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文档简介
专题一基因工程的原理__________,操作对象___________,操作水平________,意义___________________________2.蛋白质工程的操作对象________,蛋白质工程的目的获得满足人类生产和生活需求的蛋白质思考,对天然蛋白质进行改造,直接对蛋白质进行操作,还是直接对基因进行操作,为什么?P26蛋白质工程基本途径_____________________________________________________________,蛋白质工程概念:指以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能的关系作为基础,________________________________________________________________________________蛋白质工程利用的手段?基因修饰和基因合成蛋白质工程与基因工程的区别?(蛋白质工程可以获得新的蛋白质,基因工程只能生产自然界已存在的蛋白质)天然蛋白质的合成过程是按照中心法则进行的基因工程的基本工具包括_____________________________________限制酶的特点____________________________________________________________________大多数限制酶的识别序列由____个核苷酸组成,可产生__________两种末端,限制酶主要是从___________分离出来的,破坏的化学键是______________DNA连接酶的种类有__________________________,其中从大肠杆菌中分离出来的是_____________,它连接的是_________末端,另一类是从T4噬菌体中分离的是___________,它连接的是_________末端,DNA连接酶连接的是_____________键,DNA连接酶是否具有特异性?_________载体的种类有____________________________,其中,最常用的运载体是________________,质粒是__________________________________________________________________________化学本质是__________,作为载体必备的条件?能够在受体细胞中稳定存在并自我复制,对受体细胞无害,有一个或多个酶切位点,具有标记基因思考:基因工程中使用的质粒是否是天然质粒?(不是,使用的是人工改造过的天然质粒)基因工程的基本操作步骤是_____________________________________________________,核心步骤为第____步,不涉及碱基互补配对的为第_____步,目的基因主要是______________________________,也可以是___________________________,获取目的基因的方法?从基因文库中获取,利用PCR技术扩增,人工合成,人工合成法常用的方法有反转录法,化学合成法。基因文库的分类?(基因组文库和部分基因文库(如cDNA文库)),cDNA文库和基因组文库的比较(P10)PCR技术扩增目的基因PCR扩增时,需要从基因组数据库卡中查询目的基因的核苷酸序列,以便根据这一序列合成引物用于PCR扩增。PCR的中文名称_________________,目的_______________,原理_____________,利用PCR技术扩增目的基因的前提_________________________,过程:________→_______→_______,在扩增时首先要加热到90-95度,目的是使DNA受热变性双链解旋成单链。在PCR过程中需要加入的物质即原料有__________________________________________,其中引物的实质是____________________,一般需要___种引物,引物与DNA链的_____端(5’端或者3’端结合,所用到的酶是_________,其实质是____________,它与体内DNA复制相比,没有用到的酶是__________,为什么____________,Taq酶与DNA聚合酶相比,有什么不同?_______________________,利用PCR技术进行扩增,DNA合成的方向总是从子链的5’端到3’端延伸。人工合成法适用的条件是___________________________________反转录法是将mRNA通过_________过程得到用到的酶是______________化学合成法是指直接用脱氧核糖核苷酸合成DNA。基因工程的核心是基因表达载体的构建,其目的是P11________________________一个基因表达载体的组成有_____________________________________________________,启动子的本质是DNA片段,作用________________________________,终止子本质是DNA片段
