中药质量评价

中药质量评价第1页，共115页，2023年，2月20日，星期三第2讲中药的质量评价第2页，共115页，2023年，2月20日，星期三中药自身的特点三多：有效成分多，未知成分多，杂质多含量差异大，作用十分复杂一药多能：如山楂多种中药含有相同成分第3页，共115页，2023年，2月20日，星期三现行中药质量控制模式借鉴化学药品的质量控制模式，靠天然药物化学的发展。建立以测定某单一成分为目标的分析方法和既定性又定量的质量标准。单一化学成分分析的观点，与中医理论的“整体”观相悖。化学药──单一成分，单一靶点中药──多成分，多靶点第4页，共115页，2023年，2月20日，星期三中药质量标准构建要素应能体现中医药理论的特性应能体现中药的物质基础是多组分化合物群应能体现中医临床用药的特性逐步由指标性成分向活性成分的测定过渡，由单一成分向多个成分测定和整体控制模式的转化。第5页，共115页，2023年，2月20日，星期三中药质量标准的特点

权威性科学性进展性指导性复杂性第6页，共115页，2023年，2月20日，星期三

1.权威性以国家药品标准为准，具有权威性。

2.科学性方法的确定，指标的选择与规格的制定根据具体药物而定，通过全面的考察和实验研究，在获得充分的科学依据的基础上起草出来。同一药材在单独及不同配方的制剂中，建立质量指标时方法不一定均能相通适用。第7页，共115页，2023年，2月20日，星期三3.进展性对某个药品在一定阶段认识和研究的阶段性小结;随着生产技术水平提高和测试手段的改进，药品质量标准必须不断修订和完善新药研究中药品质量标准的制订：临床试验用药品标准---生产---二年的试行期---正式的药品标准第8页，共115页，2023年，2月20日，星期三品种类别1953版--2010年版我国药典收载的中药材及其成方制剂品种类别：涉及植物药、动物药、矿物药和少数民族药材，还增收了中草药的提取物、有效成分及其制剂（片剂、注射剂、冲剂、合剂、酊剂等）第9页，共115页，2023年，2月20日，星期三药典一部收载品种数

年版中药材中药成方制剂合计

195365461111963446197643197788227011521985506207713199050927578419955223989202000534458992第10页，共115页，2023年，2月20日，星期三《中国药典》2000年版一部收载992种中药材、中成药、由天然药物提取的纯品和油脂。

第11页，共115页，2023年，2月20日，星期三《中国药典》2005年版分三部一部包括中药材、中药饮片、中药提取物、中药成方及单味制剂二部包括化学药、抗生素、放射性药品、辅料等三部为生物制品“中国生物制品规程”第12页，共115页，2023年，2月20日，星期三2005年版《中国药典》(一部)正文部分由原来的“药材及其制品”和“成方及单味制剂”两大部分改为“药材及饮片”、“植物油脂和提取物”、“成方制剂及单味制剂”3部分药材及饮片551种，其中修订207种，新增33种；植物油脂和提取物31种；成方制剂和单味制剂564种，新增116种；合计共收载中药品种1146种第13页，共115页，2023年，2月20日，星期三2010年版《中国药典》(一部)正文部分为“药材及饮片”、“植物油脂和提取物”、“成方制剂及单味制剂”3部分药材及饮片616种，其中新增65种；植物油脂和提取物47种，其中新增16种；成方制剂和单味制剂1502种，其中新增938种；合计共收载中药品种2165种，其中共新增1019种，修订634种第14页，共115页，2023年，2月20日，星期三品质鉴定品质鉴定方法：逐版提高、不断完善的原则，显微鉴定、理化鉴别、含量测定、浸出物测定、挥发油测定等。薄层色谱TLC鉴别始载于1985年版药典，如人参--人参皂苷Rg1、Rbl，大黄--葸醌苷元。栀子金花丸:由八味药组成，

