液相色谱实验报告

创作时间：二零二一年六月三十天华南师范大年夜学实验陈述之老阳三干创作创作时间：二零二一年六月三十天液相色谱剖析混淆样品中的苯和甲苯一、实验目的1、掌握高效液相色谱定性和定量剖析的原理及方法；2、了解高效液相色谱的结构、原理及把持技术.二、实验原理高效液相色谱由储液器,泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部份构成,储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱内,因为样品溶液中的各组分在两相中拥有分歧的分派系数,在两相中作相对运动,经过频频频频的吸附—解吸的分派过程,各组分在挪动速度上发生较大年夜的分歧,被分别成单个组分挨次从柱内流出,经过检测器时,样品浓度被变换成电信号传递到记录仪.三、主要仪器和试剂主要仪器：岛津液相色谱仪(LC-10AT)[配有紫外检测器,PhenomenexODS柱]；10μL微量注射器创作时间：二零二一年六月三十天创作时间：二零二一年六月三十天试剂：苯标准溶液：10.0μL/mL；甲苯标准溶液：10.0μL/mL；苯、甲苯混淆标准溶液：1；甲醇：80%；苯和甲苯混淆待测溶液；四、实验步伐1、标准溶液的配制系列用100μL的微量注射器分别量取10μL、20μL、50μL、100μL的苯和甲苯的混淆标准溶液（10.0μL/mL）,再分别加入90μL、80μL、50μL、0μL甲醇将其稀释,作为待测液,其浓度分别为1μL/mL、2μL/mL、5μL/mL、10μL/mL2、色谱条件优化①按把持规程开机,并调好色谱条件,使仪器处于工作状态.控制流动相流速为甲醇：0.8mL/min、水：0.2mL/min；柱温30℃；检测波长254nm；察看记录保存时间,经过软件剖析两峰分别成效.②改变色谱条件,控制流动相流速为甲醇：0.95mL/min、水：0.05mL/min；柱温30℃；检测波长254nm；察看记录保存时间,经过软件剖析两峰分别成效.创作时间：二零二一年六月三十天创作时间：二零二一年六月三十天③经过察看两种色谱条件下的峰分别成效,选择最正确的色谱条件.若还不可以抵达最正确的分别成效,能够再设定分歧的色谱条件,而后依据峰分别成效,选择最正确的色谱条件.3、苯、甲苯定性剖析在最正确条件下,待基线走稳后,用10μL微量注射器分别进样5μL苯和甲苯混淆待测溶液,5μL苯标准溶液（10.0μL/mL）和5μL甲苯标准溶液（10.0μL/mL）(微量注射器用甲醇润洗3～5遍),察看并记录色谱图上显示的保存时间,确立苯和甲苯的峰.4、苯、甲苯定量剖析最正确条件下,待基线走稳后,用10μL微量注射器分别进样1.0μL/mL、5μL.察看并记录各色谱图上的保存时间和峰面积.绘制苯和甲苯混淆标准溶液峰面积与相应浓度的标准曲线.5、苯和甲苯混淆待测溶液剖析最正确条件下,待基线走稳后,用10μL微量注射器进样苯和甲苯混淆待测液5μL,察看并记录各色谱图上的保存时间和峰面积.依据峰面积在工作曲线上查出苯和甲苯待测液的浓度,并计算试样中苯和甲苯的含量.五、实验数据及剖析创作时间：二零二一年六月三十天创作时间：二零二一年六月三十天高效液相色谱数据陈述一、色谱条件优化μV(x100,000)2.0色谱1.595%1.080%0.50.0min二、定性剖析苯三、定分

样品苯甲苯量保存时间析苯、甲苯混淆标准溶液浓度分别为：1ul/ml,2ul/ml,5ul/ml,10ul/ml.10ul/ml苯甲苯面积(x1,000,000)面积(x1,000,000)2.03.01.52.51ul/ml2.01.01.50.51.00.50.0浓度0.07.50.0浓度浓度峰面积浓度峰面积1ul/ml2126851ul/ml3877102ul/ml4292912ul/ml7479835ul/ml9545375ul/ml153389210ul/ml190534310ul/ml2928373Y=aX+bY=aX+b创作时间：二零二一年六月三十天创作时间：二零二一年六月三十天四、未知样品浓度未知样品苯甲苯浓度2浓度12.9ul/ml六、实验议论①因为实验中待测溶液的组分只有苯和甲苯两种物质,组分比力简单,只需在实验过程中,严格控制且定量进样,就能采用把持、计算简易的标准曲线法得出正确的实验结果,因此采用标准曲线法.若采用归一化法或内标法,固然能获取正确更高的实验结果,但因为实验把持及计算均较为复杂,实验及数据处理的时间长,效率相对不高,故实验中采用标准曲线法作为定量的方法.②最正确色谱条件的选择是本实验正确度的重点.若苯与甲苯的峰分别成效过小,苯与甲苯的峰未能完整分别,一定影响其保存时间和峰面积的计算,是实验正确度减小,数据偏差加大年夜；若苯与甲苯的峰分别成效过好,固然能将苯与甲苯的峰完整分别,实验正确度好,但是耗资的实验时间较长,效率不好.因此,应选择适合的色谱条件.创作时间：二零二一年六月三十天创作时间：二零二一年六月三十天③为了提升标准曲线的拟合度,能够重复进样频频,