,而起始密码子和终止密码子是位于mRNA上,作用是驱动翻译的起始与终止,标记基因的作用_____________________________________________,目的基因的首尾两端插入到_____________________之间。构建基因表达载体的方法一般是用同一种限制酶来切割目的基因和运载体,再用DNA连接酶进行连接,易形成两两结合产物为目的基因-目的基因、运载体-运载体、目的基因-运载体,可如何防止?目的基因的两侧用不同的限制酶切割。经两种不同限制酶切割后的目的基因和运载体可以连接起来,原因是切割后产生的黏性末端相同,切割目的基因需切___次,产生____个黏性末端,基因工程第三步:将目的基因导入受体细胞转化的概念____________________________________________将目的基因导入植物细胞的方法?___________________________________,受体细胞为___________,其中最常用的方法是___________,能感染_________________植物,农杆菌的特点?(农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移到受体细胞并整合到受体细胞染色体的DNA上),原理是___________________________________________________________________,农杆菌转化法使用的载体是_________,其中植物的一个细胞能培养再生成植株,技术是_________________________,原理是____________________,单子叶植物常用的方法是_____________,转基因抗虫棉所使用的方法是_______________,为什么一般不用农杆菌转化法?______________________________。将Bt基因导入到水稻细胞时不宜采用农杆菌转化法?水稻是单子叶植物,农杆菌转化法对单子叶植物没有感染能力。如果将Bt基因成功整合到二倍体水稻细胞中的一条染色体上,则水稻________(填能、不能)稳定遗传将目的基因导入动物细胞的方法是__________________常用的受体细胞是_____________为什么?____________________________________将目的基因导入微生物细胞:原核生物作为受体细胞的原因是__________________________
,最常用的原核细胞是_____________,其转化方法是:用Ca2+处理后成为感受态细胞,原理是Ca2+能改变细胞膜的通透性,使细胞处于感受态,感受态细胞是什么?____________________________第四步:目的基因的检测和表达目的基因能否在真核生物中稳定遗传的关键是_________________________________________1.首先要检测目的基因是否插入转基因生物染色体DNA上,方法________________2.其次还要检测目的基因是否转录出mRNA,方法是____________________前两步的检测探针是否相同,探针是_________________________,所依据的原理是否相同,原理是_______________,3.最后检测目的基因是否翻译成蛋白质,方法是_____________________上述的检测是___________(分子检测还是个体检测),最终结果都是观察是否出现_杂交带有时还需进行个体水平的鉴定。如植物的抗虫或抗病的接种实验。最简便的检测方法是_______(分子检测还是个体检测)例:干扰素基因是否翻译出蛋白质,可用(干扰素)抗体(物质)进行检测乳腺生物反应器的基因表达载体的构建是将目的基因与________________启动子重组在一起,导入细胞的方法是__________,导入的细胞是___________,导入个体的性别有限制吗?____________乳腺生物反应器生产的药用蛋白需要与天然产品的活性相比较,以确定其是否与天然产品相同。干扰素的化学本质________,为抗________的特效药膀胱生物反应器与乳腺生物反应器的比较?(目的基因表达的细胞不同,膀胱生物反应器的外源基因在膀胱上皮细胞中表达。其优势体现在转基因动物既可以为雌性,也可以为雄性,且各个年龄段都能获取目的产物)基因治疗P23,概念:类型专题二细胞工程的操作水平_______________植物细胞工程有哪些技术?_______________________________相应的原理为_________________________________________
全能性的概念?大小比较?(具有某种生物全部遗传信息或全套遗传物质的细胞都具有发育成完整生物体的潜能,一般与分化程度成反比,与分裂能力成正比)(受精卵>生殖细胞>干细胞>体细胞;植物细胞>动物细胞)
在生物的生长发育过程中,细胞并没有表现出全能型,而是分化成各种组织和器官,原因是基因的选择性表达植物组织培养的过程?(离体的植物器官、组织或细胞(脱分化)愈伤组织(再分化)胚状体或根、芽→植物体)
脱分化概念?(已经分化的细胞经诱导后失去其特有的结构和功能转化为未分化细胞的过程。)