1985年版:显微鉴别、试管反应和微量升华鉴别

1990年版:增加三项薄层鉴别--栀子、黄芩、大黄

1995年版:增订黄连薄层鉴别。

2010年版：增加黄柏薄层鉴别第15页，共115页，2023年，2月20日，星期三含量测定分析方法越来越先进，除了重量法、容量法外，分光光度法、薄层扫描法普遍应用于中药有效成分质量控制，气相色谱法、高效液相色谱法应用增多。1990年版药典:首次引用仪器方法，如HPLC、GC和TLCS等----化橘红等5种、斑蝥等2种及山茱萸等2种的含量测定。蟾酥:主要含强心甾体化合物，1985年版始载用氯仿提取后测定重量的方法，1995年版改用分光光度法(吸收系数法)，2000年版起改用HPLC。第16页，共115页，2023年，2月20日，星期三4.指导性药品质量标准不单是为了控制最终产品的质量水平以保证用药安全有效，而是在药品研制的各个环节及形成产品后的生产、使用、流通与贮藏、保管等各领域发挥其指导作用。第17页，共115页，2023年，2月20日，星期三中药新药质量标准制订的条件质量标准的制订必须具备以下前提:中药制剂的处方组成固定不变；所用原、辅料（药材、饮片、提取物等）质量稳定；制剂的制备工艺稳定。

第18页，共115页，2023年，2月20日，星期三

1.处方组成固定处方药味及份量是制订质量标准的依据，直接影响评价指标的选定和限度的制订。在具体研究和制订一个中药的质量标准前，必须要求将处方毫无保留、确实无误地告知质量标准研究者，并在不再改动的前提下，才可开始进行有关的实验设计和研究。第19页，共115页，2023年，2月20日，星期三2.原料稳定原料药材除药用部位、产地、采收和加工炮制等方面涉及质量优劣外，特别要注意的是药材的真伪与地区习惯用药的鉴别与应用。在研究新药和制订新药质量标准时，应密切注意处方中各味药材系指何品种，确定后必须取材稳定，才能保证临床试验取得应有的疗效。在批准生产后，更应注意药材品种来源，以确保上市药品的用药安全和有效。第20页，共115页，2023年，2月20日，星期三3.工艺稳定

进行制备工艺条件的研究，优选出最佳工艺流程，应达到适合中试生产规模、工艺条件稳定后，才可正式进行质量标准研究如实验设计及展开具体研究工作第21页，共115页，2023年，2月20日，星期三中药质量标准制订的内容

中药质量标准分为中药材质量标准和中药制剂质量标准两部分。其中，每一部分的内容除正文外，还应附上质量标准起草说明。第22页，共115页，2023年，2月20日，星期三中药材质量标准

1.内容名称、汉语拼音、药材拉丁名、来源（基原、药用部位、采收加工）、性状、鉴别、检查、浸出物测定、含量测定、炮制、功能与主治、用法与用量、注意、贮藏等项内容。第23页，共115页，2023年，2月20日，星期三2.有关技术要求（1）名称、汉语拼音、药材拉丁名（2）来源（3）性状系指药材的外形、颜色、质地、表面特征、断面及嗅味等的描述，除必须鲜用的按鲜品描述外，一般以完整的干燥药材为主，易破碎的药材还须描述破碎部分。

第24页，共115页，2023年，2月20日，星期三（4）鉴别包括经验鉴别，显微鉴别（组织切片、粉末或表面制片、显微化学），一般理化鉴别和色谱（或光谱）鉴别，以及其他方法的鉴别。（5）检查包括杂质、水分、灰分、酸不溶性灰分、重金属、砷盐、农药残留量及其他必要的检查项目。第25页，共115页，2023年，2月20日，星期三鉴别法选择的基本原则

1.方法具专属性、灵敏性，便于推广。

2.化学法与仪器法相结合。每种药品一般选用2~4种方法进行鉴别试验。

3.尽可能采用药典中收载的方法。第26页，共115页，2023年，2月20日，星期三（6）浸出物测定（7）含量测定凡已知有效成分、毒性成分及能反映药材内在质量的指标成分均应建立含量测定，包括药材的预处理（分离提取）、供试液配制、测定方法及含量限（幅）度。含量限（幅）度指标应根据实测数据制订。第27页，共115页，2023年，2月20日，星期三中药质量控制的方法

