第十章维生素类药物的分析课件

第十

章维生素类药物的分析2023/3/10维生素：是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物资。人体不能合成维生素2023/3/10

公元前3500年-古埃及人发现能防治夜盲症的物质，也就是后来的维A。

1600年-医生鼓励以多吃动物肝脏来治夜盲症。

1747年-苏格兰医生林德发现柠檬能治坏血病，也就是后来的维C。

1831年-胡萝卜素被发现。

1905年-甲状腺肿大被碘治愈。

1911年-波兰化学家丰克为维生素命名。

1915年-科学家认为糙皮病是由于缺乏某种维生素而造成的1916年-维生素B被分离出来。

1917年-英国医生发现鱼肝油可治愈佝偻病，随后断定这种病是缺乏维D引起的。

维生素发展史2023/3/101920年-发现人体可将胡萝卜转化为维生素A。

1922年-维E被发现。

1928年-科学家发现维B至少有两种类型。

1933年-维E首次用于治疗。

1948年-大剂量维C用于治疗炎症。

1949年-维B3与维C用于治疗精神分裂症。

1954年-自由基与人体老化的关系被揭开。

1957年-Q10多酶被发现。

1969年-体内超级抗氧化酶被发现。

1970年-维C被用于治疗感冒。

1993年-哈佛大学发表维生素E与心脏病关系的研究结果。返回2023/3/10脂溶性：

VitA、D2、D3、

E、K1等

水溶性：VitB族(B1、B2、B6、B12)VitC、叶酸、烟酸、烟酰胺VitMVitPP2023/3/101、溶解性易溶于水水溶液呈酸性（二）性质2、硫色素反应2023/3/103、UV共轭双键λmax=246nm2023/3/104、碱性嘧啶环——伯氨噻唑环——季铵可与酸成盐5、氯化物特性2023/3/10二、鉴别试验（一）硫色素反应ChP20052023/3/10NaOH－H2O2023/3/10环合＋2H－2H硫色素2023/3/10（二）沉淀反应VitB1H＋2023/3/10（三）其他反应S元素反应Cl-反应2023/3/10四、含量测定（一）非水溶液滴定喹那啶红－亚甲蓝（紫红→天蓝）2023/3/102023/3/10（二）UV法2023/3/10ChP片剂、注射剂（每片）相当于标示量的%=g/100mlg规格g/片2023/3/10（每ml）相当于标示量的%=规格g/mlmL2023/3/10（三）硫色素荧光法1.原理NaOH2023/3/102.方法与计算激发波长365nm发射波长435nm2023/3/10对照液VB1+NaOH+铁氰化钾+异丁醇SVB1

+NaOH+异丁醇d供试液VB1+NaOH+铁氰化钾+异丁醇AVB1

+NaOH+异丁醇b2023/3/103.特点（1）灵敏度高，线性范围宽（2）代谢产物不干扰，适用于体液分析2023/3/10第二节维生素CL－抗坏血酸一、结构与性质（一）结构2023/3/10（二）性质1、易溶于水2、水溶液呈酸性4、强还原性二烯醇结构二烯醇结构[O]二酮基结构3、旋光性2023/3/10酸性C3－OH的pKa=4.17C2－OH的pKa=11.572023/3/10光学活性手性C（C4、C5）**L(+)－抗坏血酸活性最强2023/3/10[O]有活性有活性H+OH-无活性5、水解性2023/3/10水解反应与碱反应2023/3/10Na2CO3NaOH2023/3/106、具糖的性质结构与糖类相似糖类的显色反应50℃2023/3/107、UV特征Vc2023/3/10二、鉴别试验（一）与AgNO3反应(ChP2005)2023/3/102、与2，6-二氯靛酚反应(ChP2005)氧化型蓝色OH-玫瑰红色H+还原型2023/3/10（玫瑰色）（无色）2023/3/10（三）与氧化剂的反应[O]2023/3/10与碱性酒石酸铜反应USP与KMnO4反应2023/3/10（四）糖类的反应USP2023/3/10－H2O2023/3/10－CO2（戊糖）－H2O(糠醛)50℃(吡咯)（蓝色）2023/3/10三、杂质检查（一）溶液颜色与澄清度检查

1、原料420nm：A<0.032、片剂440nm：A<0.073、注射液420nm：A<0.062023/3/10（二）铁、铜离子的检查用原子吸收光谱法测定b<(a-b)a:对照液吸光度;b:样品吸光度2023/3/10四、含量测定（一）碘量法1.原理指示剂:淀粉指示液2023/3/10+I2H++2HI2023/3/102.方法

