人体机能学实验胃肠道运动观察概述

人体机能学实验胃肠道运动观察概述第1页/共21页人体机能学实验有机磷酸酯类中毒和

解救及胆碱酯酶活性测定第2页/共21页1.实验目的（1）观察有机磷酸酯类中毒的症状及阿托品和解磷定的解救效果（2）学习胆碱酯酶活性的测定方法，观察中毒前后及用不同药物解救后胆碱酯酶活性的变化第3页/共21页有机磷酸酯中毒原理第4页/共21页第5页/共21页有机磷酸酯类进入人体后，其含磷基团中亲电性的磷与但见酶酯解部位丝氨酸羟基中的亲和性氧进行共价键结合，生成磷酰化胆碱酯酶复合物。该复合物使胆碱酯酶活性难以恢复，从而使乙酰胆碱大量积聚，产生中毒症状。早期用胆碱酯酶复活药可部分恢复胆碱酯酶的活性，若抢救不当或中毒时间过长，胆碱酯酶一旦老化，再用胆碱酯酶复活药也作用不大。所以，一旦中毒，必须迅速抢救并尽早使用胆碱酯酶复活药第6页/共21页阿托品、解磷定解救原理阿托品抗胆碱药阿托品的作用机制为竞争性拮抗乙酰胆碱或拟胆碱药对M受体的激动作用，对M样症状有效。磷酰化胆碱酯酶复活的胆碱酯酶磷酰化碘解磷定复合物复活的胆碱酯酶第7页/共21页第8页/共21页实验材料实验动物：家兔，2.5-3.0kg，雌雄均可。实验药品5%敌百虫0.1%硫酸阿托品2.5%解磷定1%肝素10%草酸钾0.007M氯化乙酰胆碱，1M盐酸羟胺，3.5N氢氧化钠，4N盐酸，0.37M三氯化铁，磷酸缓冲液（pH7.2）第9页/共21页实验器材：婴儿秤，测瞳尺，注射器（2ml、5ml、10ml、20ml），头夹，滤纸，干棉球，比色杯，烧杯，试管架，10ml试管，微量移液器，漏斗，采血瓶，试管刷等。超级恒温水浴，722型分光光度计第10页/共21页实验方法1.取家兔，称重，分组，观察：活动情况呼吸（呼吸频率、有无呼吸困难、呼吸道分泌物）瞳孔大小（测瞳尺测量直径，注意光线的影响）唾液分泌：是否正常大小便：有无失禁肌张力：是否正常肌震颤：有无采取正常家兔心脏血样：1.0ml放入1号采血瓶

（注射器肝素抗凝；采血瓶草酸钾抗凝）第11页/共21页2.复制急性有机磷酸酯类中毒模型：耳缘静脉注射敌百虫1.5ml/kg，10-15分钟出现中毒症状观察中毒症状，方法体同上采取中毒后家兔心脏血样1.0ml放入2号采血瓶注意：采血时间在15-20分钟内或中毒症状明显时进行，勿迟亦勿早第12页/共21页3.有机磷酸酯类中毒解救：甲组：阿托品1.0ml/kg

乙组：解磷定4.0ml/kg10-15分钟症状缓解采取解救后家兔心脏血样1.0ml放入3号采血瓶

注意：采血时间为药物解救后的20分钟左右为宜（注射器肝素抗凝；采血瓶草酸钾抗凝）第13页/共21页4.胆碱酯酶活性测定：胆碱酯酶活性测定步骤见表1.

表1家兔血浆胆碱酯酶活性测定方法第14页/共21页操作注意事项：1）每加入一种试剂都要混匀，加血样时要将3个小瓶中的血样2）第二次水浴30min时用盐酸羟胺和氢氧化钠等容量混合配制碱性羟胺（用前20min配制）3）加入各种试剂的顺序不能颠倒4）过滤要充分，滤液澄清透明5）加样结束后各试管的容量相同第15页/共21页722分光光度计比色测定蒸馏水调零A3+（A2﹣A1）﹣A样为分解的Ach理论上所产生的光密度值选择λ=480nm测出光密度A1～A6计算酶活性值、活性百分数ChE活性酶活性百分数说明：A3﹣A1为加入的7µMAch的光密度值对照Ⅰ、对照Ⅱ、对照Ⅲ为无血零点管、有血零点管、标准Ach管第16页/共21页胆碱酯酶活性测定的原理操作方法及注意事项（三）胆碱酯酶活性测定的原理

在一定的温度、pH值和时间的条件下，水解乙酰胆碱的量和AChE活性成正比。因此，在一定量的血液中，加入一定量的Ach，在一定条件下反应一定时间，测定剩余Ach的量，即可推算出水解的Ach的量，从而推算出胆碱酯酶的活性。

测定剩余Ach的反应：第17页/共21页盐酸羟胺与氢氧化钠反应释放出游离羟胺

NH2OH·HCl+NaOH→NH2OH+NaCl+H2O剩余Ach与游离羟胺作用，生成羟肟酸

(CH3)3≡N-(CH2)2OCOCH3+NH2OH↓

CH3CONHOH+(CH3)3≡N-(CH2)2羟肟酸在酸性环境下和三氯化铁生成褐色络合物