运用HPLC测量麻黄有效成分盐酸麻黄碱的含量,药学论文

PAGEPAGE7运用HPLC测量麻黄有效成分盐酸麻黄碱的含量,药学论文驱寒抗感颗粒为纯中药制剂，原处方是北京市密云县中医医院临床验方，后经化裁而成。全方由麻黄、荆芥、苦杏仁、桂枝、甘草等药材组成，具有散寒解表、祛风止咳的成效，主治外感风寒表证。该制剂临床使用后效果良好，且比原汤剂服用量小，服用方便，患者易于接受。为了有效地控制制剂质量，保证药效，经过处方分析，我们采用薄层色谱(TLC)法对该制剂中的主要药物麻黄、桂枝、苦杏仁进行了定性鉴别，应用高效液相色谱(HPLC)法对麻黄中的主要有效成分盐酸麻黄碱进行了含量测定，以便建立一种科学准确且操作简便的质量控制标准。1材料1．1仪器1200型高效液相色谱仪，美国安捷伦科技公司;AD－2百万分之一电子天平，美国PerkinElmer公司;H66005超声波清洗器，无锡市超声电子设备厂。1．2药品与试剂盐酸麻黄碱、桂皮醛、苦杏仁苷对照品，中国食品药品检定研究院，批号分别为:171241－201807、110710－201816、185361－201806;驱寒抗感颗粒，北京市密云县中医医院制剂室自制，批号:20200705，20200707，20200709;水为重蒸水，乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。2方式方法与结果2．1定性鉴别2．1．1麻黄的TLC鉴别取驱寒抗感颗粒5g，研细，加适量浓氨水湿润，再加三氯甲烷50mL，加热回流1h，滤过，滤液蒸干，残渣参加1mL甲醇使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液;按驱寒抗感颗粒处方及工艺制备不含麻黄的阴性样品，同法制成缺麻黄阴性对照溶液;另取盐酸麻黄碱对照品适量，加甲醇制成含量1mg/mL的溶液，作为对照品溶液。照TCL法试验，分别汲取上述溶液各5L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－浓氨试液(20∶5∶0．5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，于105℃加热至斑点显色清楚明晰。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显一样的红色斑点;阴性对照无干扰。麻黄的TLC见封3，图1。2．1．2苦杏仁的TLC鉴别取驱寒抗感颗粒5g，研细，加甲醇50mL，加热回流30min，滤过，滤液蒸干，残渣参加2mL甲醇使溶解，滤过，取滤液作为供试品溶液;按驱寒抗感颗粒处方及工艺制备不含苦杏仁的阴性样品，同法制成缺苦杏仁阴性对照溶液;另取苦杏仁苷对照品适量，加甲醇制成含量2mg/mL的溶液，作为对照品溶液。照TCL法试验，分别汲取上述溶液各3L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－水(15∶40∶22∶10)5～10℃放置12h的下层溶液作为展开剂，展开，取出，立即用0．8%磷钼酸的15%硫酸乙醇溶液浸板，在105℃加热至斑点显色清楚明晰。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显一样颜色的斑点;阴性对照无干扰。苦杏仁的TLC见封3，图2。2．1．3桂枝的TLC鉴别取驱寒抗感颗粒5g，研细，加乙醇25mL，超声(功率120W，频率40kHz)处理25min，滤过，滤液作为供试品溶液;按驱寒抗感颗粒处方及工艺制备不含桂枝的阴性样品，同法制成缺桂枝阴性对照溶液;另取桂皮醛对照品适量，加乙醇制成含量1L/mL的溶液，作为对照品溶液。照TCL法试验，分别汲取上述供试品和阴性对照溶液各10L，对照品溶液2L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。结果，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显一样的橙红色斑点;阴性对照无干扰。