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文档简介

第二讲微生物的培育与应用[教材知识问题化梳理]一、微生物的实验室培育1.培育基观点:人们依照微生物对营养物质的不一样需求,配制出供其生长生殖的营养物质。(2)一般都含有水、碳源、氮源、无机盐成分pH、特别营养物质以及氧气的需求还要知足不一样微生物生长对(3)固体培育基:含凝结剂分类液体培育基:不含凝结剂2.无菌技术3.纯化大肠杆菌制备固体培育基的流程:计算称量熔解灭菌倒平板平板划线法(2)纯化方法稀释涂布平板法二、土壤中分解尿素细菌的分别和计数菌种挑选:使用尿素是独一氮源的选择培育基培育。统计菌落数目:常用方法有稀释涂布平板法、显微镜直接计数法。细菌分别与计数的实验流程:土壤取样→配制培育基→微生物的培育与察看→细菌的计数。三、分解纤维素的微生物的分别1.纤维素酶(1)构成:一种复合酶,它起码包含三种组分,即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶。C1酶葡萄糖作用:纤维素――→纤维二糖――→葡萄糖。CX酶苷酶2.挑选方法方法:刚果红染色法,即经过能否产生透明圈来挑选纤维素分解菌。培育基:以纤维素为独一碳源的选择培育基。3.实验流程土壤取样:富含纤维素的环境选择培育:用选择培育基培育,以增添纤维素分解菌的数目梯度稀释涂布平板:将样品涂布到鉴识纤维素分解菌的培育基上精选产生透明圈的菌落:产生纤维素酶的菌落四周出现透明圈[成效自评组合式设计]一、在小题集训中洞悉命题视角依据物理状态的不一样,培育基只有液体培育基和固体培育基两种种类。(×)培育基中一般都含有水、碳源、氮源和无机盐四种成分。(√)在配制培育基时,除知足营养需求外,还应试虑pH、O2及特别营养物质的需求。(√)只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。(√)挑选分解尿素的细菌应以尿素作为培育基中的独一氮源。(√)统计样品中的活菌一般用平板划线法。(×)在以尿素为独一氮源的培育基中加入酚红指示剂,若指示剂变蓝,则说明挑选到分解尿素的细菌。(×)刚果红能与培育基中的纤维素形成红色复合物。(√)纤维素酶只包含三种组分:C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。(×)挑选分解纤维素的微生物的培育基中是以纤维素为独一碳源的选择培育基。(√)二、在回首教材图表中加强学科能力下表为挑选分解尿素细菌的培育基,据此回答以下问题:KH2PO41.4gNa2HPO42.1gMgSO·7HO0.2g42葡萄糖10.0g尿素1.0g琼脂15.0g将上述物质溶解后,用自来水定容到1000mL在该培育基中尿素的作用是什么?琼脂的作用是什么?答案:尿素作独一氮源,起选择作用;琼脂作为凝结剂,用于制备固体培育基。对挑选出的细菌要进前进一步的判定,怎样判定?答案:在培育基中再加入酚红指示剂,培育细菌后,pH高升,指示剂将变红。培育基及微生物的纯化培育技术1.培育基的种类按物理状态分类:培育基种类特色用途液体培育基不加凝结剂工业生产加凝结剂微生物分别、判定,固体培育基(如琼脂)活菌计数,菌种收藏(2)按功能分类:种类制备方法原理用途举例依照某些微生物从众多微生物中加入青霉素分别选择培培育基中加入某对某些物质的抗分别所需的微生获得酵母菌和霉养基些化学物质性而设计物菌培育基中加入某用伊红—美蓝培鉴识培产生特定的颜色鉴识不一样种类的种指示剂或化学养基鉴识大肠杆养基或其余变化微生物药品菌微生物的纯化培育方法平板划线法稀释涂布平板法接种环的灼烧:(1)稀释操作时:每支试管及此中的9mL①第一次划线前:接种环上的微生物,避水、移液管等均需灭菌;操作时,试管口免污染培育物1~2cm处和移液管应在离火焰②每次划线前:杀死残留菌种,保证每次(2)涂布平板时:划线菌种来自上一次划线尾端70%酒精消毒,取①涂布器用体积分数为③划线结束后:杀死残留菌种,防止污染注意出时,让剩余酒精在烧杯中滴尽,而后将环境和感染操作者事项沾有少许酒精的涂布器在酒精灯火焰上引(2)灼烧接种环以后,要冷却后再进行操燃作,免得温度太高杀死菌种(3)②不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧划线时最后一地区不要与第一地区相杯中,免得引燃此中的酒精连(4)③酒精灯与培育皿距离要适合,移液管管划线使劲要大小适合,防备使劲过大头不要接触任何物体将培育基划破[例1]用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时( )①能够用同样的培育基②都需要使用接种针进行接种③都需要在火焰旁进行接种④都能够用来计数活菌A.①②

