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文档简介

革兰染色法临床病原生物学教研室前言

近年来，微生物学检验技术发展很快，出现了许多新的检验方法和技术，比如半自动和全自动微生物鉴定系统，但微生物的鉴定和分类仍然离不开传统的手工鉴定方法。如，痰标本在分离培养时所接种的血琼脂平板麦康凯及沙氏培养基，在鉴定时我们首先观察培养基上细菌的菌落特征，如颜色、气味、湿润度、有无溶血等，我们用什么方法对细菌进行进一步的分类与鉴定呢？在细菌学最常用的就是革兰染色法。革兰染色原理

革兰阳性菌⑴细胞壁结构致密（肽聚糖层厚），脂质含量少，乙醇不易渗入脱色。⑵等电点低（pI2~3)；⑶细胞质内含有大量的核糖核酸镁盐，与结晶紫和碘牢固结合，使已着色的细菌不易被乙醇脱去。

革兰阴性菌⑴细胞壁结构疏松（肽聚糖层薄)，脂质含量多，乙醇溶解脂质后易渗入细胞而脱色。⑵等电点高（pI4~5)；⑶细胞质内含有少量的核糖核酸镁盐，吸附染料少，易被乙醇脱色。实验目的1.掌握细菌涂片制作方法；2.掌握革兰染色法和细菌的基本形态；3.了解革兰染色法的临床意义。

实验器材和试剂1.标本：葡萄球菌和大肠埃希菌的培养物。2.试剂：结晶紫、卢戈碘液、95％乙醇、稀释石炭酸复红。3.其他：载玻片、生理盐水、接种环、酒精灯、显微镜。快速染液的步骤1.加龙胆紫夜染色10秒，水洗，甩干；（龙胆紫，乙醇）2.加碘溶液染色10秒，水洗，甩干；（碘，碘化钾）3.加脱色液脱色（10-20）秒，水洗，甩干；（丙酮，乙醇）4.加沙黄溶液复染10秒，水洗；（沙黄，乙醇）5.以滤纸吸干标本或在空气中自然干燥后，镜检。使用快速染液的注意事项1.妇科白带需延长时间；2.用完后，请迅速盖好，以免挥发；3.室温低时，染色时间适当延长；4.不与其它物品混淆。操作步骤2.革兰染色⑴初染：将结晶紫加于制好的涂片上，染色1min，用细流水冲洗，甩去积水。⑵媒染：加卢戈碘液作用1min，用细流水冲洗，甩去积水。⑶脱色：滴加95％乙醇数滴，摇动玻片，使均匀脱色（15~30S)，用细流水冲洗，甩去积水。⑷复染：加稀释石炭酸复红30S，用细流水冲洗，甩去积水。染色结果观察染色结果观察影响染色因素⑴操作因素：涂片太薄或太厚，固定时菌体过分受热以及脱色时间长短，都会影响染色结果。⑵染液因素：所有染液应防止染液蒸发，特别是卢戈碘液久存或受光作用后失去媒染作用；涂片积水过多改变浓度，影响染色效果，如脱色用的乙醇以95％为宜，浓度降低会增强其脱色能力。⑶细菌因素：一般以18~24小时的培养物染色效果最好。临床意义1.通过革兰染色将所有细菌分为G+菌和G-菌两大类，可初步识别细

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