愈伤组织的特征?(排列疏松,高度液泡化,具有分生能力的薄壁组织)脱分化,再分化过程的比较?(都需要添加植物激素(生长素和细胞分裂素),但二者含量比例不同(翻书P35)。另脱分化要严格避光,再分化过程需要光照)思考:为什么再分化需要光照?脱分化的实质是细胞重新获得分裂能力,再分化的实质是基因的选择性表达在植物组织培养过程中生长素的作用,细胞分裂素的作用(翻书P42)植物胡萝卜培养时,取材为形成层,原因是易形成愈伤组织,胡萝卜的其他部分如茎叶花是否能培养成植株?能(课后习题)植物组织培养的条件是___________________________________________________________,植物组织培养的培养基在形态上是固体还是液体_______其中需要加入蔗糖,作用是1.提供能量2.调节渗透压植物体细胞杂交技术包括的两个步骤是______________________________________________,相对应的原理是_______________________________________,生殖方式为有性还是无性______,过程①:去壁。(酶解法)用纤维素酶和果胶酶去壁②:原生质体的融合(利用了细胞膜的流动性)(两两融合可形成___种细胞,要进行筛选。)诱导融合方法:物理法包括___________________等。化学法常用______________作为诱导剂。融合后形成的细胞称为杂种细胞③融合完成的标志,有新的细胞壁生成,参与此过程的细胞器有高尔基体和线粒体,可通过质壁分离与复原实验来判断,注意用_______(等渗还是低渗高渗)溶液融合。④植物组织培养。意义:克服了远缘杂交不亲和的障碍。植物组织培养的应用?(微型繁殖、作物脱毒、制造人工种子、单倍体育种、细胞产物(培养到愈伤组织)的工厂化生产。)作物脱毒:可选________进行培养,原因是________________________人工种子包括______________________,与天然种子相比的优点是_______________________________________________________________________________,为了促进胚状体的生长发育,还可以向人工种皮中加入哪些物质?______________________单倍体育种包括哪两个步骤__________________________________,意义________________________________________________突变体的利用:可对植物的愈伤组织进行诱变处理,原理为:____________________________细胞产物的工厂化生产一般培养到__________阶段,用液体培养基动物细胞工程包含哪些技术?(动物细胞培养(基础),核移植技术,动物细胞融合,生产单克隆抗体)动物细胞培养原理?____________实例:用培养的人细胞构建人造皮肤(课本上的例子)动物细胞培养过程?(选材:取__________________________________(分裂能力强,分化程度低)→______→用__________酶或________酶处理(目的:去掉组织间蛋白质,使组织分散成单个细胞,能不能用胃蛋白酶,原因_______________)→制成细胞悬液→原代培养(特点:细胞贴壁和接触抑制)→贴满瓶壁的细胞重新用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理分散成单个细胞继续传代培养。)动物细胞培养的条件?(四点)____________________________________________________①__________的环境:操作:1___________________。2.在培养液中添加_________,原因:__________________。3.应定期更换培养液,目的:防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。②______:合成培养基成分:糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。通常需加入血清、血浆等天然成分。培养液在形态上是液体培养液,糖是指葡萄糖,④气体环境:把培养瓶放在95%空气+5%CO2。O2作用:是细胞代谢所必需的,CO2主要作用:维持培养液的pH。动物核移植技术原理_______________________________,动物核移植分为胚胎细胞核移植和体细胞核移植,为什么体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移植?___________________________________体细胞核移植过程受体细胞为MⅡ中期(不能写成减二中期)的________细胞,并对受体细胞进行________处理,普遍去核的方法是________________,并用吸管吸出细胞核和第一极体,然后将供体细胞注入去核卵母细胞,用______________方法(如________________________________)激活受体细胞,使其完成细胞分裂和发育进程,通过____________使两细胞融合,供体核进入受体卵母细胞,构建重组胚胎。最后所得的动物为动物是克隆动物,生殖方式为__________,思考:在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前,为什么必须先去掉受体卵母细胞的核?