祁自柏体外诊断试剂的分类和基本原理详解演示文稿

祁自柏体外诊断试剂的分类和基本原理详解演示文稿现在是1页\一共有74页\编辑于星期日（优选）祁自柏体外诊断试剂的分类和基本原理现在是2页\一共有74页\编辑于星期日

我国体外试剂的几个发展阶段

1七十年代末，乳胶凝集，血球凝(PHA,RPHA）

2八十年代初期，放射免疫测定(RIA)，

抗HBs单克隆抗体

3八十年代中期，酶联免疫试剂，基因工程表达乙肝

病毒核心抗原和e抗原

4九十年代，聚合酶链反应(PCR)，丙肝，戊肝

病毒基因被克隆，各种基因工程抗

原被应用

5近期，发光免疫,生物芯片技术(基因芯片，

蛋白芯片)

现在是3页\一共有74页\编辑于星期日（第一类）

酶联免疫（酶标板、磁珠、微粒子）类试剂酶联免疫法：乙型肝炎病毒e抗体诊断试剂盒（酶联免疫法）；癌胚抗原定量测定试剂盒(免疫荧光法)化学发光法：人生长激素（GH）定量测定试剂盒增强化学发光免疫分析法：巨细胞病毒抗体检测试剂盒时间分辨荧光法：游离甲状腺素（FT4）定量测定试剂盒电化学发光法：甲型肝炎病毒抗体诊断试剂盒微粒子酶免法：丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒现在是4页\一共有74页\编辑于星期日酶联免疫试剂抗原抗体之间的特异反应与酶的高效催化反应有机的结合。固相样品放大抗原抗体抗抗体-酶-底物-显色抗体抗原抗体-酶-底物-显色现在是5页\一共有74页\编辑于星期日酶标板样品中HCV抗原HRP酶标记抗HCV抗体抗HCV抗体HRP酶单克隆抗体丙肝抗原ELISA试剂现在是6页\一共有74页\编辑于星期日HIV-1p24抗原检测试剂的原理现在是7页\一共有74页\编辑于星期日

1双抗体夹心法应用HBsAg,HBeAg,HBcAg,pres1,pres2

2双抗原夹心法应用抗HBs，抗HIV

3竞争法 应用抗HBc,抗pres24中和抑制法应用抗Hbe5捕获法应用抗HBcIgM6间接法应用抗HCV,抗HEV,几种主要的酶联免疫方法模式现在是8页\一共有74页\编辑于星期日发光免疫试剂1.抗原抗体反应的基本原理及方法模式与酶联免疫试剂完全相同2.检测光信号，其光信号可因酶催化而产生也可用其他方法使其产生现在是9页\一共有74页\编辑于星期日酶促化学发光以酶为催化剂，通过氧化反应，使底物发光。过氧化物酶（HRP)促发光，底物——鲁米诺碱性磷酸酶(AP)促发光，底物——螺旋金刚烷环氧化物苯磷酸酯（AMPPD)现在是10页\一共有74页\编辑于星期日鲁米诺及其衍生物的增敏化学发光系统（HRP）商业化产品中常见的化学发光系统（一）现在是11页\一共有74页\编辑于星期日ROHRBOHOHROHSN鲁米诺及其衍生物的增强剂（Enhancer）现在是12页\一共有74页\编辑于星期日AMPPD及其衍生物的化学发光系统（AP）光子(477nm)APOOOCH3OPO32-O-OOOCH3+*OO-OOCH3商业化产品中常见的化学发光系统（二）现在是13页\一共有74页\编辑于星期日非酶促化学发光及电化学发光非酶促化学发光：以吖啶酯、过氧化氢为发光系统，不需要酶的催化。仪器成本高，技术复杂，尚未国产化（Abbott)电化学发光：氧化反应是通过电极上的电化学反应产生，标记物为三氯联吡啶钌。仪器成本高，技术复杂，尚未国产化。（Roche）现在是14页\一共有74页\编辑于星期日CH3C=OORN+OH-H+H2O2+H2O+ROH光子+CO2+CH3C=OORNHOCH3C=OORNHOOCH3ONCH3ONC=OO商业化产品中常见的化学发光系统（三）吖啶酯化学发光系统/非酶促现在是15页\一共有74页\编辑于星期日e-TPATPATPA+H+e-e-PlatinumelectrodeMagnet发光Ru2+基态Ru2+激发态Ru3+++电化学发光法原理现在是16页\一共有74页\编辑于星期日在电场的作用下，三丙胺（TPA）被氧化成阳离子自由基TPA+，后者很不稳定，可自发失去一个质子（H+），形成自由基TPA，这是一种很强的还原剂，可将一个电子给三价的三联吡啶钌衍生物[Ru(bpy)3]3+，使其形成激发态的[Ru(bpy)3]2+，而TPA自身被氧化成二丙胺和丙醛。激发态的[Ru(bpy)3]2+通过荧光机制衰减，发射出一个波长620nm的光子，重新生成基态的[Ru(bpy)3]2+。该过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，光电倍增管检测光强度，光强度与[Ru(bpy)3]2+的浓度呈线性关系，故可测出待测抗原的含量。现在是17页\一共有74页\编辑于星期日时间分辨荧光将三价稀土离子铕（Eu）等通过络合物标记到抗原或抗体分子上，通过检测铕等的荧光实现免疫分析

