体内药物分析

千里之行，始于足下。第2页/共2页精品文档推荐体内药物分析第二章生物样品与样品制备

1.体内药分的对象：人体和动物体液、组织、器官、排泄物2．体内药物分析的特点：样品量少，别易重新获得；样品复杂，干扰杂质多；供临床用药监护的检测分析办法要求简便、快速、准确，以便迅速为临床提供设计合理的用药方案及中毒拯救措施；实验室拥有多种仪器设备，可举行多项分析工作；工作量大，测定数据的处理和阐明有时别太容易。需相关学科参与。

3．体内药物分析样品的种类：最常用且易获得的分析样品有：血样、尿样、唾液和粪便。特别事情下：乳汁、泪液、脊髓液、胆汁、羊水、各种组织

4．血清：血清是由血液中纤维蛋白原等的妨碍引起血液凝聚而析出的澄清黄群液体，约为全血的

30%?50%

5．尿液：尿液的要紧成分：水、含氮化合物、盐类；体内药物清除要紧经过尿液排出，药物以其原型或代谢物及其缀合物等形式排出；尿药测定要紧用于药物剂量回收、尿清除率、生物利用度、药物代谢率的研究，并可判断患者是否按医嘱用药。

6．生物样品分析的前处理：是指测定生物样品中的药物及其代谢物时，对样品举行分离、纯化、浓集，必要时对待测组分举行衍生化，为测定制造良好的条件。

7．为何举行前处理？

1）药物进入体内除原药外还有多种形式存在

2）生物样品的介质组成比较复杂，尤其蛋白质严峻妨碍分离效果，必须举行前处理

3）除去介质中含有的大量内源性物质等杂质，提取出低浓度的被测药物，并且浓集药物或代谢物的浓度，使其在所用分析技术的检测范围内。

8．生物样品处理办法挑选的普通原则：待测药物的理化性质；待测药物测定的目的与浓度范围。9．去除蛋白质的办法：加与水相混溶的有机溶剂；加入中性盐；加入强酸；加入含锌盐及铜盐的沉淀剂；酶解法。

10．生物样品的分析由两步组成：样品的前处理（分离、纯化与浓集）和对提取物的仪器分析；提取法是应用最多的分离、纯化办法；提取的目的：从大量共存物中分离出所需要的微量组分药物及其代谢物，并经过溶剂的蒸发使样品得到浓集，以供测定；提取法分为液-液提取法和液-固提取法。

11．提取溶剂的挑选：对被测组分的溶解度大，沸点低，易于浓集、挥散，与水别相混溶，无毒、化学稳定、别易乳化；最常用的溶剂是乙醚和氯仿。

12．被测组分的浓集：样品在提取过程中被测组分得到纯化但因微量的组分分布在较大体积的提取溶剂中，由于进样量的限制，被测组重量也许达别到检测灵敏度，故需将被测组分浓集后再测定；两种浓集办法：末次提取时加入提取液尽可能少；挥去提取溶剂法。

13．分离前将药物举行衍生化的目的：使药物变成具有能分离的性质；提高检测的灵敏度；增强药物的稳

定性；提高对光学异构体分离的能力；GC中的化学衍生化和HPLC中的化学衍生化。

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第三章体内药物分析办法的设计与验证

1生物样品经处理后，需挑选适当的分析办法举行测定，目前供生物样品药物及其代谢物监测的分

析办法要紧有以下五类：光谱分析法；群谱法；毛细管电泳法；免疫分析法；同位素法

2.体内药物分析办法的挑选原则：普通要依照药物的结构、物理性质、体内药物浓度大小、干扰成分的多少、样品的预处理办法、实验条件和目的等因素举行综合思考，方可挑选出可供生物样品中药物及其代谢物含量测定的分析办法。

3.体内药物分析办法设计的要紧依据：

(1明确分析办法的目的要求；

(2)调研文献了解待测药物的特性；

(3)仪器设备与实验室条件。

4.体内药物分析办法设立与建立的普通步骤：依据测定目的要求结合药物结构、理化性质及体内存

在状态、参考同类药物的文献资料，先拟定初步的分析办法举行一系列的体外和体内试验工作以挑选最合适的实验条件，进一步验证所拟定的分析办法是否习惯实际样品的检测，要紧步骤包括：以纯品举行测定；以处理过的空白样品举行测定；回收率的测定；以水代替空白样品添加标准品测定；以空白样品添加标准品测定；体内实际样品测定。