_________________________________________________________________________________用于核移植的供体细胞一般是__________________________,为什么______________________ 克隆动物是对供体动物的100%的复制吗?____________________________________________动物体细胞核移植过程中设计的技术有:______________________________________________动物细胞融合原理?(细胞膜的流动性)诱导动物细胞融合的方法?(物理法包括离心、振动、电刺激(字不能写错)等。化学法:聚乙二醇(PEG)。生物法:灭活的病毒)动物细胞融合与原生质体的融合相比,特有的方法是___动物细胞融合的意义?克服了远缘杂交的不亲和性,融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞,称为杂交细胞单克隆抗体的制备从免疫小鼠中得到__________细胞,___________和___________两种细胞融合,再用选择性培养基进行筛选,目的:筛选出杂交瘤细胞,还需进行克隆化培养和抗体检测,目的:筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞。最后,将杂交瘤细胞________________培养或____________增殖,从___________和____________提取大量的单克隆抗体。B淋巴细胞的特点:______________________骨髓瘤细胞的特点:_________________________杂交瘤细胞的特点:既能大量繁殖,又能产生专一的抗体。单克隆抗体的优点:特异性强,灵敏度高,并能大量制备。单克隆抗体的作用:①
作为诊断试剂:②
用于治疗疾病和运载药物:主要用于癌症治疗,可制成“生物导弹”单克隆抗体最广泛的用途是______________________专题三精细胞变形成精子?细胞核变为精子头部的主要部分,高尔基体发育为头部的顶体,中心体演变为精子的尾,线粒体聚集在尾的基部形成线粒体鞘,其他物质浓缩成原生质滴最后随精子成熟脱落,最终,细胞核和线粒体保留下来(了解)精子发生的场所是睾丸,卵子的发生的场所是卵巢和输卵管,精子和卵子在发生上的重要区别是:哺乳动物卵泡的形成和在卵巢内的准备,是在出生前(即胎儿时期)完成的。卵子发生过程中,减数第一次分裂是在完成的,减数第二次分裂是在完成的,卵子是否受精的重要标志是_________________________排卵是指卵子从卵泡中排出,排出的细胞可能是,它不是成熟的卵子。受精包括准备阶段和受精阶段,准备阶段包括精子获能(在雌性动物生殖道)和卵子的准备(在输卵管中进一步成熟,达到MⅡ中期)受精是在雌性动物的输卵管内完成的受精前的准备包括_____________和________________受精过程主要包括:精子穿越放射冠和透明带,进入卵黄膜,原核形成和配子结合。受精阶段:顶体反应,透明带反应,卵细胞膜反应。防止多精入卵的屏障?(第一道屏障:透明带反应、第二道屏障:卵细胞膜反应)受精的标志:受精完成的标志:胚胎发育的过程:受精卵→桑椹胚→囊胚→原肠胚→幼体,卵裂期:特点:细胞有丝分裂,细胞数量不断增加,但胚胎的总体积并不增加,或略有缩小。
__________前的每一个细胞都具有发育成完整胚胎的潜能,属于全能细胞。________阶段的细胞开始出现分化。内细胞团将来发育胎儿的各种组织,滋养层细胞将来发育成胎膜和胎盘。____________细胞具有发育的全能型从________个阶段开始出现胚层分化。试管动物技术包括___________________________________________________________,发育的起点是___________,生殖方式是,克隆动物技术包括___________________________________________,发育的起点是_________,生殖方式_____________,体外受精主要包括三个步骤_________________________________________________卵母细胞的采集:对于实验动物,一般用促性腺激素处理,方法是超数排卵。精子的获能,体外获能方法有培养法和化学诱导法,对于啮齿动物家兔猪,采用培养法,放入人工配制的获能液中,对于牛羊家畜,采用化学诱导法,放在一定浓度的的肝素或钙离子载体中。受精是指将获能的精子和培养成熟的卵子,放在获能液或专用受精溶液中完成。早期胚胎培养是把受精卵移入发育培养液中培养,成分包括:_____________________________________(两盐,两素,两酸,一血清),而动物细胞培养营养成分包括葡萄糖,氨基酸,促生长因子,无机盐,微量元素,以及血清血浆。早期胚胎培养的目的是以检查受精状况和受精卵的发育能力。___________是胚胎工程其他技术的最后一道工序。它的生殖方式是________胚胎移植的优势是___________________________________________胚胎的来源是_____________________________________________供体的主要职能是_______
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