反复应激引起前额叶皮层上谷氨酸受体的表达

反复应激引起前额叶皮层上谷氨酸受体的表达第一页，共三十五页，2022年，8月28日Introduction:Adrenalcorticosterone,themajorstresshormone,throughtheactivationofglucocorticoidreceptor(GR)andmineralocorticoidreceptor(MR),caninducelong-lastinginfluencesoncognitiveandemotionalprocesses.

Mountingevidencesuggeststhatinappropriatestressresponsesactasatriggerformanymentalillnesses.Ithasbeenproposedthatglutamatereceptor-mediatedsynaptictransmissionthatcontrolsPFCneuronalactivityiscrucialforworkingmemoryInthisstudy,wesoughttodeterminewhetherrepeatedstressmightnegativelyinfluencePFC-mediatedcognitiveprocessesbydisturbingglutamatergicsignalinginjuvenileanimals第二页，共三十五页，2022年，8月28日Repeatedrestraintstress:Juvenile(3-to4-week-old)SpragueDawleymaleratswereusedinthisstudy.Forrepeatedrestraintstress,ratswereplacedinair-accessiblecylindersfor2hrdaily(10:00a.m.to12:00p.m.)for5–7days.Thecontainersizewassimilartotheanimalsize,whichmadetheanimalalmostimmobileinthecontainer.第三页，共三十五页，2022年，8月28日Results:Totesttheimpactofstressoncognitivefunctions,theymeasuredtherecognitionmemorytaskRU486:GRantagonist第四页，共三十五页，2022年，8月28日ToexaminwhetherotherstressorscouldproduceasimilareffectRepeatedunpredictablestressRatsweresubjectedeachdaytotwostressorsthatwererandomlychosenfromsixdifferentstressors,includingforcedswim(RT,30min),elevatedplatform(30min),cagemovement(30min),lightsonovernight,immobilization(RT,1hr),andfoodandwaterdeprivationovernight.第五页，共三十五页，2022年，8月28日Objectlocationtask:Totestthespecificityofthisstress-inducedmemorydeficit,wealsosubjectedanimalstotheobjectlocationtask,aparadigmforthePFC-independentmemory第六页，共三十五页，2022年，8月28日Openfieldtask:Incontrasttotheimpairedtemporalorderrecognitionmemory,ratsexposedtorepeatedrestraintstressshowednochangesinanxiety-relatedbehaviororlocomotiveactivity第七页，共三十五页，2022年，8月28日TemporalOrderRecognitionMemoryTask:Tofindouttheonsetofthedetrimentaleffectsofstressoncognition,weexposedyoungmaleratstovariousdays(1,3,5and7)ofrestraintstress.第八页，共三十五页，2022年，8月28日TemporalOrderRecognitionMemoryTask:TotestwhetherglutamatergictransmissioninPFCiscriticalfortheobjectrecognitionmemory,wegaveanimalsastereotaxicinjectionoftheNMDARantagonistAPVandAMPARantagonistCNQXtoPFCprelimbicregionsbilaterally.第九页，共三十五页，2022年，8月28日TheconclusionoftheBehavioralTesting:Takentogether,itsuggeststhatrepeatedstresshasadetrimentaleffectonrecognitionmemory,whichmaybeduetothelossofglutamatergictransmissioninPFC.第十页，共三十五页，2022年，8月28日TheElectrophysiologicalRecordings:Tofindouttheimpactofrepeatedstressonglutamatergictransmission,weexaminedtheinput/outputcurvesofAMPAR-andNMDAR-mediatedsynapticcurrents(EPSC)inPFCpyra-midalneuronsfromstressed,young(4-week-old)malerats.第十一页，共三十五页，2022年，8月28日pairedpulseratio(PPR):Totestwhetherthereducedsynaptictransmissionbyre-peatedstressmayresultfromapresynapticmechanism,wemeasuredthepairedpulseratio(PPR)ofAMPAR-andNMDAR-EPSC.PPRwasnotdifferentincontrolversusstressedanimals,suggestingalackofgrosschangeinpresynapticfunction.