应注意环境及样品中同类元素导致的本底干扰，特别是北方地区现在是18页\一共有74页\编辑于星期日时间分辨荧光增强原理现在是19页\一共有74页\编辑于星期日发光信号检测光敏二极管、光敏电池、光电偶合器（CCD）结构简单、性能稳定但灵敏度低、线性范围较窄。主要特点原理：光信号光电转换器件电压或电流信号放大现在是20页\一共有74页\编辑于星期日单光子计数器是目前高灵敏度发光分析仪的核心部件光电倍增管高压高速放大器高速比较器高速分频器发光样品产生光子激发光阴极产生光电子在阳极上形成较强信号脉冲信号相对发光单位数字脉冲(RLU)在各打拿极之间得到能量和数目的倍增现在是21页\一共有74页\编辑于星期日流动池检测方式示意图检测器检测池负压泵废液四通阀冲洗液样品管计量泵干燥空气原位进样泵氧化剂优点：结构简单，运行成本低缺点：明显的易产生交叉污染，工作效率受限。现在是22页\一共有74页\编辑于星期日常见进口发光免疫分析产品生产厂商产品技术类型反应体系产品特点仪器类型ROCHE电化学发光、磁微珠肿瘤标志物E170ABBOTT化学发光、磁微珠碱性磷酸酶、吖啶酯乙肝项目I2000Bayer化学发光、磁微珠吖啶酯内分泌项目ADVIACentaurBeckman化学发光、磁微珠碱性磷酸酶UniCelDxI800DPC化学发光、塑料球碱性磷酸酶药物分析Immuline2000强生化学发光辣根过氧化物酶丙肝生物梅里埃化学发光碱性磷酸酶HIVPE(Wallac)时间分辨荧光现在是23页\一共有74页\编辑于星期日（第二类）

胶体金（硒、乳胶）类试剂胶体金法：梅毒抗体-乙肝表面抗原诊断试剂盒胶体硒法：HIV(1+2+0)试剂盒现在是24页\一共有74页\编辑于星期日胶体金试剂原理硝酸纤维膜加样

检测区对照区(HBsAg)-----------------------------玻璃纤维膜-------------------

抗HBs羊抗鼠鼠抗HBs现在是25页\一共有74页\编辑于星期日胶体金免疫层析法反应示意图吸样垫胶体金垫包被T线包被C线上样垫NC膜支撑物现在是26页\一共有74页\编辑于星期日HIV胶体金类快速诊断试剂检测结果现在是27页\一共有74页\编辑于星期日第三类）

免疫印迹试剂免疫印迹试剂盒:风湿病自身抗体检测试剂盒（免疫印迹法）现在是28页\一共有74页\编辑于星期日免疫印迹法示意图现在是29页\一共有74页\编辑于星期日

用于RR样品的HCV抗体确认独特的IgG（I/II）及hSOD内部质控设计用于检测的固相化抗原

重组表达蛋白：c33c，NS5合成肽抗原：c100p（5-1-1p），c22pIgGcontrolIIIgGcontrolIIDc100(p)5-1-1(p)c33cc22(p)hSODNS5RIBA®HCV3.0现在是30页\一共有74页\编辑于星期日c100-3NS5c33cc22-3SOD3+Control1+ControlPosINDPosNegINDRIBA模式图现在是31页\一共有74页\编辑于星期日3+controlband(serumaddition)CapsidNS3-1NS3-2NS4NS51+controlband(reagentaddition)

