临床微生物标本的

临床微生物标本的第1页/共59页君子慎始，差之毫厘，谬以千里。

——《礼记》

在很多情况下，实验室的检验比病人的主诉敏感、准确、客观，对病人的诊断和治疗越来越依赖于实验室检验结果。“正确的微生物学检验始自正确的标本采取。临床医师、护师及检验技师都必须通晓其要领。”

——著名的临床微生物专著ManualofChinicalMicrobiology主编PartrcikMarray

牛牛文库文档分享第2页/共59页概述目的按照正确的说明采集和稳妥地运转标本以保证结果的正确。质量差的标本：误诊、错误的抗生素治疗实验室责任1.提供标本采集和运转手册(正确的说明)2.与临床医生交流：正确地选择微生物试验，解释结果3.检验医师：查房、会诊、选择试验、解释结果

牛牛文库文档分享第3页/共59页标本采集细菌学培养的标本应在疾病发作之后，抗生素开始治疗之前尽可能快地进行收集。需要采第二份标本是因为第一份标本质量差或运转条件不适当，但对诊断一种急性传染病来讲，其它情况很少要求第二份标本。例外的情况包括多次收集血标本培养和诊断苛养菌或最初没有怀疑的不常见的病原菌。

牛牛文库文档分享第4页/共59页一、标本的选择和收集

标本的选择和收集的一般原则

1．选择合适的解剖部位收集标本。

2．避免固有菌群污染。正常菌群的细菌生长和报告会使医生和保健机构错误地认为它们引起感染的发生。另外，正常菌群的过度生长会掩盖真正的病原。

3．抽吸及抽吸后用无菌盐水冲洗和组织活检是怀疑厌氧菌感染时正确的标本采集方法(表2)。用拭子采集标本最少考虑，因为拭子取样标本量相对较少且容易被邻近的正常菌群污染。培养厌氧菌的标本应储存于室温，不能放冰箱，因为氧较容易扩散到冷的标本中去

牛牛文库文档分享第5页/共59页4．收集足够量的标本，使所要求的所有试验都能满意地完成。标本量不足可产生假阴性结果。5．每份标本都要标明患者姓名、识别号码、标本来源、采集日期和时间、采集者的姓名。6．盛标本的容器要有助于病原菌的存活，无泄漏，在运送和处理期间安全。

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表1用于细菌培养的常见临床标本的选择

解剖部位临床标本正确不正确下呼吸道咳出的新鲜粘液和炎性细胞(脓)，痰唾液、口咽分泌物、从鼻咽部窦内排出物窦直接从窦内抽取或灌洗的分泌物，用内窥镜检查时刮取的或活检标本鼻或鼻咽拭子、鼻咽分泌物、痰，唾液泌尿道中段尿，用“直的”插入导管收集的尿，耻骨上穿刺尿，抽吸，膀胱镜检查或其它外科检查进收集的标本Foley导尿管收集袋中的尿浅表伤抽取的脓或局部清洗液(无菌盐水)，源自真皮下的脓拭子表面物拭子或由于表面物污染的拭子，用含有防腐剂的盐水清洗液深部伤浓性物，坏死组织，或从深部取的组织表面物质污染的标本胃肠道新鲜排出的粪便，内窥镜检查时收集的洗液或粪便直肠拭子，如果病人入院>3天后发展成腹泻，用于细菌培养静脉血在抗生素庆用之前，从不同部位静脉穿刺收集2～3份标本，对>90磅的人每份血大约20ml；用含碘化合物或洗必汰消毒凝固的血，在24h内抽1份或>3份血标本，每份培养<20ml血(即每次静脉采血)；仅用酒精消毒(成人)

牛牛文库文档分享第7页/共59页表2厌氧培养各种临床标本的适应性可接收的材料(采集方法)不能接收的材料(采集方法)抽取物(针头和注射器)支气管肺泡灌洗巴氏腺(前庭大腺)炎性物或分泌物宫颈分泌物血液(静脉抽取)气管分泌物(抽吸物)骨髓(抽取)恶露支气管镜取分泌物(被保护的刷)鼻咽拭子后穹窿穿刺液(抽取)会阴拭子输卵管液或组织(抽吸/活检)前列腺或精液IUDa，针对放线菌痰(咳出或导出)鼻窦(抽取)粪便或直肠拭子标本胎盘组织(通过剖腹产手术)气管造口分泌物粪便，针对艰难梭菌尿道分泌物外科(抽取，组织)尿(排出的或从导管导出)经气管抽吸物阴道或外阴分泌物(拭子)尿(耻骨上抽取)aIUDintrauterinedevice子宫内装置

