色谱柱的选择博纳艾杰尔科技

色谱柱的选择博纳艾杰尔科技第一页，共三十页，2022年，8月28日影响C18色谱柱性能的主要因素色谱柱与色谱填料的特性1、柱填料

硅胶纯度粒径比表面积孔径2、色谱柱的构型

色谱柱直径色谱柱长度3、固定相键合类型残余硅羟基的影响反相键合相的保留行为键合硅胶的稳定性物理因素化学因素第二页，共三十页，2022年，8月28日柱填料对色谱柱性能的影响第三页，共三十页，2022年，8月28日柱填料对C18色谱柱性能的影响：硅胶纯度I2.3-二羟基萘2.7-二羟基萘TF=1.31BrandW,AQColumn5μm,4.6mm×150mm

BrandZ,C18Column5μm,4.6mm×150mm

VenusilMPC185μm,4.6mm×150mmBrandH,C18Column5μm,4.6mm×150mmBrandU,C18Column5μm,4.6mm×150mm！TF=1.42TF=1.39TF=1.69TF=？流动相：

甲醇：水=65：35流速：

1mL/min温度： 35℃检测波长： 230nm进样量： 20μL硅胶纯度－金属含量第四页，共三十页，2022年，8月28日柱填料对C18色谱柱性能的影响：硅胶纯度II

硅胶纯度－金属含量d第五页，共三十页，2022年，8月28日柱填料对C18色谱柱性能的影响：粒径

硅胶粒径和类型对柱效的影响d硅胶粒径和类型对压力的影响第六页，共三十页，2022年，8月28日柱填料对C18色谱柱性能的影响：粒径II

目前市场主要可供选择的填料粒径1.7μm，1.8μm，2.2μm－快速液相色谱柱：匹配快速色谱仪

2.7μm－多孔壳层：在常规液相色谱仪上实现快速分离(Halo)3.0μm，3.5μm－普通快速分析5.0μm－常规分析颗粒越小，柱效越高,但是耐污染性能下降，柱压升高.第七页，共三十页，2022年，8月28日柱填料对C18色谱柱性能的影响：比表面积

每克填料的表面积，与粒度，孔径有关比表面积大，保留增加，载样量增加，平衡时间增加(梯度洗脱尤为注意)根据需要选择合适的比表面积第八页，共三十页，2022年，8月28日柱填料对C18色谱柱性能的影响：孔径I

多孔材料的95%以上表面在孔内部样品分子直径小于平均孔径，才能进入微粒内部孔径至少是样品流体学直径的4倍

300Ǻ孔径用于：超过50个氨基酸的肽或25个残基的低聚寡核苷酸样品分子直径小于平均孔径，才能进入微粒内部第九页，共三十页，2022年，8月28日柱填料对C18色谱柱性能的影响：孔径II

小生物分子的保留值在小孔径填料通常更大条件： C8色谱柱，4.6×150mm， 3.5um，A溶剂，0.1%TFA水溶液；B溶剂，0.1%TFA于80%乙腈－

水中；20min梯度，10 30%B；60°C， 1.5ml/min第十页，共三十页，2022年，8月28日色谱柱的构型对色谱柱性能的影响第十一页，共三十页，2022年，8月28日色谱柱的构型对色谱柱性能的影响：长度和直径色谱柱尺寸对色谱分离的影响：•短柱(15-100mm)-运行时间短,柱压低