第28页，共115页，2023年，2月20日，星期三中药的常规检查

1、杂质检查:

同一物种不同的部位；来源与规定不同的物质，如沙石、泥块等。第29页，共115页，2023年，2月20日，星期三2.浸出物及总固体的测定

对于有效成分尚不明确或尚无准确定量方法的药材，可分别用水或有机溶剂（乙醇、甲醇、乙醚等）使可溶性成分浸出，来表示药材的品质。中药材的流浸膏则常用测定总固体来反映其质量。供测定的中药样品须粉碎，通过二号筛，并混合均匀。第30页，共115页，2023年，2月20日，星期三水溶性浸出物测定：冷浸和热浸①冷浸法：取样品粉末，加水冷浸24小时，过滤，取适量滤液置蒸发皿中，水浴蒸干后称量，计算样品中水溶性浸出物的百分数。②热浸法：样品粉末加水静置1小时后，热回流1小时第31页，共115页，2023年，2月20日，星期三醇溶性浸出物测定：用不同浓度的乙醇和甲醇为溶剂。总固体测定：取流浸膏适量置蒸发皿中，水浴蒸干后称量，计算样品中总固体含量。第32页，共115页，2023年，2月20日，星期三3.水分测定法药材通常含有一定量的水分，但水分过多，尤其是根、根茎、叶、花、果（肉果）等，在贮藏、运输等过程中常会引起霉变或化学成分变化，因此控制一定的含水量是保证药材质量的一个方面。药典方法：甲苯法和烘干法甲苯法适用于含挥发性成分的药材，烘干法适用于不含挥发性成分或少含该类成分的药材。减压干燥法含挥发性的成分的贵重样品气相色谱法无水乙醇做提取溶剂第33页，共115页，2023年，2月20日，星期三甲苯法：取样品置于圆底烧瓶中，加入适量甲苯，加热使甲苯沸腾，并和药材中的水分一并蒸馏入水分测定管中，待水分完全馏出后，使水分与甲苯完全分离，检读水量，并换算成供试品中含有水分的百分数。烘干法：取样品适量，平铺于恒重的扁形称量瓶中，100105℃干燥5小时并至恒重，根据减失的重量，计算供试品中含水分的百分数。第34页，共115页，2023年，2月20日，星期三4干燥失重测定法干燥失重指药物在规定条件下经干燥后所减失的重量，以百分率表示。---控制药物中的水分\其他挥发性物质常压恒温干燥法减压干燥法