牛牛文库文档分享第8页/共59页标本的转运用于细菌培养的标本应立即转运至实验室。过度延长或将标本暴露于极端温度会危及结果，必须避免。转运一般原则如下：1．标本必须及时送至实验室。如果运送时间大于2h，需用特殊运送培养基或要求冷藏温度(表3)。2．细菌培养标本储存不要超过24h，即使合适的运送培养基或冷藏温度。

牛牛文库文档分享第9页/共59页3．用于细菌学培养的临床标本转运最合适的时间取决于获得的材料的体积。小体积的液体(<1ml)或组织(<1cm3)应在15-30min内提交，以避免蒸发、干燥或暴露于周围条件下。大体积和在运送培基内的标本可储存长至24h。4．对周围条件特别敏感的细菌包括志贺菌、淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌和厌氧菌。通过培养进行志贺菌的可靠检测要求及时进行。流感嗜血杆菌对低温敏感。决不能冷冻脑脊液、生殖器、眼或中耳标本。

牛牛文库文档分享第10页/共59页5．从一个实验室到另一个实验室转运临床标本和传染性物质，不管距离远近，都要严格注意标本包装和标记说明。运送期间，被运送的物质必需适当地标记、包装和保护。特殊标本运送指南见表3。

牛牛文库文档分享第11页/共59页标本类型采集指南装置和/或最小量运转时间和温度储存时间重复采样限制说明脓肿开放性开放性用无菌盐水或70%酒精拭去表面渗出物尽可能抽吸或将拭子深入伤口，紧贴伤口“新鲜边沿”沿取样用针及注射器抽吸脓肿，将所有物质无菌转入厌氧转运装置拭子送检系统厌氧送检系统≥1ml≤2h,RT≤2h,RT≤24h,RT≤24h,RT1/d来源1/d感染源组织或液体优于拭子标本，如必须用拭子，采集2个，1个培养，1个做革兰氏染色，拭子放入Stuart或Amies培养基里保存从伤口底部或脓肿壁取样，结果最好取样时，可能会带入与感染过程无关的定植细菌咬伤见脓肿不要培养≤12h的动物咬伤伤口(通常不能分离到感染性病原体)，除非有感染的指征的存在血培养培养瓶的消毒：加70%异丙醇或酚到橡胶塞1min穿刺部位消毒前先触摸静脉静脉穿刺消毒1.用70%乙醇清洗采集部位2.使用蘸碘拭子，从中心开始呈同心圆式涂抹3.让碘制剂晾干4.不要触摸该点5.采血6.穿刺后，用乙醇将皮肤上之碘除去细菌：血培养瓶，成人，≥20ml/套(量大易分离出)婴儿和儿童1～20ml/套，取决于病人体重≤2h,RT≤2h，RT或按说明3套/24h急性发热：立即使用或改变抗生素，10min内采2套(抗生素使用前)慢性病：从不同部位不立即使用或改变抗生素，从不同部位24h内，间隔不小于3h，采2～3套(抗生素使用前)急性心内膜炎：1-2h内从3个不同部位采3套，尽可能用抗生素前。亚急性心内膜炎：24h内从3个分离部位采3套，间隔≥1h，如24h内为阴性，要再采2-3套。原因不明发热：24h内从不同部位采2-3套，间隔≥1h，如24-48h内为阴性，要再采2-3套一些数据显示，另加一个需氧瓶或真菌瓶比仅仅使用厌氧瓶的效果更好儿科，立即采血，很多需要培养间隔时间证明持续菌血症表3细菌标本收集、运输和储藏指南

牛牛文库文档分享第12页/共59页骨髓对穿刺部位准备同外科切口接种血培养瓶或离心溶解管，接种平板标本立即送实验室≤2h,RT，如果在血培养瓶或管内≤2h,RT1/d少量骨髓可直接接种培养基，常规骨髓细菌培养很少用烧伤标本采集前，先清洗和清创烧伤伤口将组织放入有旋帽的的容器内，抽吸物或渗出物拭子放入灭菌容器或拭子运输系统运送≤2h,RT≤24h,RT1/d/感染源如果定量培养，3～4mm穿孔活检取样最适合，只进行需氧培养。定量培养可能有价值或没有价值，烧伤表面标本的培养可能会误导导管i.v.1.用乙醇清洗导管周围的皮肤2.将导管末端及夹子5cm无菌移入无菌管3.直接转运微生物实验室，以防干燥无菌有旋帽的管或杯≤15min,RT≤2h,4℃无可接受的；用于半定量静脉导管(Maki法)、中心的、CVP、Hickman、Broviac、外周的、动脉的、脐的，营养过度SwanGanz