GLDHCVBLOT3.0现在是32页\一共有74页\编辑于星期日（第四类）

蛋白芯片（微阵列）类试剂蛋白芯片（微阵列）：丙型肝炎病毒抗体检测试剂盒（蛋白芯片法）；多肿瘤标志物检测试剂盒（蛋白芯片法）现在是33页\一共有74页\编辑于星期日每张芯片检测48个样本，每个样本同时检测5个指标，

丙型肝炎病毒分片断抗体检测蛋白芯片NS4NS4NS3NS3CC总总NS5NS5（C代表核心,NS3,NS4,NS5代表非结构区抗原）阳性对照阴性对照空白对照现在是34页\一共有74页\编辑于星期日（第五类）

单抗类试剂血型定型类试剂：血型定型试剂盒（单克隆抗体）免疫组化：ImmuChem免疫组化试剂盒（单抗）免疫比浊：血清载脂蛋白A1免疫比浊试剂盒乳胶凝集：D-dimer二聚体乳胶凝集试剂盒现在是35页\一共有74页\编辑于星期日（第六类）

多抗类试剂血型定型类试剂：血型定型试剂盒（人血清/马血清）免疫组化：癌胚抗原检测试剂盒（多抗）免疫比浊：β-微球蛋白测定试剂盒（免疫比浊法）乳胶凝集：沙门氏菌乳胶凝集试剂盒现在是36页\一共有74页\编辑于星期日抗原抗原：指进入有免疫活性的组织（宿主）而引发免疫应答的物质。或虽不能引发免疫，但可以同抗体结合的物质。蛋白质，多糖，核酸，糖脂，青霉素全抗原性具有多个抗原决定族现在是37页\一共有74页\编辑于星期日抗体宿主对体内存在的外来分子，微生物或其他因子的应答而产生的蛋白质（免疫球蛋白，丙种球蛋白）根据抗体性质：多克隆抗体，单克隆抗体根据抗体分子结构：IgA,D,E,G,M现在是38页\一共有74页\编辑于星期日IgGIgM抗体模式图现在是39页\一共有74页\编辑于星期日单克隆抗体由一株淋巴细胞产生，针对一种抗原决定族抗原免疫小鼠-取脾脏-与瘤细胞融合-克隆筛选-单克隆抗体细胞株扩增细胞-注射入小鼠腹腔-采腹水-纯化抗体现在是40页\一共有74页\编辑于星期日流程杂交瘤技术现在是41页\一共有74页\编辑于星期日现在是42页\一共有74页\编辑于星期日多克隆抗体针对多个抗原决定族抗原免疫动物-采集动物血清纯化抗体现在是43页\一共有74页\编辑于星期日

血型抗原/RBC抗体/外周血

AAanti-B

BBanti-A

O noneanti-A&anti-B

ABA&BnoneABO血型测定现在是44页\一共有74页\编辑于星期日空气柱微柱玻璃珠反应舱试剂现在是45页\一共有74页\编辑于星期日结果判读现在是46页\一共有74页\编辑于星期日（第七类）

诊断血清（菌液）诊断血清：侵袭性大肠埃希氏菌诊断血清；志贺氏菌属四种混合多价血清诊断菌液：伤寒沙门菌菌体（O）抗原、鞭毛（H）抗原诊断菌液现在是47页\一共有74页\编辑于星期日诊断血清工艺流程采集血清收集抗体（离心机）效价检测等分装、冻干免疫动物免疫抗原制备分离血清灭活处理吸收非特异性抗体吸收用抗原制备现在是48页\一共有74页\编辑于星期日诊断菌液工艺流程效价检测等分装、包装细菌培养灭活处理现在是49页\一共有74页\编辑于星期日（第八类）

血球凝集类试剂抗体致敏血球：破伤风抗体诊断试剂（血凝法）；白喉抗体诊断试剂（血凝法）现在是50页\一共有74页\编辑于星期日间接凝集试验示意图+

用可溶性抗原致敏红细胞或其它颗粒性介质，可以用来测定细菌、病毒等微生物的抗体。现在是51页\一共有74页\编辑于星期日间接血凝试剂基本生产工艺流程醛化红细胞的制备致敏抗原或抗体的制备红细胞的采集致敏抗原（或抗体）的制备红细胞的醛化（洗涤、离心、醛化）致敏抗原（或抗体）的检定对照血球的制备红细胞的致敏（鞣化、致敏、封闭）稀释液的制备半成品检定分装、冻干、包装成品检定现在是52页\一共有74页\编辑于星期日（第九类）