取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液（0.1mol/L）滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O62023/3/103.讨论（1）酸性环境HAc

减慢VitC被O2氧化速度（2）新沸冷H2O赶走水中O2（3）立即滴定减少O2的干扰2023/3/10（二）2，6-二氯靛酚钠滴定法法1.原理2023/3/102.方法自身指示终点法2023/3/103.讨论（1）酸性环境稳定VitC

H3PO3-HAc

（2）快速滴定2min内防止其他还原性物质干扰（3）剩余比色测定

（定量过量）（测剩余染料）2023/3/10（4）缺点

不稳定需经常标定贮存≤一周干扰多氧化力较强2023/3/10（三）HPLC法1、HPLC的优点灵敏度高微量分析选择性高干扰少分离分析同步

快速2023/3/102、HPLC法分离VitC常用方法及测定对象

方法离子交换色谱法离子对色谱法分配色谱法（正、反相）对象:制剂、生物样品、果汁血、尿、组织、细胞等2023/3/10例多种维生素片中VitA、VitB1、VitB2

、VitB6

、烟酰胺、VitC、VitE的含量测定色谱柱

ODS流动相

A、水-甲醇（4：1）

B、甲醇（梯度洗脱）抗氧剂二巯基丙烷磺酸钠2023/3/10水溶性维生素离子对色谱法（樟脑磺酸）内标法+校正因子内标物——苯酚脂溶性维生素外标法2023/3/10第三节维生素E苯并－二氢吡喃醇一、结构与性质（一）结构2023/3/10***名称R1R2相对活性α-生育酚CH3CH31.0β-生育酚CH3H0.5γ-生育酚HCH30.2δ-生育酚HH0.12023/3/10生物效价:右旋体：消旋体=1.4：10（天然品）（合成品）dl－α－生育酚醋酸酯2023/3/10（二）性质苯环+二氢吡喃环+饱和烃链1、易溶于有机溶剂，不溶于水2、UV3、酯键易水解△2023/3/10二、鉴别（一）硝酸反应75℃15′橙红色2023/3/10生育酚HNO3强氧化剂生育红（橙红色）2023/3/10

取本品约30mg，加无水乙醇10mL溶解后，加硝酸2mL，摇匀，在75℃加热15分钟，溶液应显橙红色。2023/3/10（二）三氯化铁－联吡啶反应△[O]2023/3/10生育酚[O]Fe3＋弱氧化剂对-生育醌2023/3/10+23Fe3++2FeNNNN红色2023/3/10（三）UV法0.01%无水乙醇中λmax=284nmλmin

=254nm2023/3/10（四）TLC法薄层板：硅胶G展开剂：环己烷-乙醚（4：1）显色剂：硫酸（105℃5′）

VitERf

=0.72023/3/10三、杂质检查游离生育酚

（一）原理

利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈还原成硫酸亚铈2023/3/10（二）试剂硫酸铈滴定液（0.01mol/L）二苯胺（亮黄→灰紫）（M生育酚=430.8）例取本品0.10g，加无水乙醇5mL溶解后，加二苯胺试液1滴，用硫酸铈液（0.01mol/L）滴定，消耗硫酸铈液（0.01mol/L）不得过1.0mL。2023/3/10（三）限量≤2.15％2023/3/10药典规定消耗硫酸铈液（0.01mol/L）≤1.0ml若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L，应重新计算硫酸铈的消耗量设：应消耗硫酸铈液≤Vml 0.01×1.0＝实际浓度×V2023/3/10例Ce(SO4)2=0.01020mol/L2023/3/10四、含量测定（一）GC法1.GC特点选择性好灵敏度高速度快分离效能好挥发性低、不稳定、极性强→衍生化易受样品蒸气压限制2023/3/102.VitE测定的色谱条件载气→N2固定液→硅酮（OV-17）担体→硅藻土或高分子多孔小球柱温→265℃检测器→氢火焰离子化检测器(FID)内标→正三十二烷2023/3/102023/3/10内标法供试液（样品+内标）对照液（对照+内标）内标物是样品中不存在的物质与被测组分峰靠近能与各组分完全分离与被测组分的量接近2023/3/10校正因子：2023/3/10实际工作中的计算方法：2023/3/10例内标液：取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成1.0mg/ml溶液对照液：精密称取VitE对照品0.2011g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取1~3ul注入GC仪，测定，计算。2023/3/10供试液：精密称取供试品0.1998g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取1~3ul注入GC仪，测定，计算。2023/3/10对照液：0.373＝K1供试液：0.368＝K2本品含C31H52O3应为96.0~10