牛牛文库文档分享第13页/共59页Foley导管由于培养物代表尿道末端的菌群，不要培养要求培养是不能接受的蜂窝织炎1.用无菌生理盐水或70%乙醇擦拭2.用细针头和注射器抽吸发炎的区域(一般是中心而不是边缘)可能需少量无菌盐水冲洗3.往注射器吸入少量无菌生理盐水，将标本注入无菌旋帽管无菌管(不要用注射器转运)≤15min,RT≤2h,RT无只有少数标本可培养出潜在的病原体CSF1.用碘酒精消毒采集部位2.用带L3-L4，L4-L5，或L5-S1通管丝的针头插入3.进入蛛网膜下腔后，移去通管丝，采集1～2ml液体，分别放入3个防漏管无菌旋帽管细菌：不要冷冻；≤15min,RT≤2h,RT无也可采血进行培养。如果仅仅采集了1管CSF,应立即送交进行微生物培养；能采集多则送交2管。脑部脓肿或活检标本的抽吸物，对检测厌氧菌或寄生虫可能是必需的褥疮溃疡不选择拭子标本1.用无菌盐水清洗表面(组织)2.如采不到活检标本，抽吸损伤炎性物质底部灭菌管(需氧)或厌氧系统≤2h,RT≤24h,RT1/d/感染源由于褥疮溃疡拭子提供不了什么临床信息，因此不用。一般选择组织活检或针头抽吸标本

牛牛文库文档分享第14页/共59页牙科培养：牙龈、牙周、根尖周、奋森氏胃炎1.小心清洗牙龈和龈上牙齿表面，去除唾液，碎屑和斑点2.用牙周刮器，小心获得损伤材料，并移入厌氧转运系统3.用制备培养系统的方式采集的样本，制备涂片染色厌氧转运系统≤2h,RT≤24h,RT1/d只有当实验室装备能够提供对检测和计算特异性病原体能够提供特殊的技术时，才应对牙周损伤标本进行处理耳内耳外耳对复杂的、反复的或慢性顽固的中耳炎做鼓室穿刺术1.对完整的耳鼓室先用肥皂水清洗耳道再用注射器抽吸术收集液体(鼓膜穿刺)2.对破裂的豉室，借助耳科诊视器，用软杆拭子收集液体1.用湿拭子将耳道的任何碎屑或痂皮拭去2.在外耳道用力旋转拭子取样无菌管，拭子转运培养基或厌氧培养基拭子转运≤2h,RT≤2h,RT≤24h,RT≤24h4℃1/d/感染源1/d/感染源喉或鼻咽部的拭子培养结果不足以诊断中耳炎的致病因子，不应该送交对于外耳道应用力取样，表面取样可能采不到蜂窝组织炎链球菌

牛牛文库文档分享第15页/共59页眼眼结膜角膜刮擦玻璃体的液体抽吸物1.分别用(无菌盐水预湿)拭子绕每一个结膜取2.采集完即接种培养基3.涂片在采集完制备，将拭子在玻片上转动1-2cm1.由眼科专家采集标本2.用无菌铲刮擦溃疡或病损，将刮擦物直接接种于培养基3.将刮取材料在载玻片上涂擦1-2cm，制备两张涂片备眼，以用于针头抽吸液体直接接种培养:BAP和CHOC，或拭子转运直接培养接种:含10%绵羊血液BHI，CHOC和抑制霉菌的琼脂无菌旋帽试管直接将少量液体接种于培养基平皿：≤15minRT拭子≤2h,RT≤15minRT≤15minRT≤24hRT≤24hRT≤24hRT无无1/d即使只有一个眼睛感染，如可能，两个结膜都要取样，以决定固有菌群，可使用未感染眼作为对照，和分离于感染眼的细菌进行比较；如费用限制，可根据革兰氏染色的结果，帮助对培养物进行解释如果收集结膜标本,采样要先于麻醉药的应用，因麻醉药可抑抑制某些菌，而角膜刮擦可麻醉后进行，包括真菌培养包括真菌培养基，麻醉药对于一些病原体有抑制作用