5.体内药物分析办法的评价：

准确度：回收率一一绝对回收率和办法回收率

周密度：日内或批内周密度、日偶尔批间周密度

灵敏度：检测限、定量限、最低检测浓度

专属性：代谢产物、内源性物质、配伍药物的干扰

稳定性：短期室温条件下稳定性考察

长期低温条件下稳定性考察

冷冻-解冻稳定性考察

另外对体内药物分析办法的考察还要从分析办法的可靠性、操作的难易、每个样品测定耗费时刻、仪器设备要求及成本费用多少举行综合评价

第4章所有适用于体内药物分析的办法简介

第一节、紫外—可见分光光度法：

1.UV-VIS的基本原理：

物质对别同颜群的光能汲取是有挑选性的，特定的物质要紧汲取一定波长的光，物质汲取了高能量的光往后，就发生能级跃迁产生汲取光谱。当物质汲取的光的波长在200?400XXX具有共轭结构

的有机复杂的外层电子(价电子)发生能级跃迁并伴随着分子振动和转动能级跃迁，形成紫外吸

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收光谱。400~76OXXXM有较大共轭结构的价电子或有群无机物的价电子发生能级跃迁，并伴随分子振动

能级的跃迁形成可见光谱

2.UV-VIS定量分析的依据：Beer-Lamber即朗伯比耳定律：A=ECL其中E为汲取系数，在定量分析中尽量选E值越大的波长处测定以提高测定的灵敏度越好即E值越大所能测量的某物质的溶液浓度越小，测定灵敏度越高。

3.汲取度的加和性：假如溶液中存在两种以上吸光物质时，只要共存物质别互相妨碍也别改变各自本身的汲取系数，则溶液的汲取度是各组分汲取度的加和，各组分的汲取度由各自的浓度与汲取系数所决定。物质对光的汲取度加和性是测定混合组分的依据。

4.妨碍测定准确度的因素：

1、偏离Beer定律而引起的误差

要紧由于仪器和溶液（理化性质）的实际条件与Beer-Lambert定律的条件别一致而引起；

仪器：光源别稳、入射光的谱带宽度别够窄、比群皿的厚度和均匀度别合要求

溶液的理化性质：被测物为胶体溶液或浑浊液；被测物的理化性质别稳或溶液浓度改变而使溶质

发生解离、缔合导致被测物的组成改变或显群条件操纵不行；被测物溶液浓度过大（大于

0.01mol/L）导致工作曲线弯曲。

2、透光率测定误差：浓度测量值的相对误差，C/C=0.434；T/TlgT，当汲取度值在0.2—0.7时浓

度测量值的相对误差值较小，为最佳测量范围。

在体内药物分析中由于药物浓度较低，汲取度的测量值较小，会在0.02-0.001之间，测量值的相对误差值达2.8%-10.3%

3、操作别当引起的误差

5.常用样本处理办法：

液液萃取

萃取后衍生化

固相萃取

第二节气相XXX谱：

1.基本原理：以气体（载气）为流淌相，由于被测样品中各组分在固定相与载气间的分配系数别同而被分离。各组分将按分配系数大小顺序，依次被载气带出XXX谱柱，分配系数小的组分先流出；分配系数大的后流出。流出群谱柱的各组分被载气带入检测器。检测器将物质的质量变化转变为电压或电流变化，由记录器记录电压或电流随时刻的变化，即群谱的峰高或峰面积。由于群谱的峰高或峰面积与被测物质的含量成正比，可用峰高或峰面积举行定量分析；物质的群谱峰出峰时刻与物质本性有关，群谱峰的出峰时刻即保留时刻举行定性分析。