第35页，共115页，2023年，2月20日，星期三常压恒温干燥法

适用于受热较稳定的药物将供试品置相同条件下已干燥至恒重的扁形称量瓶内，精密称定，于烘箱内在规定温度下干燥至恒重，根据减失的重量和取样量计算供试品的干燥失重。“恒重”---指供试品连续两次干燥或炽灼后的重量差异在0.3mg以下。第36页，共115页，2023年，2月20日，星期三5灰分测定法总灰分测定药材灰化后的总灰分主要是无挥发性的无机盐类，如总灰分超过限量，则表明该药材可能掺有无机物质。方法：将样品粉末置于炽灼恒重的坩埚中，称量后加热至炭化，升高温度至完全灰化并称重，根据残渣重量，计算样品中含灰分的百分数。第37页，共115页，2023年，2月20日，星期三酸不溶性灰分测定酸不溶性灰分：用稀酸溶解去除药材本身所含无机盐（钙盐），而剩余的残渣应为来自泥沙的硅酸盐类方法：取总灰分测定所得灰分，加入适量稀盐酸加热，残渣用水洗于无灰滤纸上，并洗涤至洗液无氯化物反应，然后将残渣及滤纸放入坩埚中，灰化至恒重，根据残渣重量，计算样品中酸不溶性灰分的百分数。2005版药典新增：水分178个品种，灰分135个品种，酸不溶性灰分130个品种。第38页，共115页，2023年，2月20日，星期三甲法乙法挥发油测定器7、挥发油测定第39页，共115页，2023年，2月20日，星期三(1)农药残留量测定有机氯、有机磷、拟除虫菊酯(2)黄曲霉素的检查(3)重金属检查要检查重金属、砷盐等限量。(4)内源性有害成分控制，如防己毒素、马兜铃酸等有害物质的测定/中药限量检查第40页，共115页，2023年，2月20日，星期三农药残留量----因使用农药而残留在人类、动植物体内或土壤中各种物质的总量，包括在毒理学上有意义的降解转化产物、代谢物、反应产物和杂质等任何特定的衍生物。第41页，共115页，2023年，2月20日，星期三常用农药的分类有机氯类：六六六、DDT、五氯硝基苯；有机磷类：磷酸酯类（敌敌畏、敌百虫）、硫代磷酸酯类（对硫磷、马拉硫磷）、磷酰胺及硫代磷酰胺（甲胺磷）；氨基甲酸酯类：萘基氨基甲酸酯类（西维因）、杂环甲基氨基甲酸酯类（呋喃丹）、涕灭威等；拟除虫菊酯类：模拟天然除虫菊素，由人工合成的广谱杀虫剂，常用的有丙烯菊酯、氯菊酯、氯戊菊酯

第42页，共115页，2023年，2月20日，星期三主要污染途径：1、在栽培过程中为防治虫害2、在仓储过程中为了防虫蛀3、在土壤中长期残留的农药第43页，共115页，2023年，2月20日，星期三特点:中药材中农药残留污染具有普遍性农药残留量的分布：种植药材；野生药材；中成药；药材炮制不易发生急性中毒，慢性蓄积不可忽视

第44页，共115页，2023年，2月20日，星期三（二）残留农药的提取索氏提取法超声法固相萃取法(SPE)超临界萃取法(SFE)微波辅助提取法(MAE)

第45页，共115页，2023年，2月20日，星期三提取溶剂的选择(1)纯度：农药残留分析中所应用的溶剂较特殊，必须经过处理并在色谱条件下检验不含杂质峰(重蒸法)。(2)极性：相似相溶原理；极性小的农药应选择低极性溶剂提取，如666、DDT等应选用石油醚、正己烷等溶剂；极性较强的农药，如有机磷、拟除虫菊酯类农药应选择二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮等极性较大的溶剂第46页，共115页，2023年，2月20日，星期三附录IXQ有机氯类农药残留量测定法色谱条件与系统适用性试验

SE-54（30mx0.32mmx0.25um）或DB-1701，63Ni-ECD电子捕获检测器。理论塔板数按α-BHC峰计算，不低于106，分离度应大于1.5。混合对照品溶液

BHC（α,β,γ,δ-BHC），DDT（PP’-DDE、PP’-DDD、OP’-DDT、PP’-DDT），五氯硝基苯（PCNB）按外标法计算9种农药残留量第47页，共115页，2023年，2月20日，星期三*部分农药的残留限量参考值（μg/g）DDT（2.0）、六六六（2.0）、DDV（2.0）、百菌清（0.5）、乐果（2.0）、甲胺磷（1.0）、久效磷（0.2）*我国规定粮食作物的残留限量BHC、DDT均为0.3μg/g*联合国粮食组织规定的加工粮食中的残留限量

