PCR定量丙肝RNA作业指导书

丙型肝炎病毒(HV)核酸扩增(PCR荧光定量检测标准操作程序一、目的：明确丙肝病毒核酸定量检测的操作规程，指导检验人员正确进行丙肝病毒核酸定量的检测保证检测结果及时可靠。二、范围：适用于进行丙肝病毒核酸定量检测的检验人员。三、职责：实验操作人员应严格按操作规程进行实验。四、检测原理：本试剂盒从血清或血浆中提取 ，在逆转录酶作用下将逆转录为，在引物的指导下，以四种脱氧核苷酸为底物，通过耐热聚合酶的酶促作用，对进行体外扩增，用探针法检测扩增产物。通过标准曲线，即可计算出被检物的含量。五、试剂：来源：上海复星 核酸扩增荧光定量检测试剂盒〕。规格：人份盒。试剂盒组成：病毒 提取试剂：用于从血清或血浆中提取 。裂解液×1瓶含有硫氰酸胍的溶液助沉剂1瓶含有助沉剂的冻干粉末去抑制剂1瓶含有去抑制剂的冻干粉末洗涤A14ml×1瓶含有硫氰酸胍的溶液洗涤B4ml×1瓶含有Tris的溶液洗脱液1×2支含0.04NaN（无RNase）核酸提取柱32支×1包含连接套管核酸扩增（ ）―荧光检测试剂：― 试剂主反应液 ×1支 含有一对引物和dNTP的溶液酶混合物 ×1支 含有Taq酶逆转录酶和RNA酶抑制剂的溶液荧光探针 20 ×1支 含有荧光探针的溶×1阴性对照 含有0.05%NaN的HCVRNA阴性的混和人血清照 ×1支 含有约2×10 的HCV因片段的非传染体外转录RNA弱照×1支 含有约2×10 的HCV基因片的非传染体外转录RNA工作标准品 ×1支 含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品 ×1支 含有适量的HCV基因片段的非传染体外转录RNA工作标准品 ×1支 含有适量的HCV基因片段的非传染体外转录RNA工作标准品 ×1支 含有适量的HCV基因片段的非传体外转录RNA工作标准品①～④的参数和的定值允许范围根据批号不同而不同。详见试剂盒的说明书附页。六、仪器：SLAN6.0Real-TimePCRDetection七、操作程序、样本处理（标本处理区进行）标本处（所有操作需采用无 酶的带滤芯吸嘴及离心管在标本处理区进行试验前准备在去抑制剂的试剂瓶中加入 动溶解后混匀备用。在洗涤液的瓶子中加入 无水乙醇，颠倒混匀后备用。在洗涤液的瓶子中加入 无水乙醇，颠倒混匀后备用。病毒 提取取 个 （量和个工作标准品），做好标记后分别加入 已混有助沉剂的裂解液。分别用带滤芯吸嘴加入 需处理的血清或血浆标本和对照品，用滤芯吸嘴反复吹打次。再分别用带滤芯吸嘴加入 去抑制剂，盖上管盖，振荡混匀，离数秒，置℃反应 分钟。离心数秒，用带滤芯吸嘴加入 无水乙醇，振荡混匀，离心数秒将做好标记的核酸提取柱插入连接管后，固定在负压装置上，将步骤开启负压，让核酸提取柱内的液体全部抽干。在每个核酸提取柱内加入 洗涤液入 液无 的 ， 心的 无 将 置盖上管盖， 离心取 做 反应。― 试剂准备（ 前准备区进行）从试剂盒中取出 主反应液酶混合物和荧光探针室温下融化后离数秒按照待扩增标本数量取 主反应液酶混合物荧光探针∶∶ 毛细反应管中，每管 ，将装有 反应液的毛细反应管转移至标处理区。加样（标本处理区进行）在装有 反应液的毛细反应管中用带滤芯吸嘴分别加入 已处好的标本（标本处理步骤 离心管中的洗脱液）。盖上管盖，离心数秒后转移至扩增检测区。入 ℃℃℃℃结果分析选 或 点击 按钮据分析界面。据分析中，噪音线 位移至刚好超过阴性对照曲线最高点且 值不出现任何值为可根据本身实际情况加以调整得到本的结果。质控≤ 曲线关系≥ 。阴性对照结果为结果不显任何值强弱阳性对照量结果规允许范围．结果判断本灵敏度为 ，量范围为 ～ 性结果判断：为≥ 为≤≤ 样，提示次在