B.③④C.①③

D.②④[分析]

平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培育基,

故①正确;平板划线法采纳接种针进行操作,而稀释涂布平板法采纳涂布器进行操作,故②错误;纯化时,要进行无菌操作,需要在火焰旁接种,防止空气中的微生物混入培育基,故③正确;平板划线法一般用于分别而不是计数,故④错误。[答案]C微生物的挑选与计数挑选菌株原则:人为供给有益于目的菌生长的条件,同时克制或阻挡其余微生物的生长。菌株挑选原理的比较:土壤中分解尿素的细菌分解纤维素的微生物①选择培育基的成分:纤维素作为独一的碳①选择培育基的成分:尿素作为独一的氮源源②判定方法:在培育基中加入酚红指示剂,②判定方法:刚果红染色法,即刚果红与纤若指示剂变红,pH高升,说明细菌能分解尿维素形成红色复合物,当纤维素被分解后,素培育基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈统计菌落数目的方法显微镜直接计数法:①原理:利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算必定容积的样品中微生物的数目。②方法:用计数板计数。③弊端:不可以划分死菌与活菌。间接计数法(活菌计数法):①原理:当样品的稀释度足够高时,培育基表面生长的一个菌落,根源于样品稀释液中的一个活菌。经过统计平板上的菌落数,就能推断出样品中大概含有多少活菌。②计算公式:每克样品中的菌株数=(C÷V)×M,此中,C代表某一稀释度下平板上生长的均匀菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL),M代表稀释倍数。③操作:设置重复组,加强实验的说服力与正确性。同时为了保证结果正确,一般选择菌落数在30~300的平板进行计数。[例2](2012·海淀期中)从土壤中分别以尿素为氮源的细菌,以下实验操作不.正确的( )A.将土壤用无菌水稀释,制备10-3~10-5土壤稀释液B.将不一样浓度的土壤稀释液涂布于不一样平板上C.用加入刚果红指示剂的选择培育基挑选分解尿素的细菌D.从四周出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株[分析]从土壤中分别以尿素为氮源的细菌时,将土壤用无菌水稀释,制备土壤稀释液,将不一样浓度的土壤稀释液涂布于不一样平板上,用加入酚红指示剂的鉴识培育基能够鉴识分解尿素的细菌;从四周出现红色环带的菌落中挑取能够分泌脲酶的菌株。[答案]C易误点失误种类

不可以正确划分消毒和灭菌知识理解类失误[认知纠偏]消毒和灭菌的比较条件结果常用方法应用范围煮沸消毒法平时用品较为平和仅杀死物体表面或巴氏消毒法不耐高温的液体消毒的物理或内部的部分对人体化学方法有害的微生物化学药剂用酒精擦抹双手,用氯气消毒法消毒水源灼烧灭菌法接种工具激烈的理杀死物体内外全部干热灭菌法玻璃器皿、金属工具灭菌化要素的微生物,包含芽高压蒸汽孢和孢子培育基及容器的灭菌灭菌法[设误角度]高考命题常从以下角度设置圈套从各样邻近的选项中直接挑选消毒或灭菌的方法。给定操作对象,据此选择适合的消毒、灭菌方法。1.除了高温加热之外,其余灭菌方法还有( )A.紫外线照耀

B.真空包装C.用保鲜膜密闭

D.增添防腐剂分析:选

A灭菌是使用激烈的理化要素杀死物体内外全部的微生物

(包含芽孢和孢子)。此题中真空包装、增添防腐剂、用保鲜膜密闭都起到了抑菌作用,紫外线照耀使细菌的蛋白质变性,核酸受损坏,是灭菌方法。2.细菌培育过程中分别采纳了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不一样的办理,这些方法挨次用于杀灭哪些部位的杂菌( )A.接种环、手、培育基B.高压锅、手、接种环C.培育基、手、接种环D.接种环、手、高压锅分析:选C

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