BHC：0.3μg/g，DDT：0.2μg/g第48页，共115页，2023年，2月20日，星期三重金属元素的毒性主要是由于它们进入体内并与体内酶蛋白上的SH和S=S键牢固结合，从而使蛋白质变性，酶失去活性，组织细胞出现结构和功能上的损害。铅主要损害神经系统、造血系统、消化系统；汞主要损害肾脏，造成肾功能衰竭；砷主要是扩张毛细血管，使腹腔脏器严重充血，引起肝、肾、心等实质器官的损害第49页，共115页，2023年，2月20日，星期三主要污染途径：1、中药材---来源于栽培地的土壤、空气和水2、中药制剂---来源于中药材，辅料，提取溶媒，工艺设备，接触器皿等3、矿物药中含有重金属第50页，共115页，2023年，2月20日，星期三比色法中华人民共和国药典附录IXE需进行有机破坏：干法破坏和湿法破坏干法破坏：将供试品置坩埚中，先缓缓加热至炭化，再在500-600℃炽灼至完全灰化，加酸处理用硫代乙酰胺法检查湿法破坏：加入强酸（硫酸-硝酸混合液）及其盐加热破坏第51页，共115页，2023年，2月20日，星期三

紫外分光光度法利用重金属元素与试剂反应后显色在紫外光下有吸收的原理来测定重金属的含量。原子吸收分光光度法（atomicabsorptionspectrophotometry，AAS）

分为冷原子吸收法和石墨炉原子吸收法电感耦合等离子体质谱法（inductivelycoupledplasma-massspectrometry，ICP-MS）第52页，共115页，2023年，2月20日，星期三

黄曲霉毒素黄曲霉毒素（AFT）是一类二氢呋喃香豆素的衍生物，目前已分离鉴定出12种,包括B1,B2,G1,G2,M1,M2,P1,Q,H1,GM,B2a和毒醇

。黄曲霉毒素是主要由黄曲霉(aspergillusflavus)、寄生曲霉(a.parasiticus)产生的次生代谢产物

第53页，共115页，2023年，2月20日，星期三难溶于水,易溶于甲醇,丙酮和氯仿等有机溶剂,但不溶于石油醚,己烷和乙醚中一般在中性溶液中较稳定,在强酸性溶液中稍有分解,在pH9-10的强碱溶液中分解迅速纯品为无色结晶耐高温1类致癌物，剧毒物质，对人及动物肝脏组织有破坏作用第54页，共115页，2023年，2月20日，星期三附录IXV黄曲霉毒素测定法高效液相色谱法测定适用于药材、饮片、制剂以黄曲霉毒素B1,B2,G1,G2总量计第55页，共115页，2023年，2月20日，星期三常见有毒中药—内源性毒性成分控制Cardiovasculartoxicity心血管毒性:

Ephedra(麻黄),Toadvenom(蟾酥),Aconite(乌头),LiushenWan(六神丸),etc.Hepatotoxicity肝毒性:Triptergiumwilfordii(雷公藤),Aconitumkusnezoffii(草乌),Senecioscandens(千里光),Cremastraappendiculate(山慈姑),Crotalariasessiliflora(农吉利)etc.Nephrotoxicity肾毒性:Aristolochiamanshuriensis(关木通),Triptergiumhypoglaucam(昆明山海棠),Crotontiglium(巴豆),Xanthiumsibiricum(苍耳子),Aristolichiafangchi(防己)etc.Carcinogenictoxicity致癌:

Asarumheterotropoides(细辛),Foeniculumvulagre(茴香),Myristicafragrans

(肉豆蔻),Acorustatarinowii(石菖蒲),AllergicReactions过敏反应:mainlyTCMInjections(中药注射液)第56页，共115页，2023年，2月20日，星期三

吡咯里西啶生物碱(pyrrolizidinealkaloids，PAs)是一类从植物中得到的天然有毒物质，可引起肝细胞出血性坏死、肝巨细胞症及静脉闭塞症等而引起广泛关注。

目前已发现600多个不同结构的PAs，存在于世界各地的6000多种有花植物中，主要分布于菊科、紫草科、豆科、兰科，少量分布于厚壳科、玄参科、夹竹桃科、毛茛科、百合科等。

第57页，共115页，2023年，2月20日，星期三

马兜铃酸（aristolochicacid，AA）是一类含硝基取代的菲类化合物，主要来源于马兜铃科植物第58页，共115页，2023年，2月20日，星期三中药质量的定量分析1.以化学成分为对象有效成分---首选总成分“指标成分”第59页，共115页，2023年，2月20日，星期三2.化学成分的定量分析方法

