甾体激素类药物的分析课件

第十五章甾体激素类药物的分析基本结构：环戊烷骈多氢菲ABCD12345678910111213141516171819分类：甾体激素肾上腺皮质激素性激素雄性激素及蛋白同化激素孕激素雌激素肾上腺皮质激素醋酸地塞米松雄性激素丙酸睾酮蛋白同化激素苯丙酸诺龙雌激素炔雌醇一、结构与性质1.肾上腺皮质激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应

C17

–

α–醇酮基还原性常见药物有氢化可的松、醋酸泼尼松、醋酸氟轻松、倍他米松等。2.雄性激素及蛋白同化激素主要活性基团性质△4–3–酮UV、与羰基试剂反应

C17–

β–羟基可成酯常见药物有丙酸睾酮、甲睾酮、苯丙酸诺龙等。4.雌激素主要活性基团性质A环为3–OH苯环UV、与重氮苯磺酸盐反应C17–乙炔基与AgNO3反应C17–羟基可成酯常见药物有炔雌醇、炔雌醚、雌二醇、苯甲酸雌二醇等。二、鉴别试验（一）呈色反应甾体激素类药物呈色H2SO4H3PO4HClO4HCl1.与强酸的呈色反应与硫酸显色反应

显色荧光加水稀释泼尼松龙深红

絮状↓灰泼尼松橙

黄→蓝绿炔雌醚橙红

黄绿

↓红色

炔雌醇橙红

黄绿

絮状↓玫红醋酸可的松黄或微褪色并澄

带橙清异烟腙（黄色）睾酮肾上腺皮质激素药物呈色四氮唑盐OHˉ（2）C17

–

α–醇酮基具有甲酮基或活泼亚甲基的甾体激素类药物呈色亚硝基铁氰化纳间二硝基酚、芳香醛（3）甲酮基黄体酮蓝紫色有机氟Fˉ有机破坏有机氯Clˉ（4）有机卤素茜素氟蓝硝酸亚铈硝酸-硝酸银AgCl↓呈蓝紫色雌激素类药物红色偶氮染料重氮苯磺酸（5）酚羟基肾上腺皮质激素药物Cu2O↓橙红色碱性酒石酸铜（二）沉淀反应Ag↓黑色氨制硝酸银1.C17

–

α–醇酮基3.与硝酸-硝酸银的沉淀反应含有氯取代的甾体激素类药物。△KOH(三)制备衍生物测定m.p.△△香（四）水解产物的反应特臭特臭△４-3-酮240nm苯环280nm（五）UV法3300～3000cm-13000～2700cm-11900～1650cm-11650～1450cm-11000～650cm-1（六）IR法3750～3300cm-1ν醋酸可的松结构特征：△4–3–酮、C17–OHC20–酮基、C11–酮基、醋酸酯1630cm-1ν3420cm-1亚甲基、角甲基吸收带1750cm-11232cm-11052cm-1（七）TLC法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别方法：对照品法要求供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与对照品溶液的主斑点相同。炔诺酮TLC图（八）HPLC法主要用于甾体激素类药物制剂的鉴别（如：醋酸曲安奈德软膏、醋酸氟轻松软膏）方法：对照品法要求在含量测定项下记录的色谱图中，供试品峰的tR与对照品峰的tR一致。三、杂质检查（一）游离磷酸（对照品法）地塞米松磷酸钠氢化可的松磷酸钠倍他米松磷酸钠氢化泼尼松磷酸钠原理：方法：（二）甲醇和丙酮甲醇不得出峰（灵敏度法）检测限=3.1ng丙酮≤5.0%内标法+校正因子GC法（三）雌酮原理：Zimmermann反应碱性KOH乙醇高纯度来源：合成中用二氧化硒(SeO2)脱氢剧毒原理：S（四）硒（五）其他甾体定义与标示药物结构不同的甾体化合物都称为“其他甾体”2.来源原料、中间体、异构体、降解产物3.特点（1）可能存在多个甾体杂质（2）结构类似4.方法（具有一定分离能力）TLC法（高低浓度对比法）HPLC法（类似高低浓度对比法）四、含量测定（一）UV法△４-3-酮：240nm（±）肾上腺皮质激素雄性激素和蛋白同化激素孕激素苯环：280nm（±）雌激素（二）反应分光光度法1.适用于非分光光度活性药物2.使待测组分光谱位移，避免干扰3.增加测定灵敏度4.增加选择性弱、非分光光度活性药物强分光光度活性药物化学反应

肾上腺皮质激素类C17-α－醇酮基强还原性OH-[还原]1.四氮唑比色法（1）原理三苯甲臜↓深红氯化三苯四氮唑（TTC）红四氮唑（RT）蓝四氮唑（BT）双甲臜（暗蓝）ChPTTC（RT）BPTTC（RT）USPBT40～45′暗（2）操作方法（对照品法）基团对反应速度的影响C11=O＞C11－OHC21－OH＞C21-酯C16无论何种取代基ν↓（3）讨论溶剂、水分的影响含水量＞5%→ν↓含水10%→A↓10%含水30%→几无反应——无醛无水乙醇醛→A↑——无水乙醇

O2与光线的影响反应过程反应产物怕光→避光、快速O2影响颜色强度和稳定性→隔绝空气、快速、充N2碱的种类及加入顺序反应应在强碱性（pH13.75）条件下进行，以氢氧化四甲基铵的结果最佳。加入顺序：温度与时间t、℃↑→ν↑→甲臜分解↑→%↓ChP25℃40～45′BP30℃1h（4）特点：缺点影响因素太多优点测定结果能指示药品的稳定性（氧化及降解产物无此反应）2.其他比色法异烟肼比色法

Kober反应比色法ChP（2005）、USP、BP、JP均采用RP-HPLC（大多内标法）特点：用样量少，灵敏度高，分离效果好，测定速度快（三）HPLC法1．甾体激素类药物的结构中能和四氮唑盐发生显色反应的基团A.酚羟基B.活泼次甲基C.甲酮基D.C17-α-醇酮基E.酮基复习2.用异烟肼比色法测定甾体激素药物含量时，其溶液的环境是A．强酸性B．中性C．强碱性D．弱碱性E．以上都不对3.问题（1）～（5）A．维生素B1B．醋酸地塞米松C．两者皆是D．两者皆不是（1）异烟肼比色法（2）硫色素反应（3）紫外分光光度法（4）羟肟酸铁反应（5）绿奎宁（Thaciaquin）反应BACDD4.可用于氢化可的松鉴别的试剂有A．氨制硝酸银B．异烟肼C．红四氮唑D．硫酸E．重氮苯磺酸5.可用于甾体激体类药物的测定方法有A．高效液相色谱法B．四氮唑盐法C．紫外分光光度法D．异烟肼比色法E．Kober反应比色法6.能与亚硝基铁氰化钠反应生成蓝紫色的药物是A．雌二醇B．黄体酮C．醋酸可的松D．苯丙酸诺龙E．以上都不对7.各国药典对甾体激素类药物常用HPLC或GC法测定其含量，主要原因是A.它们没有特征紫外吸收，不能用紫外分光光度法B.不能用滴定分析法进行测定C.由于“其它甾体”的存在，色谱法可消除它们的干扰D.色谱法比较简单，精密度好E.色谱法准确度优于滴定分析法8．异烟肼比色法测定甾体激素类药物时，药物的呈色基团是A.酮基B.酚羟基C.活泼次甲基D.炔基E.甾体母核9.四氮唑比色法可用于下列哪个药物的含量测定