大肠菌群检测操作规范培训

大肠菌群检测操作规范培训质量管理部大肠菌群检测操作规范培训第1页目录一、细菌介绍二、大肠杆菌生物学特征三、大肠杆菌检测仪器、设备四、检测培养基及试剂五、检测前培养基准备六、接种培养七、MPN单位介绍八、检测注意事项大肠菌群检测操作规范培训第2页一、细菌介绍细菌是单细胞原核微生物，个体微小（细胞直径约0.5μm,0.5-5μm），结构简单，以二等分裂方式繁殖。在自然界中，细菌分布最广、数量最多。大肠菌群检测操作规范培训第3页1、细菌形态细菌个体微小、形态各异球菌杆菌弧菌与弯曲菌螺旋菌及螺旋体不规则形弧菌大肠菌群检测操作规范培训第4页2、细菌结构细菌基本结构包含：细胞壁、细胞膜、间体、细胞浆、核糖体、细胞质。细菌从属结构包含：质粒、荚膜、鞭毛、菌毛和芽胞。大肠菌群检测操作规范培训第5页3、细菌繁殖细菌最普遍、最主要繁殖方式：二分分裂繁殖。在分裂前先延长菌体，染色体复制为二，然后垂直于长轴分裂，细胞赤道附近细胞质膜凹陷生长，直至形成横隔膜，同时形成横隔壁，这么便产生两个子细胞。

大肠菌群检测操作规范培训第6页4、细菌菌落单个或少数细菌细胞生长繁殖后，会形成以母细胞为中心一堆肉眼可见、有一定形态结构子细胞集团－菌落。大肠菌群检测操作规范培训第7页细菌菌落常表现为湿润、粘稠、光滑、较透明、易挑取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位颜色一致等。

大肠菌群检测操作规范培训第8页细菌菌落图大肠菌群检测操作规范培训第9页二、大肠杆菌生物学特征大肠菌群系指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。主要包含埃希氏菌、柠檬酸细菌、肠杆菌、克雷伯氏菌等，均属于肠杆菌。大肠菌群检测操作规范培训第10页大肠菌群以大肠埃希氏菌为主，是革兰氏阴性、两端钝圆杆菌，无芽孢，以周生鞭毛运动或不运动。最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围为15-46℃。大肠菌群检测操作规范培训第11页1、大肠杆菌平板菌落照片大肠菌群检测操作规范培训第12页2、大肠杆菌革兰氏染色照片大肠菌群检测操作规范培训第13页3、大肠杆菌微菌落照片大肠菌群检测操作规范培训第14页4、大肠杆菌透射电镜照片大肠菌群检测操作规范培训第15页5、大肠杆菌扫描电镜照片大肠菌群检测操作规范培训第16页6、大肠杆菌分裂照片大肠菌群检测操作规范培训第17页三、检测仪器、设备

冰箱：0～4℃恒温培养箱：36±1℃恒温水浴锅：46±1℃微生物显微镜大肠菌群检测操作规范培训第18页架盘药品天平：0g～500g，准确至0.5g三角瓶：500ml灭菌吸管：1ml、10ml灭菌平皿：直径90mm试管：18×180mm大肠菌群检测操作规范培训第19页四、检测培养基及试剂乳糖胆盐发酵管伊红美蓝琼脂乳糖发酵管革兰氏染色液生理盐水大肠菌群检测操作规范培训第20页乳糖胆盐发酵管：用于大肠菌群测定。35g乳糖胆盐于1升蒸馏水中，溶解，分装于发酵试管中，放入小倒管，115℃15分钟高压灭菌。双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其它成份加倍。大肠菌群检测操作规范培训第21页乳糖发酵管：大肠菌群证实试验用。30g乳糖于1升蒸馏水中，溶解，分装于发酵试管中，放入小倒管，115℃15分钟高压灭菌。大肠菌群检测操作规范培训第22页伊红美兰琼脂：用于大肠菌群固体平板检测。37.5g于1升蒸馏水中，摇匀，加热煮沸，121℃15分钟高压灭菌。大肠菌群检测操作规范培训第23页五、检测前培养基准备检验预先经过灭菌处理乳糖胆盐发酵培养基小导管内是否有气体。按产品品种将培养基分别放在试管架内，同时将9ml0.85%灭菌盐水管也放入对应试管架内。大肠菌群检测操作规范培训第24页六、接种培养（一）酸牛奶系列产品酸牛奶系列产品接种单料乳糖胆盐发酵培养基9支管，分别接种样品量为1ml(原浓度)3支，0.1ml(10-1浓度)3支，0.01ml(10-2浓度)3支。