(1)含量测定方法选择经典分析方法(容量法、重量法)分光光度法色谱法气相色谱法、高效液相色谱法、薄层—分光光度法、高效毛细管电泳法等。第60页，共115页，2023年，2月20日，星期三经典方法在中药质量控制中的应用重量法为经典的分析方法之一，是用分析天平直接称量被测成分和反应物；准确度较高，步骤多，操作繁琐费时；重量法—用于浸出物测定、水分和灰分的测定、某些生物碱成分和鞣质成分的含量测定。常用：沉淀重量法、提取重量法和挥发重量法。第61页，共115页，2023年，2月20日，星期三提取重量法根据待测成分的特性，利用适当溶剂将待测成分从样品中提取或萃取出来，再经适当纯化，蒸干溶剂，将提取物干燥至恒重，根据提取物的重量计算待测成分的百分含量的方法，称为提取重量法。该法计算出的含量一般是某类总成分的含量第62页，共115页，2023年，2月20日，星期三示例：姜流浸膏的含量测定姜流浸膏是干姜粗粉经乙醇浸渍、渗漉、浓缩制成，中华人民共和国药典1995年版一部规定其含醚溶性物质不得少于4.5％。方法：精密量取本品20ml，置水浴上蒸去乙醇，放冷，加乙醚50ml，用玻璃棒搅拌，使醚溶性物质溶解，倾取乙醚液，滤过，残液继续用乙醚提取23次，每次50ml，滤过，合并乙醚液，低温回收乙醚，残渣置硫酸干燥器中干燥24h，精密称定，即得样品中含有醚溶性物质的重量。第63页，共115页，2023年，2月20日，星期三容量法容量分析是根据一种已知浓度的试剂溶液标准溶液和被测成分完全作用时所消耗的体积来计算被测成分含量的方法。中药有效成分分析中常用的滴定法有酸碱滴定法和两相滴定法。第64页，共115页，2023年，2月20日，星期三酸碱滴定法---生物碱类成分多采用剩余滴定法，即用一定量已知浓度的酸使与生物碱中和生成盐，剩余的酸再被已知浓度的碱滴定，根据实际消耗的酸量和生物碱之间的定量关系计算出百分含量。酸碱滴定法测定的结果是总生物碱的含量。方法：精密称取一定量的中药粉末，经提取、净化后，在水浴上蒸去溶剂，得到总生物碱。加入一定量已知浓度的硫酸，使之充分溶解，加甲基红指示剂2滴，再以已知浓度的氢氧化钠滴定剩余的硫酸，根据实际消耗的硫酸量计算出总生物碱的含量。第65页，共115页，2023年，2月20日，星期三(2)含量测定方法考察提取条件的选定、分离、纯化测定条件的选择、线性关系的考察测定方法的稳定性试验精密度、重复性试验回收率试验样品测定第66页，共115页，2023年，2月20日，星期三(3)含量限(幅)度的制定含量较低但仍可药用者取为下限含量限度的制定应有足够的，具代表性的样品数据为基础。毒剧药必须规定幅度：马钱子中士的宁1.20%-2.20%。第67页，共115页，2023年，2月20日，星期三含量测定起草说明阐明含量测定方法的原理；确定该方法的方法学考察资料（包括方法的重现性和稳定性试验，回收率试验空白实验等）；阐明确定该含量限（幅）度的意义及依据（至少应有10批样品20个数据）。其他经过实验而未选用含量测定方法的理由及其全部实验资料。第68页，共115页，2023年，2月20日，星期三3中药化学成分多成分监测及指纹图谱

中药化学成分指纹图谱系指中药经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标定该中药特性的共有化学成分峰的图谱。指纹图谱全面反映了中药所含内在化学成分的种类与数量，更加有效地体现了中药成分的复杂性，从而能更好地评价中药的内在质量。