第十二页，共三十五页，2022年，8月28日miniatureEPSC(mEPSC):Tofurtherconfirmtheinvolvementofpostsynapticglutamatereceptors,wemeasuredminiatureEPSC(mEPSC),asynapticresponseresultingfromquantalreleaseofsingleglutamatevesicles,inPFCslices.第十三页，共三十五页，2022年，8月28日Whole-cellioniccurrent:Moreover,wemeasuredwhole-cellioniccurrentelicitedbyAMPA(100mM)orNMDA(100mM)applicationinacutelydissociatedPFCneurons(apurepostsynapticpreparation).第十四页，共三十五页，2022年，8月28日InjecttheGRantagonistRU486:SystemicinjectionsofRU486LocalinjectionsofRU486tothePFC第十五页，共三十五页，2022年，8月28日Theralationshipwiththetimeofstress:Tounderstandthecomplexactionsofstresshormones,weexposedanimalstovariousdaysofrestraintstress.第十六页，共三十五页，2022年，8月28日Totestthedifferentregions:Totesttheregionalspecificityoftheeffectofrepeatedstress,wealsoexaminedglutamatergictransmissioninstriatumandhippocampusfromyoungmalerats.第十七页，共三十五页，2022年，8月28日BiochemicalMeasurementofSurfaceandTotalProteins:WeperformedwesternblottingandsurfacebiotinylationexperimentstodetectthetotalandsurfacelevelsofAMPARandNMDARsubunitsinPFCslicesfromstressed,young(4-week-old)malerats.第十八页，共三十五页，2022年，8月28日Theamountoftheglutamaterecptors:第十九页，共三十五页，2022年，8月28日InjecttheGRantagonistRU486:第二十页，共三十五页，2022年，8月28日Totestthedifferentregions:Nosignificantchangeswerefoundinotherbrainareas,includingstriatumandhippocampus.第二十一页，共三十五页，2022年，8月28日Theresultsinvitro:Wenextexaminedwhethertheeffectofrepeatedstressinvivomaybemimickedbycorticosterone(CORT)applicationinvitro.第二十二页，共三十五页，2022年，8月28日InjecttheGRantagonistandMRantagonist:RU486:TheGRantagonist;RU28318:TheMRantagonist第二十三页，共三十五页，2022年，8月28日Measuretheclusterdensity:第二十四页，共三十五页，2022年，8月28日Ubiquitin/Proteasome-dependentDegradation:SincethetotallevelofNR1andGluR1wasreducedinrepeatedlystressedanimals,weexaminedwhetheritcouldbeduetothedecreasedsynthesisorincreaseddegradationofglutamatereceptors.第二十五页，共三十五页，2022年，8月28日Ubiquitin/Proteasome-dependentDegradation:ThelevelofubiquitinatedGluR2,NR2A,orNR2Bsubunitsremainedunchanged.RepeatedstressalsofailedtoaltertheubiquitinationofSAP97(aGluR1bindingprotein)andPSD-95.第二十六页，共三十五页，2022年，8月28日Testotherproteasomeinhibitor:MG132:proteasomeinhibitorLact:anotherproteasomeinhibitorChloro:generallysosomalenzymeinhibitorLeupeptin:lysosomalproteaseinhibitor11R-CS:membrane-permeablecalpainproteaseinhibitor第二十七页，共三十五页，2022年，8月28日Testtheeffectofproteasomeinhibitor:第二十八页，共三十五页，2022年，8月28日ShRNALentiviralKnockdown:Giventheroleofproteasome-dependentdegradationofgluta-matereceptorsinthedetrimentaleffectsofrepeatedstress,wewouldliketoknowwhichE3ubiquitinligasesarepotentiallyinvolvedinthestress-inducedubiquitinationofGluR1andNR1subunitsinPFC.Nedd4-1:anE3ligasenecessaryforGluR1ubiquitinationinresponsetotheagonistAMPA.Fbx2:anE3ligaseintheERthatubiquitinatesNR1subunits.第二十九页，共三十五页，2022年，8月28日ShRNALentiviralKnockdowninvitro:第三十页，共三十五页，2022年，8月28日ShRNALentiviralKnockdowninvivo:第三十一页，共三十五页，2022年，8月28日