动物细胞工程节培养和核移植

动物细胞工程节培养和核移植第1页，共30页，2023年，2月20日，星期三离体植物器官、组织或细胞愈伤组织胚状体植物体脱（去）分化再分化（芽、根）植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养使用的培养基：

固体有机物（蔗糖）植物激素第2页，共30页，2023年，2月20日，星期三植物体细胞杂交植物细胞A

植物细胞B

去细胞壁原生质体融合杂种细胞愈伤组织杂种植株植物组织培养植物细胞融合1、植物体细胞杂交的结果是产生了？2、这个过程中涉及的原理是？杂种植株细胞膜的流动性植物细胞的全能性第3页，共30页，2023年，2月20日，星期三多莉克隆猴第4页，共30页，2023年，2月20日，星期三动物细胞工程常用的技术手段动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合单克隆抗体动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。第5页，共30页，2023年，2月20日，星期三一、动物细胞培养动物细胞培养动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。第6页，共30页，2023年，2月20日，星期三（一）.过程：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官细胞悬浮液（单个细胞）胰蛋白酶动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。（分解弹性纤维）10代细胞原代培养50代细胞传代培养细胞株无限传代细胞系遗传物质未改变遗传物质改变接触抑制剪碎第7页，共30页，2023年，2月20日，星期三问题：1.为何要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离下来？2.比较动物细胞培养和植物组织培养所用的培养基的成分.3.动物细胞培养是否能像植物细胞一样最终培养成新个体？》第8页，共30页，2023年，2月20日，星期三获得细胞细胞的全能性细胞株、细胞系植物体培养结果或细胞分泌蛋白快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目2、植物组织培养和动物细胞培养的比较第9页，共30页，2023年，2月20日，星期三（二）动物细胞培养条件：1、无菌、无毒的环境（添加一定量的抗生素，定期更换培养液）2、营养（葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。）3、温度和PH

36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、气体环境：

O2和CO2（95%空气和5%CO2

）保证细胞顺利的生长增殖第10页，共30页，2023年，2月20日，星期三（三）.动物细胞培养技术的应用（1）生产蛋白生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。（3）用于检测有毒物质（2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。（4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据第11页，共30页，2023年，2月20日，星期三二、动物体细胞核移植技术和克隆动物:将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。用核移植的方法得到的动物称为克隆动物核移植胚胎细胞核移植体细胞核移植（难度高）受体细胞：MⅡ期的卵母细胞第12页，共30页，2023年，2月20日，星期三卵细胞Ａ母绵羊Ｂ母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植早期胚胎卵裂C母绵羊子宫胚胎移植多莉羊分娩妊娠多莉羊的培育过程融合后的卵细胞第13页，共30页，2023年，2月20日，星期三克隆动物的研究意义1.克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白2.改良动物品种3.治疗人类疾病，作为供体4.保护濒危动物体细胞核移植技术存在的问题：许多克隆动物表现出遗传和生理缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等。第14页，共30页，2023年，2月20日，星期三1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是--------------------（）

A．细胞系B．细胞株

C．原代细胞D．传代细胞2、动物细胞工程技术的基础是------（）

A.动物细胞融合B.单克隆抗体

C.胚胎移植D.动物细胞培养

AD第15页，共30页，2023年，2月20日，星期三3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞（）

A.容易产生各种变异

B．具有更强的全能性

C.取材十分方便

D．分裂增殖的能力强D第16页，共30页，2023年，2月20日，星期三4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于------------------------------（）

A.培养基不同；

B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；

C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；

D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培养成植株。A第17页，共30页，2023年，2月20日，星期三5、动物细胞工程技术的基础是A、动物细胞融合B、胚胎移植C、动物细胞培养D、核移植6、下列不属于克隆的是A、生物体通过体细胞进行的无性繁殖B、将某肿瘤细胞在体外培养繁殖成一个细胞系C、扦插和嫁接D、将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA中第18页，共30页，2023年，2月20日，星期三再见第19页，共30页，2023年，2月20日，星期三三、动物细胞融合第20页，共30页，2023年，2月20日，星期三1.过程：

诱导

细胞膜穿通细胞膜连接细胞融合，形成杂种细胞第21页，共30页，2023年，2月20日，星期三诱导方式物理法化学法生物法：灭活的病毒仙台病毒紫外线丧失感染性（不感染细胞）保留融合活性（诱导细胞融合）2、诱导的过程：第22页，共30页，2023年，2月20日，星期三3、原理细胞膜的流动性4、用途：制备单克隆抗体动物细胞融合相当于植物体细胞杂交的原生质体融合过程

第23页，共30页，2023年，2月20日，星期三三、单克隆抗体单:单个细胞克隆:无性繁殖抗体:化学性质单一、特异性强第24页，共30页，2023年，2月20日，星期三原始的方法获得抗体，特异性差，纯度低。想获得单一抗体，必须用单个B淋巴细胞进行无性繁殖，通过克隆形成细胞群。问题：体外培养的条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增值的，如何使单个淋巴细胞增殖呢？第25页，共30页，2023年，2月20日，星期三设计方案：一个B淋巴细胞－－只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞－－能无限增殖杂种细胞根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的实验方案:第26页，共30页，2023年，2月20日，星期三1、单克隆抗体制备过程

注射抗原效应B淋巴细胞骨髓瘤细胞细胞融合、筛选杂交瘤细胞细胞培养筛选，继续培养足够数量的、能产生特定抗体的细胞群体外培养注射到小鼠腹腔单克隆抗体诱导其融合的方法有哪些？第27页，共30页，2023年，2月20日，星期三

？

？

抗原效应B细胞筛选

筛选

AA型、BB型AB型杂交瘤细胞能产生所需抗体的细胞杂交瘤细胞第28页，共30页，2023年，2月20日，星期三2单克隆抗体的应用：

①在基础理论研究中具有重要意义

②在疾病诊断、治疗和预防方面，与常规抗体相比，具有产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显③作为载体，运载抗癌药物，制成生物导弹第29页，共30页，2023年，2月20日，星期三4