核酸扩增类试剂荧光PCR：乙型肝炎病毒核酸定量测定试剂盒PCR-ELISA：结核分支杆菌检测试剂盒（核酸扩增酶联免疫法）PCR-毛细管电泳：性染色体多倍体（分型与突变）检测试剂盒；PCR-电泳：α-地中海贫血基因诊断试剂盒（gap-PCR法）转录介导扩增（TMA）：沙眼衣原体与结核分枝杆菌检测试剂盒现在是53页\一共有74页\编辑于星期日PCR基本原理示意图现在是54页\一共有74页\编辑于星期日PCR过氧化物酶联物96孔酶标法加样分析观察数据PCR产物的检测

96孔酶标法

现在是55页\一共有74页\编辑于星期日Taqman法的原理Polymerization5‘5‘3‘3‘5‘ForwardPrimer5‘ReversePrimerStrandDisplacement5‘5‘3‘3‘5‘5‘P3‘RQRQProbeP3‘RQCleavage5‘5‘3‘3‘5‘5‘P3‘RQPolymerizationCompleted5‘5‘3‘3‘5‘5‘P3‘RQReporterQuencher现在是56页\一共有74页\编辑于星期日ContinuouscyclingDegradeRNAwithRNaseHactivityandprimer2hybridizesChironProcleixHIV-1/HCVAssay

Step2:Transcription-MediatedAmplificationRNAtranscriptionbyRNApolymeraseRNAamplificationproductIsothermalincubation>109foldamplificationinonehourcDNAsynthesisbyreversetranscriptaseDNAsynthesisbyreversetranscriptaseTargetRNAPromoter-primerhybridizes现在是57页\一共有74页\编辑于星期日（第十类）

基因芯片（微阵列）类试剂基因芯片（微阵列）：α-地中海贫血基因芯片诊断试剂盒PCR-杂交：人乳头瘤病毒基因分型检测试剂盒（PCR-反向杂交法）现在是58页\一共有74页\编辑于星期日基因芯片法联合检测HBVDNA－HCVRNA现在是59页\一共有74页\编辑于星期日现在是60页\一共有74页\编辑于星期日现在是61页\一共有74页\编辑于星期日

乙型肝炎病毒基因多态性检测芯片芯片外观及点样区示意图如上：点阵信息：点阵信息：A1:1896野生型B1:1896突变型A2:1814野生型B2:1814突变型A3:1762野生型B3:1762突变型A4:1764野生型B4:1764突变型A5:P区528位野生型B5:P区528位突变型A6:P区552位野生型B6:P区552位突变型A7:P区552位突变型B7：阴性参照Ⅱ

现在是62页\一共有74页\编辑于星期日检测结果图

1762/64位点联合变异现在是63页\一共有74页\编辑于星期日丙型肝炎病毒基因分型检测

芯片示意图

Ⅰ：阳性内参照I；Ⅱ：阴性内参照I；Ⅲ：阳性内参照II；Ⅳ：阴性内参照II。

A1:I型B1:I型A2:1a/2aB2:1a/1bA3:1bB3:1bA4:II型B4:II型A5:2aB5:2aA6:3a/3bB6:3bA7:3bB7:6aA8：阴性A8：阴性

现在是64页\一共有74页\编辑于星期日丙型肝炎病毒基因分型芯片示意图现在是65页\一共有74页\编辑于星期日（第十一类）

探针放大（原位杂交）类试剂bDNA类：HIV-1bDNA检测试剂盒；mRNA检测试剂盒(生物素原位杂交法)现在是66页\一共有74页\编辑于星期日探针放大类试剂--支链DNA技术病毒的RNA释放后加入微孔板中——板孔中包被有可与病毒特异结合的一系列靶探针（TargetProbe），另一系列靶探针的一端可标记在游离的病毒核酸链上，另一端可与bDNA结合——bDNA信号放大——加入酶标记物对结合的bDNA进行标记——经过清洗后加入底物进行反应，测定反应强度。现在是67页\一共有74页\编辑于星期日（第十二类）

普通生化类试剂（十万级要求）（包括酶类化学试剂、凝血试剂类等试剂）酶类化学试剂:丙氨酸氨基转移酶（ALT）测定试剂盒；碱性磷酸酶（ALP）测定试剂盒凝血试剂:凝血酶原时间（PT）测定试剂盒；组织纤溶酶原激活物（t-PT）测定试剂盒现在是68页\一共有74页\编辑于星期日普通生化类试