牛牛文库文档分享第16页/共59页粪便常规培养艰难梭菌培养E.coliO157:H7和其它产志贺毒素血清型白细胞检测（不推荐用于急性感染腹泻病人）直肠拭子直接置入一清洁、干燥的容器，采集后1h内将标本转运至微生物实验室或转到Cary-Blair运送培养将液体或软大便直接送入清洁、干燥容器内。软便即形状和容器之一致的粪便将液体或血便放入一清洁、干燥的容器粪便采集后直接放入一清洁、干燥容器内，在1h内转运微生物实验室，或放入虫卵或寄生虫转运系统(10%副尔马林或PVA)1.小心插入拭子超越肛门括约肌约1cm2.轻轻旋转拭子，在肛门隐窝取样3.用于检测腹泻病原的拭子上应能见到粪便清洁、防漏宽口的容器或用Cary-Blair培基(>2g)无菌、防漏、宽口器;>5ml无菌、防漏、宽口容器或Cary-Blair培基(>2g)无菌、防漏、宽口容器或用10%福尔马林和/或PVA;>2ml拭子转运未防腐:≤1h,RT运转培养基≤24h,RT≤21h,RT≤1h,RT1～24h,4℃,>24h,-20℃或更冷未防腐:≤1h,RT拭子转运系统≤24h,RT或4℃未防腐≤1h,RT福尔马林/PVA时间无限定,RT≤2h,RT≤24h4℃≤48hRT或4℃培养:2d,4℃3d4℃或更长时间-70℃用于毒素检测≤24h,4℃≤48hRT≤24h,4℃时间无限定,RT≤24h,RT1/d1或2d标本可测出低水平毒素1/d1/d1/d住院超过3d或入院诊断不是胃肠炎的患者未经医师会诊不做常规粪便培养。对这些患者应考虑进行艰难梭菌的检测。除婴儿外不推荐用拭子做常规病原检测患者应是每24h排泄液体或软大便≥5次的患者。成形或硬大便，不推荐。-20℃或以上冷冻易于使细胞毒素活性快速丢失有腹部痉挛的患者在发病6d内采集到的血或液状便的阳性率最高，所有EHEC血清型检测志贺毒素比仅用于山梨醇糖。MacConkey培养O157:H7。该步骤不鼓励使用，因为它提供不了什么临床价值，且易误导。革兰或简单的亚甲基蓝染色可用于观察白细胞。也有一些商业检测方法对淋球菌、志贺氏菌、弯曲菌、单纯疱疹病毒、及肛门携带的B群链球菌或别的溶血链球菌的检测，或不能留样的患者，是保留方法

牛牛文库文档分享第17页/共59页瘘管见脓肿液体：腹部的、羊膜的、腹水、胆汁、关节穿刺液、心包的、腹膜的、胸膜的、滑膜的、胸腔穿刺液1.用碘酊充分消毒皮肤2.经穿刺抽吸或外科获取标本3.立即转运实验室4.尽量多呈送液体；不要将拭子浸入液体内转运用于细菌和酵母的血培养瓶或无菌旋帽管或厌氧转运系统细菌≥1ml真菌≥10ml分枝杆菌≥10ml≤15min,RT≤24h，RT心包液或用于真菌培养的液体，≤24h,4℃无羊水和后穹隆穿刺液应用厌氧系统送检，革兰染色前不需离心。其他液体检测最好用细胞离心制备法做革兰染色坏疽组织见脓肿胃的洗液或灌洗液检测分枝杆菌幽门螺杆菌活检组织患者早晨未进食，并卧床，采样1.用鼻胃管进入胃2.用25-50ml冷却的无菌蒸馏水灌洗3.获得标本并放入到防漏无菌容器4.在去除管子之前，停止抽吸，并钳紧由消化科专家用内镜采样无菌、防漏容器运输培基无菌管≤15min,RT或在采集1h内中和≤1h,RT≤24h,4℃≤24h,4℃1/d1/d标本必须立即处理，因为分枝杆菌在胃灌洗中死亡很快。当运转达>1h时用碳酸氢钠中和为抗菌试验可能需培养

牛牛文库文档分享第18页/共59页生殖器:女性，羊水1.经羊膜穿刺或剖腹产厌氧转运系统,≥1ml≤2h,RT≤24h,RT无不能接受用拭子采集或抽吸的阴道分泌物标本，因为有潜在的阴道共生菌群的污染前庭大腺分泌物1.用碘制剂消毒皮肤2.由导管抽吸液体厌氧转运系统,≥1ml≤2h,RT≤24h,RT1/d宫颈分泌物1.用无润滑剂的扩阴器使宫颈可见2.用拭子从宫颈上拭去粘液和分泌物，丢掉拭子3.用新的无菌拭子紧贴宫颈内道稳固地但轻轻地采样拭子转运≤2h,RT≤24h,RT1/d参阅关于针对衣原体和淋球菌采集和转运的教村后穹隆液送抽吸物或液厌氧培养系统>1ml≤2h,RT≤24h,RT1/d子宫内膜组织和分泌物1.通过望远镜导管经宫颈采样2.将样本全量转入厌氧转运系统厌氧培养系统≥1ml≤2h,RT≤24h,RT1/d

