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文档简介

实验原理溶菌酶广泛存在于动植物及微生物体内，具有抗感染、消炎、消肿、增强体内免疫反应等多种药理作用。鸡蛋清内含有丰富的溶菌酶，向鸡蛋清中加入一定量的中性盐，并调节pH至溶菌酶的等电点，溶菌酶即可结晶析出。如若结晶不纯，可以重结晶。实验原理溶菌酶之所以溶菌，因它能催化革兰氏阳性细菌细胞壁黏多糖水解的缘故。测定溶菌酶的活力，可以用某些细菌细胞壁作为底物，以单位时间内被它水解的细胞壁的量表示酶活力的大小。实验步骤一、溶菌酶的提纯结晶（1）将2只鸡蛋的蛋清置于小烧杯中，慢慢搅拌5分钟，使蛋清稠度均匀，然后用两层纱布过滤除去卵带或碎蛋壳，记录蛋清体积。（2）按每100ml蛋清溶液加入5g氯化钠的比例，向蛋清溶液中慢慢加入氯化钠细粉，边加边搅拌，促使氯化钠细粉及时溶解，以避免局部浓度过高或沉淀于容器底部，否则会引起蛋白质的变性而产生大量的白色沉淀。实验步骤（3）加完氯化钠细粉后，再用1mol/L的氢氧化钠溶液小心地将上述蛋清溶液的PH值调节到9.5-10.0。低温下静置7d，溶菌酶结晶将慢慢析出，于72-96h达到最高产率。（4）将结晶溶液4000r/min，离心5min，倾去上清液，加入等体积预冷0℃丙酮，再4000r/min，离心5min，洗涤后弃去上清液，即可得到粗制的溶菌酶晶体。实验步骤二、溶菌酶的活力测定（1）酶液的制备准确称取溶菌酶样品100mg，用0.1mol/L，pH6.2磷酸缓冲液配成1mg/ml的酶液，再将酶液稀释成50µg/ml。（2）将酶液2mL和底物悬液2mL（短小芽孢杆菌）分别置于25℃水浴中保温10-15min，然后吸取底物悬液4mL放入比色皿中，450nm波长读出吸光度，此为0时读数。1min后，再读吸光度，记下读数。（3）酶活力单位的定义是：在25℃，pH6.2，波长为450nm时，每分钟引起吸光度下降0.001为1个活力单位。实验步骤P={(A0-A1)/m}*1000P：每毫克酶的活力单位（U/mg）A0：零时450nm处的吸光度A1:1min时450nm处的吸光度m：样品的质量（mg）实验结果

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