指纹图谱必须同时具有系统性、特征性、重现性。

第69页，共115页，2023年，2月20日，星期三贝母药材TLC指纹图谱第70页，共115页，2023年，2月20日，星期三第71页，共115页，2023年，2月20日，星期三S1S2S3S4S5S6S7S8S9S10RS11.0000.9760.9660.9830.9550.9600.9770.9740.9890.9600.981S20.9761.0000.9380.9690.9430.9540.9850.9720.9750.9810.979S30.9660.9381.0000.9750.9830.9750.9610.9750.9740.9480.979S40.9830.9690.9751.0000.9720.9720.9800.9900.9920.9790.992S50.9550.9430.9830.9721.0000.9910.9630.9840.9720.9610.984S60.9600.9540.9750.9720.9911.0000.9660.9880.9760.9690.986S70.9770.9850.9610.9800.9630.9661.0000.9840.9840.9750.989S80.9740.9720.9750.9900.9840.9880.9841.0000.9870.9860.996S90.9890.9750.9740.9920.9720.9760.9840.9871.0000.9710.992S100.9600.9810.9480.9790.9610.9690.9750.9860.9711.0000.985R0.9810.9790.9790.9920.9840.9860.9890.9960.9920.9851.00010批制剂的相似度计算结果

R对照指纹图谱第72页，共115页，2023年，2月20日，星期三第73页，共115页，2023年，2月20日，星期三4.中药生物活性测定利用生物（整体或离体）的反应来测定各种药物的效价、作用强度和毒性的一种方法。第74页，共115页，2023年，2月20日，星期三洋地黄标准品每g含10个效价单位，用鸽子试验致死量为90.5mg/Kg，如检品洋地黄致死量为100mg/kg，两者相比标准品的强度是检品的1.1倍，即检品每g含9.05个效价单位。(中国药典1995年版规定洋地黄叶每g的效价不少于10个效价单位。)90.5×10=100×X，x=9.05第75页，共115页，2023年，2月20日，星期三中药质量标准的发展趋势

从源头做起，存真去伪进行GAP相关探讨，寻找最优药材、饮片、成药的全程质量控制加强基础研究全方位的立体控制第76页，共115页，2023年，2月20日，星期三中药的鉴定基源(原植物、原动物和矿物)鉴定性状鉴定显微鉴定理化鉴定

分子生物学鉴定第77页，共115页，2023年，2月20日，星期三DNA分子鉴定（分子生物学技术）第78页，共115页，2023年，2月20日，星期三DNA分子标记技术的特点遗传稳定性遗传多样性化学稳定性第79页，共115页，2023年，2月20日，星期三第80页，共115页，2023年，2月20日，星期三DNA分子标记的技术方法与原理（1）限制性内切酶酶切片段长度多态性（restrictionfragmentlengthpolymorphism,RFLP）原理：利用特定的限制性内切酶识别并切割基因组DNA，得到大小不等、数量不同的DNA片段，经过凝胶电泳分离这些限制性片段，通过Southern印迹将分子片段转移到支持膜上，用同位素标记的探针进行杂交，经过放射自显影或酶学检测，显示出不同材料的RFLP谱带。第81页，共115页，2023年，2月20日，星期三优点：RFLP标记量大，探针可随机选择，可以是核糖体DNA、叶绿体DNA,也可以是总DNA。缺点：使用同位素；需DNA量较大、操作繁杂、费用高。第82页，共115页，2023年，2月20日，星期三（2）基于聚合酶链式反应的标记技术聚合酶链式反应（polymorasechainreaction,PCR）:以待扩增的两条DNA链为模板，由一对人工合成的寡核苷酸引物介导，通过DNA聚合酶在体外进行DNA序列扩增。PCR在经过变性、复性、延伸过程的约30个循环后，能在短时间内将痕量的靶DNA扩增数百万倍。