大肠菌群检测操作规范培训第25页1、1ml接种培养在无菌条件下，用1ml灭菌吸管吸收1ml样品试液于含有9ml0.85%灭菌盐水试管中，振荡摇匀制成1:10稀释液；同时分别吸收1ml样品试液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。大肠菌群检测操作规范培训第26页2、0.1ml接种培养另换1根1ml灭菌移液管吸收1:10稀释液1ml于含有9ml0.85%灭菌盐水试管中，振荡摇匀制成1:100稀释液；同时分别吸收1ml1:10稀释液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。大肠菌群检测操作规范培训第27页3、

0.01ml接种培养另换1根1ml灭菌移液管分别吸收1ml1:100稀释液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。大肠菌群检测操作规范培训第28页4、接种过程操作录像检测\单料大肠检测.MPG大肠菌群检测操作规范培训第29页5、接种后培养将接种完试管连同试管架一起置于36±1℃培养箱内培养24±2h，观察乳糖胆盐发酵管改变情况。大肠菌群检测操作规范培训第30页6、结果查询并统计若全部乳糖胆盐发酵管都不产酸产气，则汇报大肠菌群阴性。若有产酸产气，则要做证实试验。大肠菌群检测操作规范培训第31页（二）活性乳酸菌饮料系列产品活性乳酸菌饮料系列产品接种双料乳糖胆盐发酵培养基3支管，单料乳糖胆盐发酵培养基6支，分别接种样品量为10ml3支，1ml3支，0.1ml3支。大肠菌群检测操作规范培训第32页1、10ml接种培养在无菌条件下，用1ml灭菌吸管吸收1ml样品试液于含有9ml0.85%灭菌盐水试管中，振荡摇匀制成1:10稀释液；同时用10ml灭菌吸管分别吸收10ml样品试液于3支双料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。大肠菌群检测操作规范培训第33页2、1ml接种培养另用1ml灭菌移液管分别吸收1ml样品试液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。大肠菌群检测操作规范培训第34页3、0.1ml接种培养另换1根1ml灭菌移液管分别吸收1ml1:10稀释液于3支单料乳糖胆盐发酵管内，并轻微振荡摇匀，放入原位置。大肠菌群检测操作规范培训第35页4、接种过程操作录像检测\双料大肠检测.MPG大肠菌群检测操作规范培训第36页5、接种后培养将接种完试管连同试管架一起置于36±1℃培养箱内培养24±2h，观察乳糖胆盐发酵管改变情况。大肠菌群检测操作规范培训第37页6、结果查询并统计若全部乳糖胆盐发酵管都不产酸产气，则汇报大肠菌群阴性。

若有产酸产气，则要做证实试验。大肠菌群检测操作规范培训第38页（三）证实试验1、伊红美蓝琼脂平板分离将产酸产气乳糖胆盐发酵管内培养物分别接种于伊红美兰琼脂平板(划线分离)，置于36±1℃培养箱内培养24±2h。大肠菌群检测操作规范培训第39页接种和分离工具1．接种针2.接种环3.接种钩4.5.玻璃涂棒6.接种圈7.接种锄8.小解剖刀大肠菌群检测操作规范培训第40页平板分离画线法1.斜线法2.曲线法3.方格法4.放射法5.四格法大肠菌群检测操作规范培训第41页将伊红美蓝琼脂平板从培养箱取出后,观察菌落形态，并做革兰氏染色和乳糖复发酵试验。革兰氏染色：见《革兰氏染色及镜检操作规范》。大肠菌群检测操作规范培训第42页（四）乳糖发酵试验挑取可疑菌落进行革兰氏染色后接种乳糖发酵培养基，置于36±1℃培养箱内培养24±2h，观察产气情况。大肠菌群检测操作规范培训第43页凡是革兰氏阴性无芽孢杆菌乳糖发酵管产酸产气菌落即可汇报大肠菌群阳性。大肠菌群检测操作规范培训第44页依据证实为大肠菌群阳性管数，查MPN检索表，查找每100ml样品内大肠菌群MPN值。将检测结果填入《微生物检测汇报单》，并及时传递给相关部门。大肠菌群检测操作规范培训第45页七、MPN单位介绍MPN=MostProbableNumber，最大可能数，是一个利用统计学检测微生物方法。食品大肠菌群是以每克或100ML中大肠菌群最近似值，是用MPN来表示。大肠菌群检测操作规范培训第46页采取9管法，对样品选三个稀释度，每个稀释度接种三管对应培养基进行培养，然后依据情况做出判断阳性和阴性，再依据不一样稀释度阳性管数查表即可得到被测样品对应指标MPN值。大肠菌群检测操作规范培训第47页八、注意事项

乳糖胆盐发酵管内小导管内如无气泡，需轻振试管，若有气泡上冒，也算产气。在伊红美蓝琼脂平