOH，Rf0.00，如大黄酸等。分子中只有一个-CH2OH，Rf0.07。如芦荟大黄素。β-酚羟基也有较大极性，故βRfβ-OH时，Rf0β-OHRf0.07-0.50RfRf茜草素[1.2-〔OH〕2Rf0.17紫草素[1.2.4-〔OH〕3Rf0.13大黄素[1.3.8-(OH)36-CH3Rf0.30茜黄素[1.3-(OH)3,2-CH3-]:Rf0.48aRfα-OCH3Rf0.03左右，有两个α-OCH3,Rf0.05-0.28。只有一个α-OCH3,Rf0.75。甲基，β-甲氧基对RfRfα-OHRf性强的化合物〔含-COOHβ-OH〕在本系统中得以开放和分别。含-COOHRf0.65β-OHRf0.45(Table12)。Table12CompoundsDevelopingsystemIDevelopingsystemIIRhein[1.8-〔OH〕2,3-COOH]00.74Emodin[1.3.8-(OH)3,]00.652.7-Dihyoxyanthraquinone00.452.3-Dihyoxyanthraquinone00.46溶剂系统④的极性最小，因此极性小的蒽醌衍生物〔分子中只含α-β-羟基、〕可用本溶剂系统分别。例如大黄酚与大黄素甲醚在其他溶