牛牛文库文档分享第19页/共59页妊娠产物1.将组织的一部分送入无菌容器2.如果从剖宫产获得,立即转入厌氧转运系统无菌管或厌氧转运系统≤2h,RT≤24h,RT1/d不要处理恶露，该标本的培养，可能会有误导作用尿道分泌物患者排尿至少1h后采集1.拭去尿道口的渗出物2.用拭子按摩尿道，采集排泄物，对女性病人通过阴道靠着耻骨联合按摩尿道拭子转运≤2h,RT≤24h,RT1/d如未获得排泄物，用Betadine皂洗外尿道，并用水冲洗，用泌尿生殖道拭子插入尿道2-4cm，旋转拭子，至少放置2s抽出，以便吸收阴道分泌物1.擦除过多的分泌物和排出液2.用无菌拭子或吸管从阴道穹隆部粘膜处获取分泌物3.如果需要涂片，再用一个拭子拭子转运≤2h,RT≤24h,RT1/d对于子宫内装置，将全装置放入无菌容器并室温转运。推荐用革兰染色方法而不是培养，诊断细菌性阴道病生殖:女性或男性，损伤1.用无菌盐水清洗损伤处，用解剖刀刃切去损伤表面2.使渗出液积聚3.按压损伤底部，用无菌拭子用力擦底部采渗出液拭子转运≤2h,RT≤24h,RT1/d用暗视野检查来辨认梅毒螺旋体，用载玻片接触渗出液，加盖玻片，放在保湿盒里，(平皿用湿纱布)，立即转运到实验室，梅毒不能用人工培基培养

牛牛文库文档分享第20页/共59页生殖:男性前列腺尿道1.用肥皂和水清洗阴茎头2.通过直肠按摩前列腺3.用无菌拭子收集液体或使液体进入无菌管内用泌尿生殖道拭子插入尿道腔2-4cm，旋转拭子，至少停留2s，而使之容易吸收拭子转运或无菌管拭子转运≤2h,RT≤2h,RT≤24h,RT≤24h,RT1/d1/d前列腺分泌物的病原菌可通过按摩前后的尿标本定量培养鉴定。精液也可以培养下呼吸道下支气管肺泡灌洗、支气管刷或洗液、气管抽吸物痰，咳出痰，诱导性1.将抽吸物或洗出物放入痰采集器2.将刷出物放入有1ml盐水的无菌容器内1.在医生或护士的直接监视下采集标本2.让患者清洗或漱口,去除口腔过多菌群3.指导患者深咳，产生下呼吸道标本(非鼻后液)。采集到无菌容器内1.刷完牙龈和舌头后让患得用水漱口2.借助喷雾器使患者吸入约25ml3%-10%的无菌盐水3.采集诱导的痰到无菌容器内无菌容器>1ml无菌溶器>1ml最小量:细菌,>1ml无菌容器>1ml≤2h,RT≤2h,RT≤2h,RT≤24h,RT≤24h,RT≤24h,RT1/d1/d1/d定量分析需40-80ml液体量，做刷出物的定量分析，可将刷出物放入5ml盐水中对于不能产生标本的儿科患者，呼吸道治疗师应经抽吸获得标本，最好的标本应≤10个鳞状细胞/100×视野(10×物镜和10×目镜)同上

牛牛文库文档分享第21页/共59页上呼吸道鼻鼻咽喉或咽1.用拭子拭去损伤表面的分泌物和碎片，并丢弃2.用第二个拭子用力在损伤处采样，避免接触正常组织1.用预先被无菌盐水湿润的拭子插入鼻孔约1-2cm2.对着鼻粘膜用力旋转1.用藻酸钙拭子经鼻轻轻插入鼻咽后部2.慢慢旋转拭子5s以吸收分泌物3.移去拭子，在床边或检查桌上接种培养基，或将拭子转入转运培养基1.用压舌板压舌2.用无菌拭子从咽后、扁桃体和发炎区域采样拭子转运拭子转运直接培养基接种或拭子转运拭子转运≤2h,RT≤2h,RT平皿:≤15min,RT拭子:≤2h,RT≤2h,RT≤24h,RT≤24h,RT≤24h,RT≤24h,RT1/d1/d1/d1/d对细菌学评价，不能采表浅组织，应选择组织活检标本或针抽吸物先前的鼻培养应保存，以用于链球菌和链球菌携带者或鼻损伤的检测喉拭子培养不能用于会厌发炎的患者，检测淋球菌的拭子应放入含碳的转运培养基，采集后12h内接种平皿。JEMBEC、Biobags、GonoPak宜于室温下转运组织外科手术或皮肤活检程序收集厌氧转运系统或无菌旋帽瓶，需要加几滴盐水保持组织潮湿≤15min,RT≤24h,RT无呈送组织的量尽可能多，如可能在-70℃保存一定量的外科组织以应进一步研究之需，不要呈送在表面简单磨擦的拭子，对于定量研究1cm3的样本是适宜的