2.要紧仪器装置：载气瓶f压力调节器f净化器f稳压阀f柱前压力表f转子流量计f进样器f群谱柱—群谱柱恒温箱—检测器—尾气出口—记录器

载气由高压气瓶供给，经压力调节器落压，经净化器脱水及净化，由稳压阀调至适宜的流量进入群谱，待流量、温度及基线先定后，即可进样。液态样品用微量注射器吸取，由进样器注入，样品被载气带入XXX谱柱。气态样品可用六通阀或注射器进样。

3.固定液的必备条件：普通为高沸点的液体，室温时为固态和液态

(1)在操作温度下呈液体状态及蒸气压低，蒸气压低，固定液流失慢、柱寿命长、检测器本底低

(2)对样品中各组分有脚够的溶解能力，分配系数较大

(3)挑选性能高，对两个沸点或性质相近的组分的分配系数比别相等

(4)与样品中的各组分别产生化学反应。

4.固定液挑选的原则：

相似性原则：按被分离组分的极性或官能团与固定液相似的原则来挑选，相似相溶的原因

被分离药物为非极性的f非极性的固定液

被分离药物为极性的f极性的固定液

被分离药物为酯或醇f酯、聚酯或醇、聚乙二醇类固定液

难分离药物样品f按一定比例组成的混合液涂在载体

5.常用检测器种类：30多种，要紧有：FID、AFID、NPDECDMSD

第三节高效液相XXX普法

1.基本原理：混合物中各组分在固定相与流淌相中的挪移速度别同二相互分离。分析HPLC勺分离分析质量，要紧参数如保留值(tR)、相平衡参数(K)、分离度(R)、理论塔板数(n)。

2.保留值：

保留值：用来描述样品组分在XXX谱中保留程度的参数，是群谱的定性指标。可用保留时

间、保留体积、调整保留时刻和调整保留体积来表示。

保留时刻(tR)：从进样开始到某组分的群谱峰顶点时时刻间隔

保留体积(VR):从进样开始到某组分在柱后浮现浓度极大点时所需经过群谱柱的流淌

体积

死时刻tO:别保留组分(该组分别溶于固定相或别被固定相吸附)的保留时刻，相对应

的流淌相的体积为死体积V0

调整保留时刻tR'二tR—t0和调整保留体积VR'二VR-V0

3,相平衡参数：在群谱洗脱过程中样品分子在流淌相和固定相之间分配处于动力学平衡状态，这一平衡可用平衡分配系数和容量因子表示。

4?分离度R定量分析时要求定量峰与其他峰或内标峰有较好的分离度R,—般R1.5，除另有规定。

5.理论塔板数n

（1）群谱柱的理论塔板数n=5.54（tRwh/2）2或n=16（tRw），是柱效指标

（2）在选定条件下用供试品溶液或内标物溶液（规定项规定），测得理论板数n,假如n：：：规定的最小理论板数，应改变柱长、载体性能、XXX谱柱充填优劣，使n达到要求

（3）wh/2越小柱效越高。增加n来提高分离度，即使群谱峰变窄将两相邻峰分开

6.梯度洗脱：所谓梯度洗脱，具有两种或两种以上别同极性的溶剂在分离过程中按一定程序延续的改变，以

改变流淌相的配比和极性。

7.反相键合相群谱：在反相群谱中流淌相得极性大于固定相得极性.洗脱次序为极性大得组分先洗脱，极性小得组分后洗脱

固定相一非极性键合相即键合相表面基团为非极性烃基,最常用得为十八烷基键合相（ODS键合相），但注意

键合相的稳定性（pH2~7.5）及键合相的重现性

流淌相：与普通液相群谱用流淌相的要求一样。化学稳定性好，别与固定相发生化学反应；必

须与检测器相习惯；对样品有适宜的溶解度；粘度小，因为粘度小的溶剂可增加柱压并妨碍柱效。最广泛应用的流淌相甲醇-水、乙睛-水、四氫呋喃-水

8.正相键合相群谱：正相键合相群谱中流淌相的极性小于固定相的极性。洗脱次序为极性弱的先出峰，极性强的后出峰.正相键合相的分离机理有吸附合分配之分争，吸附过程是要紧的相互作用。

正相键合相群谱中的固定相为极性键合固定相，要紧是氨基、氰基键合相。

流淌相:正相群谱流淌相的挑选原则和液-固群谱、薄层群谱的洗脱剂的挑选大体