桂枝的TLC见封3，图3。2．2盐酸麻黄碱的含量测定2．2．1色谱条件与系统适用性试验色谱柱:UItimateAQ－C18色谱柱(250mm4．6mm，5流动相:乙腈－0．02mol/L磷酸二氢钾溶液(含0．2%三乙胺，磷酸调pH2．5)(2∶98);检测波长:210nm;柱温:35℃;流速:1．0mL/min。在这里条件下，盐酸麻黄碱能够与其他成分很好的分离，供试品中的盐酸麻黄碱保存时间与对照品一样，并且阴性对照无干扰。见图4。2．2．2对照品溶液的制备精到准确称取适量盐酸麻黄碱对照品，参加0．1%盐酸甲醇溶液制成含量42．30g/mL的溶液，即得。2．2．3供试品溶液的制备取驱风抗感颗粒1g，研细(过5号筛)，精到准确称取0．5g，置于50mL具塞量瓶中，参加1．0mL浓氨试液，密闭，使之充分湿润，参加氯仿40mL，超声(功率120W，频率40kHz)处理20min，放置至室温，氯仿定容，过滤，弃去初滤液。精到准确量取25mL续滤液，参加0．1%盐酸甲醇溶液2mL，摇匀，挥干，残渣参加0．1%盐酸甲醇溶液使溶解，移至5mL量瓶中，参加0．1%盐酸甲醇溶液定容，离心，分取上清液，即得供试品溶液。2．2．4阴性对照溶液的制备按驱寒抗感颗粒处方及工艺制备不含麻黄的阴性样品，再按2．2．3项下方式方法制成阴性样品溶液。2．2．5线性关系考察取对照品适量，参加0．1%盐酸甲醇溶液，分别配成8．46、12．69、21．15、42．30、63．45g/mL的盐酸麻黄碱对照品溶液，汲取各对照品溶液5L，按2．2．1项下色谱条件，依次注入液相色谱仪中进行测定。以峰面积积分值(Y)为纵坐标，对照品溶液进样量(X)为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程Y=2．155103X+1．613(r=0．9999，n=5)。结果，盐酸麻黄碱进样量在0．0423～0．3173g范围内与峰面积积分值有良好线性关系。2．2．6精致细密度试验取同一盐酸麻黄碱对照品适量，按2．2．1项下色谱条件测试，连续进样6次，每次5L。结果，盐酸麻黄碱峰面积的相对标准偏差(RSD)=0．87%(n=6)，表示清楚仪器精致细密度良好。2．2．7稳定性试验取同一供试品溶液适量，在室温下放置0、2、4、6、12、24h，按2．2．1项下色谱条件分别进样5L进行测定。结果，RSD=0．83%(n=6)，表示清楚供试品溶液在24h内稳定。2．2．8重复性试验取同一批号样品适量，按2．2．3项下方式方法制成供试品溶液6份，按2．2．1项下色谱条件分别进样5L进行测定。结果，盐酸麻黄碱含量的RSD=1．1%(n=6)，表示清楚方式方法重复性良好。2．2．9加样回收试验精致细密称取已经知道盐酸麻黄碱含量(0．4250mg/g)的同一批次(批号:20200705)样品6份，每份约0．5g，分别精致细密参加盐酸麻黄碱对照品0．1200、0．1200、0．1400、0．1400、0．1600、0．1600mg，按2．2．3项下方式方法制成供试品溶液，按上述2．2．1项下色谱条件测定含量，并计算加样回收率。结果见表1。【表1】2．2．10样品含量测定称取3批样品适量，按2．2．3项下方式方法制成供试品溶液，按2．2．1项下色谱条件测定，以峰面积外标法计算盐酸麻黄碱的含量。结果，3批样品中盐酸麻黄碱的含量分别为0．4250、0．4174、0．4098mg/g。3讨论在驱寒抗感颗粒组方中麻黄、苦杏仁、桂枝均为主药，因而对其进行了定性鉴别，且麻黄为君药，对其有效成分盐酸麻黄碱的研究较多，检测方式方法成熟准确，故对其进行了HPLC含量测定。在对麻黄、苦杏仁、桂枝的定性鉴别中，按2018版(中国药典〕即可获得良好结果。对盐酸麻黄碱的定量鉴别，我们在以下为以下为以下为以下为参考文献方式方法的基础上，分别用1．44%磷酸溶液、氯仿和碱性甲醇作为提取溶剂，发现氯仿的提取率最高且峰形理想。经方式方法学考察表示清楚，本方式方法操作简便，准确性、可靠性、重复性好，可作为驱寒抗感颗粒