牛牛文库文档分享第22页/共59页AFB：抗酸杆菌；BAP：血琼脂平板；BHI：心脑浸液；CHOC：巧克力琼脂；CSF：脑脊液；CVP：中心静脉压；EtOH：乙醇；I.V：静脉内；PVA：聚乙烯乙醇固定液；RT：室温

尿女性,中段男性，中段直导管导管内1.用肥皂和水完全清洗尿道区域2.用湿纱布垫漂洗3.分开阴唇，开始排泄4.排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿1.用肥皂和水清洗阴茎头2.用湿纱布垫漂洗3.回缩包皮，开始排泄4.排出几毫升后，不停止尿流，采集中段尿，用于细菌培养1.用肥皂和水完全清洗尿道区域2.用湿纱布垫漂洗3.将导管无菌插入膀胱4.流过15ml尿之后，采集尿入无菌容器内1.用70%乙醇消毒导管采集部分2.用针头和注射器无菌采集5-10ml尿3.转入无菌管或容器内无菌广口容器，≥1ml，或尿转运试剂盒无菌宽口容器,≥1ml，或尿转运试剂盒无菌防漏容器无菌防漏容器未防腐:≤2h,RT防腐：≤24h,RT未防腐:≤2h,RT防腐：≤24h,RT未防腐:≤2h,RT防腐：≤24h,RT未防腐:≤2h,RT防腐：≤24h,RT≤24h4℃≤24h4℃≤24h4℃≤24h4℃1/d1/d1/d1/d女性尿中的衣原体抗原检测的敏感性可能较男性低。尿对细胞系有毒，因而不能用于衣原体培养之标本。中段尿部分用于细菌培养首段尿用于衣原体的探针和抗原检测。收集探针和抗原检测的标本待最后一次排尿至少2h后该程序可能导致尿道菌落进入膀胱并增加医源性感染的危险留管的病人膀胱内总是有细菌的。除非他们有症状，不要从这些病人收集尿标本伤口见脓肿

牛牛文库文档分享第23页/共59页不常见细菌标本

某些引起传染病的细菌很少碰到，要求特殊运送条件或运送培养基。在许多情况下，这些标本需要送到参考实验室，则需要相对长的时间。表4列出了这些标本和这些细菌的转运条件。

牛牛文库文档分享第24页/共59页表4不常见菌的标本处理细菌(疾病)标本选择转运条件注释巴通体属(猫抓热)血、组织、淋巴结抽出物4℃1周，-70℃长期用Giemsa染色可在红细胞内或上看见菌体。组织用Warthin-Starry银染色。SPS有毒性伯氏疏螺旋体(莱姆病)皮损周围活检，血、CSF保持组织潮湿和无菌；如果可能亲自送到实验室除培养外，考虑PCR，培养阳性率低。Warthin-Starry银染组织。AO和Giemsa染色用于血液和CSF回归热螺旋体(回归热)血涂片(血)如可能亲自送交实验室盐水湿片直接用暗视野显微镜观察。用Wrighrs或Giemsa染色。血培养不可靠布氏杆菌血、骨髓室温运送；儿科溶解-离心试管有帮助如维持30天可用常规血培养瓶。可能需盲传。关节炎用关节液培养。怀疑布氏菌病通知实验室克雷伯肉芽肿杆菌(腹股沟肉芽肿；杜诺凡肉芽肿)组织、表面下刮片室温运送主要是一种热带疾病，Wright’s或Giemsa染色。仅上皮是不够的，细菌不能培养柯克斯体(Q热)立克次体(斑点热、斑疹伤寒)血清、血液、组织血液和组织冷冻于-70℃直到运送分离送参考实验室，优先选择血清学诊断埃立克体属血涂片，皮肤活检，血液(用肝素或EDTA抗凝)，CSF，血清培养材料在冰上运送；保持组织湿润和无菌，保存于4～20℃直到检测或-70℃运送；PCR检测需在冰上或冷冻运送优先选择血清学诊断，用甲醇固定涂片，用FA或Gimenez染色，分离送参考实验室。CSF直接检测或PCR弗朗西斯菌属(土拉热)淋巴结抽吸物、刮片，病损活、血液、痰迅速转送实验室或冷冻；在干冰上运送送参考实验室，血清学实验帮助。组织Gram染色无效。IFA可用。当时培养有效性10%钩端螺旋体属血清，血液(枸橼酸盐抗凝剂不能用)，CSF(第1周)，尿(1周后)血<1h；尿<1h或用1%牛血清白蛋白1:10稀释储存于4～20℃，或用碳氢钠中和血清学试验最有帮助。酸性尿有害。暗视野显微镜和直接FA可用。组织用Warthin-Starry银染色链杆菌属(鼠咬热哈佛希尔热)血、抽取关节液优选高容量瓶不能冷冻。生长需血、血清或腹水。禁用SPS。AO染色有帮助

