培养基的配制和灭菌

培养基的配制和灭菌第1页/共15页学习培养基配制的原理和基本步骤

学习高压蒸汽灭菌的原理和方法

实验目的第2页/共15页实验原理第3页/共15页一、常用器皿的洗涤与包扎：试管（塞）：10支三角瓶250mL（棉塞）：1个1ml吸管6支,10ml吸管1支培养皿10个（一包）制作涂布器2个：用酒精灯将以上用品包扎后，灭菌。三.实验步骤—培养基的配制第4页/共15页二．牛肉膏蛋白胨培养基的制备（斜面1支/人、培养皿1个/人、三角瓶固体200mL/3组）配方：营养肉汤1.8g琼脂2g固体培养基2%(1.5-2.5%)蒸馏水100mL

三.实验步骤—培养基的配制第5页/共15页1.斜面的制备准确地称取营养肉汤1.8*2g放入烧杯中。在上述烧杯中先加入200ml水，用玻棒搅匀，然后，将称好的琼脂4g加入，再加热溶化，溶化时需要用玻棒不停搅拌。必要时补足所损失的水分。将配制的培养基分装入试管内，每支试管约4ml。（注意：每人1支试管，3个组一起做）。加塞，包扎后，灭菌。注意：在琼脂溶化过程中，应控制火力，以免培养基因沸腾而溢出容器。同时，需不断搅拌，以防琼脂糊底烧焦。配制培养基时，不可用铜或铁锅加热溶化，以免离子进入培养基中，影响细菌生长。三.实验步骤—培养基的配制第6页/共15页2.固体培养基的制备准确地称取营养肉汤1.8*2g放入三角瓶中。加入200ml水，然后，将称好的琼脂4g加入，用玻棒搅拌均匀。加塞，包扎后，灭菌。每3组1瓶。注意：在制备用三角瓶盛固体培养基时，一般也可先将一定量的液体培养基分装于三角瓶中，然后按1.5%~2.0%的量将琼脂直接分别加入各三角瓶中，不必加热溶化，而是灭菌和加热溶化同步进行，节省时间。三.实验步骤—培养基的配制第7页/共15页说明：加塞：培养基分装完毕后，在试管口和三角瓶口上塞上棉花塞（或泡沫塑料塞），以阻止外界微生物进入培养基内而造成污染，并保证有良好的通气性能。包扎：加塞后，将全部试管用麻绳捆好，再在棉塞外包一层牛皮纸，以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞，其外再用一道麻绳扎好。标记：用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。三角烧瓶加塞后，外包牛皮纸，用麻绳以活结形式扎好，使使用时容易解开，同样用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。三.实验步骤—培养基的配制第8页/共15页4．灭菌将上述培养基以0.103Mpa,121℃,20min高压蒸气灭菌.5.搁置斜面将灭菌的试管培养基冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多),将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。6.到固体平板将灭菌培养基降温50℃，到固体平板。三.实验步骤—培养基的配制第9页/共15页高压蒸汽灭菌操作步骤：121℃,20min（15-30min）

1.首先将内层锅取出，再向外层锅内加适量的水，使水面与三角架相平为宜。注意：切勿忘记加水，同时加水量不可过少，以防灭菌锅干而引起爆炸事故2.放回内层锅，并装入灭菌物品。注意：不要装得太挤，以免防碍蒸气流通而影响灭菌效果。三角瓶与试管口端不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞

三.实验步骤—高压蒸汽灭菌第10页/共15页3.加盖，并将盖上的排气软管插入内层锅的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。4.加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸气压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制电源，维持压力至所需时间。本实验用0.1MP，121.5℃，20分钟灭菌。注意：灭菌的主要因素是温度而不是压力。故锅内冷空气必须完全排尽后，才能关上排气阀，维持所需压力。

三.实验步骤—高压蒸汽灭菌第11页/共15页5.灭菌时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至“0”时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。注意：压力必须降至“0”时才能打开排气阀，开盖取物。否则，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出烧瓶口或试管口，造成棉塞沾染培养基而发生污染，甚至灼伤操作者。