优点：操作简便、快速、特异、灵敏，不需使用同位素，对材料要求不严。第83页，共115页，2023年，2月20日，星期三

随机扩增多态性DNA和任意引物PCR(randomamplifiedpolymorphicDNA,

RAPD;arbitraryprimedPCR,

AP-PCR)：适于未知序列的基因组DNA检测

扩增片段长度多态性（amplifiedfragmentlengthpolymorphism,

AFLP）:多态性高、检测可靠；稳定性好，重复性强；反应迟钝、成本高，对技术要求苛刻。

简单序列重复（simplesequencerepeat，SSR）和简单序列重复区间扩增多态性（inter-simplesequencereoeat,

ISSR）:稳定性强、位置确定第84页，共115页，2023年，2月20日，星期三（3）DNA测序方法（DNAsequencing）第85页，共115页，2023年，2月20日，星期三DNA分子标记技术在中药鉴定中的应用第86页，共115页，2023年，2月20日，星期三第87页，共115页，2023年，2月20日，星期三第88页，共115页，2023年，2月20日，星期三

单叶蔓荆ISSR的遗传多样性

A为由引物881扩增14个居群各抽样一个植株；B为由842扩增的随机抽出171个植株中11个的图谱单叶蔓荆扩增出的163条带的分子量位于165bp到2300bp之间第89页，共115页，2023年，2月20日，星期三基于ISSR分析的Nei's遗传距离的单叶蔓荆居群遗传关系聚类图

第90页，共115页，2023年，2月20日，星期三遗传分化与地理距离的关系

14个居群蔓荆的遗传分化与地理距离的Mantal相关分析第91页，共115页，2023年，2月20日，星期三14个居群蔓荆的化学和遗传聚类图

第92页，共115页，2023年，2月20日，星期三第93页，共115页，2023年，2月20日，星期三第94页，共115页，2023年，2月20日，星期三基因芯片技术的应用应用包含拟南芥全基因组的拟南芥cDNA基因芯片，寻找差异表达基因，建立特征基因谱，实现其遗传模式识别应用生物信息处理技术，考察色谱指纹图谱与特征基因谱的相关性，探索遗传本质第95页，共115页，2023年，2月20日，星期三中药材GAP主要内容共包括10章57条，涵盖产地生态环境、种质和繁殖材料、栽培与种植管理、药用动物养殖管理、采收与初加工、包装运输与贮藏、质量管理、人员设备、文件管理等重要内容第96页，共115页，2023年，2月20日，星期三NewTCMProductDeveloped-DanQiTabletWater-solublephenolicacidsLipophilictanshinonesPhenolicacidsSaponinsFlavones,proteins,aminoacidsNotoginsenosidesSanqisaponinsSalviaNotoginseng+第97页，共115页，2023年，2月20日，星期三丹参SalviamiltiorrhizaSalviamiltiorrhiza:LabiataeFamilyChemicalConstituents:

Phenolicacids:tanshensu,protocatechuicaldehyde,salvianolicacidsA,B,C,D,G,I,Hetc.

Tanshinones:tanshinoneIIA,IIB,etc.Pharmacologicalaction:

1.anti-PAF2.anti-oxidation3.anti-bacterial,etc.Clinicalapplication:

Coronaryheartdisease,anginapectoris第98页，共115页，2023年，2月20日，星期三MonomerPhenolicCompoundsIsolatedfromRootsofSalviamiltiorrhizaDimerTrimertetramer第99页，共115页，2023年，2月20日，星期三Quantitativedeterminationof6salvianolicacids

DanshensuProcatechuicaldehydeRosemaricacidLithospermicacidSalBSalADanshenRoots(丹参)DanshenDrippingpill(复方丹参滴丸)第100页，共115页，2023年，2月20日，星期三Quantitativedeterminationof4tanshinonesRepresentativeHPLCchromatogramsof(A)standardsolutionatmediumconcentration,(B)FDT(Xianzhi,Liaoning,China),(C)Danshen(Shanxi,China)1,dihydrotanshinonⅠ;2,cryptotanshinone;3,tanshinoneⅠ;4,tanshinoneIIA.4Referencestandards(4个对照品)FufangDanshenTablets(复方丹参片)Danshenroot(丹参药材)第101页，共115页，2023年，2月20日，星期三ChromatographicfingerprintsofSalviamiltiorrhizaandits