AO吖啶橙;SPS：多聚茴者脑黄酸钠

牛牛文库文档分享第25页/共59页标本拒绝接收

(1)标本采集、转运容器和条件不当可使标本变为不可接受的，需重新采集。要求见表3。(2)由于标本质量不符合要求，拒绝接收(3)标记缺失的标本，一定要重新核对明确，否则拒绝接受。

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一、血液和骨髓标本的采集培养的时间：临床症状出现之后，应尽可能早地采血培养。在应用抗菌药物治疗之前采血培养是最理想的。如果患者已经使用抗菌药进行治疗，我们应该在下一次用药之前采血培养。采血次数及间隔：通常我们推荐在短时间内（例如1小时内）连续采集2至3套（2瓶/套）。留有时间间隔的采血（例如1-2小时分开采集）适合于连续监测被怀疑有感染性心内膜炎或其它的血管内感染（导管相关性）菌血症和真菌血症的患者。

牛牛文库文档分享第27页/共59页采集要点：血培养瓶应该清楚而正确地贴上标签，所有的血培养瓶上都应标明患者的信息（包括日期、时间、科室、住院号、姓名）每一对血培养瓶应该从身体的不同部位采取用来培养的血应该是静脉血而不是动脉血。根据推荐，应该避免从静脉或动脉道管内抽血，因为通常这些装置污染率较高。采集标本前的皮肤消毒非常重要。尽可能快地将标本送到临床微生物实验室，进行培养，如果有任何耽搁，应暂时室温下保存

牛牛文库文档分享第28页/共59页血培养瓶的选择：我院微生物室全自动血培养仪BacT/ALERT专用血培养瓶，可根据临床上的不同需要灵活选用：成人需氧培养瓶（SA）、成人厌氧培养瓶（SN）、小儿中和抗生素需氧培养瓶（PF）、结核菌体液培养瓶（MP）、成人中和抗生素需氧培养瓶（FA）成人中和抗生素厌氧培养瓶（FN）

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牛牛文库文档分享第30页/共59页用哪一种培养瓶根据推荐，成年人的常规血培养应该包括一对需氧瓶和厌氧瓶。如果不用厌氧瓶，应该加一个需氧瓶，确保培养的血量充足。如果用注射器及针抽血，首先接种厌氧瓶避免空气进入。如果抽取血液的量少于推荐量，血液应首先接种到需氧瓶里，因为多数菌血症是由需氧菌和兼性需氧菌导致的。另外，致病性酵母样真菌和严格需氧菌（例如：假单胞菌）几乎都是需氧瓶中培养出来的。剩余的血应该接种到厌氧瓶中。

牛牛文库文档分享第31页/共59页采血量：对于一个成人来说，推荐的采血量是每个组合达到20-30毫升。因为每个培养组合包括一个需氧瓶和一个厌氧瓶，每个瓶子都应该接种10毫升血液。在每毫升血液少于1个菌落形成单位的菌血症或真菌血症的多数病例中，这个量被推荐为最佳病原体检出量。关于婴儿和儿童血培养采血量的建议如下表：

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患儿体重

KgIb患儿总血量（ml）

推荐培养血量（ml）培养1培养2培养血总量（ml）占患儿总血量（%）≤1≤250-992241.1-22.2-4.4100-20022442.1-12.74.5-27＞200426312.8-36.328-80＞8001010202.5＞36.3＞80＞220020-3020-3040-601.8-2.7