•长柱(150-250mm)-分辨率高,运行时间长

•窄径柱(2.1mm)-检测器灵敏度高•宽径柱(3-21.2mm)-载样量高第十二页，共三十页，2022年，8月28日固定相对色谱柱性能的影响第十三页，共三十页，2022年，8月28日固定相对色谱柱性能的影响：键合类型A纵向交联：保留和选择不稳定B横向交联：宽pH适用，Durashell，C单体键合：重现性好，柱效高D单体（空间保护）：低pH稳定（VenusilASB）第十四页，共三十页，2022年，8月28日固定相对色谱柱性能的影响：残余硅羟基的影响残余硅羟基的影响普通硅胶当流动相的pH值大于4.5-5.0时，表面的硅羟基会带负电荷，碱性化合物拖尾。解决方法封尾双层表面修饰第十五页，共三十页，2022年，8月28日固定相对色谱柱性能的影响：残余硅羟基的影响封尾键合填料与小硅烷进行后续反应，如三甲基氯硅烷，反应掉部分残余硅羟基，以增加表面覆盖率。缺点：不能完全反应（仍有50%的硅羟基未被反应）在pH<3时，TMS易流失，耐用性，稳定性不好TMS第十六页，共三十页，2022年，8月28日固定相对色谱柱性能的影响：残余硅羟基的影响不同长度和体积的键合相对表面覆盖率的影响第十七页，共三十页，2022年，8月28日固定相对色谱柱性能的影响：残余硅羟基的影响双层表面修饰降低表面硅羟基活性，硅胶表面更加均匀第十八页，共三十页，2022年，8月28日固定相对色谱柱性能的影响：残余硅羟基的影响硅胶双层表面修饰后

新增加表面层硅羟基活性更低－新硅羟基pH=5.2，普通硅羟基pH约为3.5更对称的峰型

硅胶表面更均匀－硅胶微晶形成过程中的不光滑表面被覆盖重现性更好

表面纯度更高－硅胶金属杂质被覆盖极性化合物保留和分离更好第十九页，共三十页，2022年，8月28日固定相对色谱柱性能的影响：残余硅羟基的影响双层表面修饰代表产品：VenusilMPC18，VenusilASBC18，Venusil

HILIC0.01ng/mLPseudoephedrineAgelaVenusilASBC18,2.1×50mm,5µmBrand

A

C182.1×50mm,5µmPhenomenexLunaC18,2.0×50mm,5µm第二十页，共三十页，2022年，8月28日固定相对色谱柱性能的影响：反相键合相的保留行为同一厂家相同硅胶基质的反相柱：

保留值随含碳量的增加而增加比表面积越大，保留值越大键合碳链越长，保留越大C18

C8>C3>C1，长链之间差别不大≈第二十一页，共三十页，2022年，8月28日固定相对色谱柱性能的影响：反相键合相的保留行为不同厂家色谱柱的保留值，选择性与峰型色谱柱：4.6*150mm，流动相：乙腈－0.05M磷酸钾缓冲液，pH3.2(65:35);流速：1ml/min，拖尾峰T0（尿嘧啶）P:

吡啶L:

苯酚N:

N,N-二甲基苯胺

B:

4-丁基苯甲酸J:

甲苯第二十二页，共三十页，2022年，8月28日固定相对色谱柱性能的影响：键合硅胶的稳定性键合硅胶的稳定性

低pH值，键合相流失高pH值，硅胶溶解影响色谱柱寿命，方法不重现

第二十三页，共三十页，2022年，8月28日固定相对色谱柱性能的影响：键合硅胶的稳定性低pH值，键合相流失第二十四页，共三十页，2022年，8月28日固定相对色谱柱性能的影响：键合硅胶的稳定性空间位阻保护，延缓键合相流失空间位阻键合代表产品：VenusilASBC18ZorbaxSBC18第二十五页，共三十页，2022年，8月28日固定相对色谱柱性能的影响：键合硅胶的稳定性高pH值，硅胶基质溶解pH9时，色谱柱的稳定性第二十六页，共三十页，2022年，8月28日固定相对色谱柱性能的影响：

键合硅胶的稳定性碳杂化，延硅胶缓高pH值水解表面碳杂化Agela

DurashellRP表面碳杂化示意图第二十七页，共三十页，2022年，8月28日博纳艾杰尔为您提供全面的LC解决方案2010版药典LC方法开发服务全面的色谱柱选择低pH条件色谱柱（pH=0.8）VenusilASBC18高pH条件色谱柱（pH=1-12）