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医学分子生物学YingziKangPh.D

Dept.ofbiochemistry,TianjinMedicalUniversity基本内容第一篇基因第二篇蛋白质第三篇细胞信号转导的分子机制（略）第四篇细胞增殖、分化与细胞凋亡的分子机制第五篇分子生物学实验技术分子生物学（molecularbiology)是从分子水平（基因水平）去研究或解释一切生物学现象，并在分子水平上改造和利用生物的一门学科。基因工程、细胞工程、生物工程、核酸与蛋白质相互作用。基因工程是指在人工可以控制的条件下将基因剪切或重新组合，再导入到生物体内，使这些基因在其中表达并遗传下去。基本概念基因的概念遗传学概念：1865年孟德尔在提出“遗传”的概念时提出的，即基因代表了生物体内任何一种遗传物质（生物的某一种性状）。分子生物学概念：1868年生化学家发现了核酸（核内酸性物质）1925年荚膜（光滑、Ⅲ型）Ⅲ型活菌体致病;无荚膜（粗糙、Ⅱ型）1944年美国科学家用提出的核酸代替菌体，取得同样效果。核酸→基因生物大分子结构研究概念：应用物理学和化学研究核酸大分子结构和功能。基因与基因组的概念基因是生物体的遗传物质，一般是指与生物体某些性状有关的核酸（结构基因），以及负责调节控制基因活动的调控基因。生物体内全部基因称为基因组（genome)，包括了任何染色体体内中的任何一个基因，是一个很庞大的范围。基因工程技术是要从基因组中分离、纯化、扩增某一个目的基因。分子克隆技术是利用单细胞(如大肠杆菌)进行无性繁殖的技术基因的剪切、重组、转化、增殖、分离重组DNA的转化需要载体,最常用的为质粒,很多质粒本身就是大肠杆菌中提取出来的,是大肠杆菌中染色体外可以复制的环状DNA,可以出入于大肠杆菌。重组后的质粒被引入到大肠杆菌中的过程为转化。载体(vector)载体是携带靶DNA片段进入宿主细胞进行扩增和表达的工具。质粒（plasmid)为最常用的载体。细菌染色体外小型双链环状DNA复制子，对细菌的某些代谢活动和抗药性表型有一些作用。质粒载体是在天然质粒基础上人工改造拼接而成，其不仅可以在细菌中复制，同时在添加真核细胞复制信号和启动子后，可构建成真核细胞复制表达的穿梭质粒，用途非常广泛。其他载体：λ噬菌体、粘粒、病毒等基因研究的几种重要分析方法限制性内切酶酶谱分析核酸分子杂交核苷酸序列分析限制性内切酶谱利用内切酶的功能对基因组或单个基因进行酶切，经过多种酶（至少三个）的多个切点的反复比较，可以得到某一基因的酶切图谱。如在某些疾病（特别是遗传病）时，基因结构或碱基序列发生变化（突变、缺失、插入），此时酶切图谱会有改变。利用限制性片段长度多态性（RFLP）进行分析。核苷酸序列分析（sequencing)测序分析是基因研究中最精确的分析，所以又称为一级结构分析。一级结构的了解是进一步分析基因结构和功能关系的前提，同时对基因表达、调控的研究也是非常重要的。主要方法是sanger提出的酶法（末端终止法）和Maxam、Gilbert提出的化学降解法。

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