牛牛文库文档分享第33页/共59页血培养瓶的操作步骤：（1）、打开培养瓶盖（2）用75%酒精消毒瓶盖（3）将抽出血液的注射器排弃针头前的空气后注入血液于瓶内（4）拔出注射器后消毒针眼处，轻轻混匀血培养瓶即可。（5）填写患者资料：姓名、科室、采集时间。撕下瓶中条码识别条，请粘贴于送检化验单右上角处。切记：立即送检，勿放置冰箱保存。

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牛牛文库文档分享第36页/共59页二、尿液标本的留取

正常人的尿液是无菌的，然而人的尿道出口有大肠杆菌、葡萄球菌等存在，往往这些细菌又是尿路感染中常见的病原菌，因次要做好尿液的细菌学检查，应注意标本收集问题。另外，可参考尿十项检查的硝酸盐还原实验来推断是否有细菌感染。因为绝大多数泌尿系感染是由肠杆菌科的细菌引起，而此类细菌的硝酸盐还原实验为阳性。

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。采集指征：1、有典型的尿路感染症状；2、肉眼脓尿或血尿；3、尿常规检查为白细胞或亚硝酸盐阳性；4、不明原因的发热，无其他均部症状；5、留滞导尿管的患者出现发热；6、膀胱出排功能受损

牛牛文库文档分享第38页/共59页采集方法：力争在抗生素使用之前或停用抗生素5d之后留取尿液标本。（1）清洁中段尿：最好留取早晨清洁中段尿标本。嘱咐患者睡前少饮水，清晨起床后用温开水清洗会阴部及尿道口，再用无菌布擦干，叫病人排尿，弃去前段尿，收集中段尿3-5ml流入尿培养管中，立即送检。该法简单、易行，是最常用的尿培养标本收集方法。但很容易受会阴部细菌的污染，应在医护人员指导下正确留取。

牛牛文库文档分享第39页/共59页（2）耻骨上膀胱穿刺：为避免尿道正常菌群的污染，收集尿液最好的方法是膀胱穿刺。适应症：

a.有尿路感染的临床症状，但中段尿细菌数很低而又难以确认感染源着。

b.婴幼儿、新生儿不能导尿着

c.怀疑有厌氧菌感染。

牛牛文库文档分享第40页/共59页（3）直接导尿：可减少尿液标本污染，准确反映膀胱感染情况。但有可能将下尿道细菌引入膀胱，导致继发感染，一般不采用。（4）小儿收集包：对于无自制能力的小儿可应用收集包收集尿液，这种装置由于很难避免会阴部菌群污染产生假阳性，所以只有在检验结果为阴性实习有意义

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（5）留滞导尿管收集尿液：按无菌操作方法用注射器穿刺导尿管吸取尿液，禁止从导尿带里直接采取尿液。标本运送：如不能及时送检，室温下不能超过2h，4℃不能超过8h。保存标本不能用于淋球菌培养。

牛牛文库文档分享第42页/共59页三、脓及创伤感染标本的留取1、首先用无菌生理盐水清洗脓液及病灶的杂菌，再采集标本。2、一般用拭子采样管中的棉拭子采取脓血液及病灶深部的分泌物，瘘管也可以无菌手续采取组织放入无菌容器内送检。3、脓肿标本以无菌注射器抽取为好，最好在切开排脓时，以无菌拭子采取，也可将占有脓汁的最内层敷料放入无菌容器内送检。4、其它：疑是放线菌感染时选取脓汁中的“硫磺样颗粒”于无菌容器内送检。当创伤出血敷料药物在2h内及烧伤在12h内不应采集标本。

牛牛文库文档分享第43页/共59页四、脑脊液标本的采集采机时间：怀疑脑膜炎时，应立即采集脑脊液，最好在抗生素应用之前。采集用量：通常用于细菌培养的量要大于1ml，用于真菌和抗酸菌的检查要大于2ml。标本送：脑膜炎奈瑟氏菌立体后会迅速自溶，肺炎链球菌和流感嗜血杆菌也很容易死亡。因此，标本应立即送检，并注意保温。切不可置冰箱保存。

牛牛文库文档分享第44页/共59页五、下呼吸道分泌物（痰）标本的采取

下呼吸道分泌物（痰）的细菌学检查对病原学诊断起着重要的作用，但目前也存在着严重的问题__标本的质量。由此往往造成做出的病原菌诊断与实际引起感染的病原菌脱节，以致造成抗菌药物的应用不合理，甚至耐药菌株的出现和流行。

牛牛文库文档分享第45页/共59页标本的质量：痰标本显微镜检的分类

(白细胞数/低倍镜视野)

分类白细胞上皮细胞

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